包被精油復(fù)合酸化劑對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、腸道免疫及盲腸微生物的影響

■蔣 志 付 饒 鄭達(dá)文 周響艷 戰(zhàn)曉燕 董澤敏 馮定遠(yuǎn) 左建軍*

(1.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)學(xué)院，廣東廣州510642；2.廈門德福仁生物技術(shù)有限公司，福建廈門361000；3.上海農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物科學(xué)技術(shù)系，上海201699)

仔豬早期斷奶時(shí)母子分離，隨后轉(zhuǎn)入新的欄舍與其他非同窩的豬混群并通過(guò)打斗建立社會(huì)分級(jí)；采食日糧由液態(tài)轉(zhuǎn)變成固態(tài)。這些相互聯(lián)系的應(yīng)激因素導(dǎo)致仔豬腸道穩(wěn)態(tài)的不平衡，尤其是突然的斷奶會(huì)導(dǎo)致腸道形態(tài)學(xué)上的改變、內(nèi)分泌失調(diào)和免疫系統(tǒng)受損[1]。這些都會(huì)導(dǎo)致仔豬轉(zhuǎn)欄后短期拒食，完全饑餓后再大量采食，由此導(dǎo)致胃腸道內(nèi)pH 值偏高[2]，無(wú)法有效抑制仔豬從環(huán)境或飼料中采食到的有害微生物的生長(zhǎng)[3]。而酸化劑理論上可以有效的降低飼料pH值，幫助仔豬避免斷奶時(shí)期胃腸道內(nèi)pH 值偏高的問(wèn)題。近年來(lái)通過(guò)大量的試驗(yàn)研究表明，在動(dòng)物日糧中添加一定量的酸化劑，具有調(diào)控動(dòng)物腸道微生物平衡、增殖有益菌、抑制有害菌、降低腸道pH值、提高動(dòng)物免疫力等功能。此外，酸化劑不污染環(huán)境、無(wú)殘留等優(yōu)良的特性，被稱作新型飼料添加劑，具有廣闊的應(yīng)用前景[3-5]。單酸化劑或者復(fù)合酸化劑添加到飼料中的研究已經(jīng)很多了。但是把酸化劑同植物精油一同包被起來(lái)，應(yīng)用在斷奶仔豬生產(chǎn)上，以提高畜體后小腸健康的產(chǎn)品的文章在國(guó)內(nèi)幾乎沒(méi)有報(bào)道。本文通過(guò)研究斷奶仔豬生長(zhǎng)性能、免疫相關(guān)指標(biāo)和盲腸微生物絕對(duì)數(shù)量，為包被精油復(fù)合酸(MEA)類產(chǎn)品的開發(fā)與應(yīng)用提供更全面的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

本試驗(yàn)所用MEA均為植物氫化脂肪作為微囊外殼包被檸檬酸、山梨酸、百里香酚以及香蘭素，共45%的活性成分。MEA1 為肇慶市某豬場(chǎng)自用，MEA2 由廈門某公司提供。飼養(yǎng)試驗(yàn)在肇慶市某豬場(chǎng)進(jìn)行。

1.2 試驗(yàn)動(dòng)物及日糧

試驗(yàn)動(dòng)物選用250 頭健康(21±3)日齡“杜×(長(zhǎng)×大)丹系”三元雜交豬，基礎(chǔ)日糧為玉米-豆粕型商業(yè)日糧，其組成及營(yíng)養(yǎng)水平見(jiàn)表1。

1.3 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與飼養(yǎng)管理

選擇體重5.5 kg 左右的杜長(zhǎng)大丹系三元雜交豬250 頭仔豬，按飼養(yǎng)試驗(yàn)要求隨機(jī)分為5 組，每組設(shè)5 個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)10頭豬，公母各半，分別飼喂基礎(chǔ)日糧（BASE 組）、基礎(chǔ)日糧+ 0.05% MEA2（LA 組）、基礎(chǔ)日糧+0.08% MEA2（MA組）、基礎(chǔ)日糧+0.2% MEA1（HA 組）、基礎(chǔ)日糧+0.2% MEA1+0.05% MEA2（BHA組）。試驗(yàn)期間豬只自由采食，自由飲水。試驗(yàn)預(yù)試期3 d，正試期為21 d 期間獸醫(yī)和疫苗程序遵循試驗(yàn)場(chǎng)自行的規(guī)章制度進(jìn)行。試驗(yàn)期間記錄每個(gè)重復(fù)的料耗，飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，禁食（自由飲水）12 h后稱重，計(jì)算試驗(yàn)豬的日平均采食量、日增重和料重比。

1.4 屠宰試驗(yàn)

飼養(yǎng)試驗(yàn)結(jié)束后，從每個(gè)重復(fù)中選體重相近的豬各5頭，共25頭，在禁食（自由飲水）12 h后進(jìn)行屠宰。

1.5 樣品收集

試驗(yàn)結(jié)束后每個(gè)重復(fù)隨機(jī)選擇1頭、每個(gè)處理組5 頭仔豬屠宰，共25 頭，每頭樣本仔豬被電擊至?xí)灪?，無(wú)菌采集靜脈血10 ml 注入不加肝素鈉的采血管內(nèi)，樣品置于常溫2 h，待血液凝固后分離血清，血清-20 ℃保存，用于分析白介素2（IL-2）以及免疫球蛋白（IgG）。準(zhǔn)備無(wú)菌的10 ml離心管數(shù)只，待屠宰仔豬靜脈放血后剖腹，以胃幽門末端開始有胰腺附著的腸道即為十二指腸，十二指腸向后腸道延伸兩米即為空腸中段，盲腸向前腸道一米即為回腸中段。對(duì)十二指腸、空腸中段、回腸中段、盲腸用棉線兩頭結(jié)扎。在各腸道中部先取腸道組織樣，然后在各腸中部用10 ml 離心管收集10 g 左右食糜液氮速凍，帶回實(shí)驗(yàn)室-80 ℃冰箱保存。

表1 基礎(chǔ)日糧組成和營(yíng)養(yǎng)水平(風(fēng)干基礎(chǔ))

1.6 生長(zhǎng)性能指標(biāo)測(cè)定

①平均日采食量(ADFI)：一共25個(gè)欄，以每一欄為一個(gè)單位準(zhǔn)確記錄總飼喂量，最終計(jì)算各試驗(yàn)組平均日采食量。平均日采食量（g）=（投料總量-剩料量）/（試驗(yàn)豬數(shù)×飼喂天數(shù)）

②平均日增重(ADG)：以欄為單位，試驗(yàn)開始時(shí)做好仔豬21 日齡的稱重，并記錄好45 日齡仔豬的稱重，稱重前夜21：00 不喂料，隔天早上8：00 開始稱重。所得初重、末重計(jì)算各試驗(yàn)組的總增重和平均日增重。平均日增重（g）=（平均末重-平均初重）/飼養(yǎng)天數(shù)

③飼料轉(zhuǎn)化效率(F/G)：指每頭仔豬體重增加1 kg所需要的日糧重量，是評(píng)價(jià)其飼料利用率的重要指標(biāo)。飼料轉(zhuǎn)化效率(F/G)=ADFI/ADG

④臟器指數(shù)(g/kg)=內(nèi)臟重量(g)/宰前活重(kg)

1.7 腸道pH值測(cè)定

在采樣時(shí)直接用DELTA320 梅特勒—托利多pH儀器測(cè)定，取各腸道中部樣品測(cè)定pH值。

1.8 免疫相關(guān)指標(biāo)的測(cè)定

本次試驗(yàn)采用南京建成血清白介素2（IL-2）血清免疫球蛋白G（IgG）、分泌型免疫球蛋白A（SlgA）ELISA 試劑盒進(jìn)行分析測(cè)定，嚴(yán)格按照試劑盒使用說(shuō)明書操作執(zhí)行?？俁NA 抽提使用Trizol 法，使用Takara 逆轉(zhuǎn)錄試劑盒獲取cDNA，然后用ABI7500 實(shí)時(shí)熒光PCR 定量?jī)x器及SYBRGreen 染料體系對(duì)所得cDNA 進(jìn)行基因表達(dá)強(qiáng)度測(cè)定，所得結(jié)果按照2-△△Ct方法計(jì)算，選取乳酸脫氫酶（GAPDH）為內(nèi)參基因，緊密連接蛋白（ZO-1、Occludin）、白介素10（IL-10）為目的基因，各基因上下游引物及PCR 反應(yīng)參數(shù)見(jiàn)表2。

1.9 盲腸食糜微生物的定量檢測(cè)

采樣北京天根生物科技有限公司糞便微生物DNA 提取試劑盒。得到盲腸糞便DNA 后，使用ABI7500 實(shí)時(shí)熒光PCR 定量?jī)x器及SYBRGreen 染料體系根據(jù)用各目的菌基因的純化PCR 產(chǎn)物以Lg（拷貝數(shù)）為X 軸，以CT 值為Y 軸制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，再根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線和各重復(fù)目的菌的CT值套入標(biāo)準(zhǔn)曲線內(nèi)得到絕對(duì)細(xì)菌數(shù)，默認(rèn)一個(gè)菌等于一個(gè)拷貝數(shù)。拷貝數(shù)計(jì)算公式為：拷貝數(shù)=(C×6.023 3×1023copies/mol)/（S×660×106）。公式中的C 表示標(biāo)準(zhǔn)品濃度，單位μg/μl，S 表示待測(cè)細(xì)菌基因組DNA 的定量PCR 產(chǎn)物的堿基數(shù)。所用引物由上海生物工程有限公司合成，用梯度PCR儀器摸索各基因最佳退火溫度，各基因上下游引物及PCR反應(yīng)參數(shù)見(jiàn)表2。

GAPDH、Occludin、ZO-1、IL-10 引物設(shè)計(jì)參考Chen 等(2018)[6]發(fā)表的文章，總菌、大腸桿菌、沙門氏菌、乳酸桿菌、雙歧桿菌引物設(shè)計(jì)參考Zhang 等(2016)[7]發(fā)表的文章。

1.10 數(shù)據(jù)處理

結(jié)果以“平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤”表示，數(shù)據(jù)處理與分析采用SPSS20.0軟件,用單因素方差分析和一元線性回歸分析處理試驗(yàn)數(shù)據(jù)，以P＜0.05作為差異顯著性判斷標(biāo)準(zhǔn)，以0.05＜P＜0.10作為差異有趨勢(shì)判斷標(biāo)準(zhǔn)。

2 試驗(yàn)結(jié)果

表2 各基因引物序列

2.1 斷奶仔豬生長(zhǎng)性能

見(jiàn)表3 可見(jiàn)，各組間日增重、日采食量和料重比無(wú)明顯變化（P＞0.05）。

2.2 斷奶仔豬內(nèi)臟器官相對(duì)重量

表3 MEA對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

由表4 可見(jiàn)，LA、MA 組肝臟指數(shù)顯著低于BASE組（P＜0.05）。

2.3 腸道pH值

由表5 可見(jiàn)，空腸MA 組pH 值有高于LA 組趨勢(shì)（P=0.06），回腸BASE、LA 組、MA 組顯著高于BHA 組（P＜0.05），其余部位組間無(wú)顯著差異(P＞0.05)。

表4 MEA對(duì)斷奶仔豬臟器指數(shù)的影響(g/kg)

表5 MEA對(duì)斷奶仔豬腸道pH值的影響

表6 回腸pH值與MEA的一元線性回歸分析

由表6 可見(jiàn)，對(duì)回腸pH 值與MEA 添加量進(jìn)行一元線性回歸，回腸pH值與MEA添加量相關(guān)性為極顯著（P＜0.01），回腸pH值與MEA回歸系數(shù)極顯著（P＜0.01）。

2.4 免疫相關(guān)指標(biāo)

圖1 MEA對(duì)斷奶仔豬血清免疫球蛋白(IgG)的影響

圖2 MEA對(duì)斷奶仔豬血清白介素2(IL-2)的影響

圖3 MEA對(duì)斷奶仔豬空腸分泌型免疫球蛋白A(SIgA)的影響

由圖1 可知，血清免疫球蛋白G：LA 組有低于BASE組的趨勢(shì)（P=0.083），MA組有高于LA組的趨勢(shì)（P=0.069），MA組顯著高于HA組（P＜0.05）。由圖2可知，各組間血清IL-2含量無(wú)顯著差異（P＞0.05）。由圖3 可知，各組間空腸SIgA 分泌量無(wú)顯著差異（P＞0.05）。由圖4 可知，各組間回腸Occludin 基因mRNA相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異（P＞0.05）。由圖5可知，ZO-1基因相對(duì)表達(dá)量：MA 組較BASE 組顯著上調(diào)（P＜0.05），MA組基因較BHA組顯著上調(diào)（P＜0.05）。由圖6可知，IL-10基因相對(duì)表達(dá)量：MA組較BASE組有上調(diào)的趨勢(shì)（P=0.092）。

圖4 MEA對(duì)斷奶仔豬回腸緊密連接蛋白（Occludin）基因相對(duì)表達(dá)量的影響

圖5 MEA對(duì)斷奶仔豬回腸緊密連接蛋白（ZO-1）基因相對(duì)表達(dá)量的影響

圖6 MEA對(duì)斷奶仔豬回腸白介素10（IL-10）基因相對(duì)表達(dá)量的影響

2.5 盲腸微生物

由表7 可見(jiàn)，雙歧桿菌：MA 組有高于對(duì)照組的趨勢(shì)(P=0.066)，MA 組顯著高于LA 組（P＜0.05），其他各菌種、各組間無(wú)差異（P＞0.05）。

3 討論

3.1 MEA對(duì)斷奶仔豬生長(zhǎng)性能的影響

表7 MEA對(duì)斷奶仔豬盲腸微生物的影響

經(jīng)歷過(guò)早期斷奶的仔豬，由于其消化系統(tǒng)尚未成熟，神經(jīng)和內(nèi)分泌對(duì)于消化系統(tǒng)的調(diào)控不是很完善，因此斷奶后胃腸道pH 值較同日齡的哺乳仔豬會(huì)升高。斷奶應(yīng)激下胃腸道pH 值偏高會(huì)導(dǎo)致后腸道大腸桿菌數(shù)量增加、沙門氏菌等酸敏感有害菌大量生長(zhǎng)從而導(dǎo)致腹瀉[4，8]。在生產(chǎn)實(shí)踐中一般選用抗生素添加到飼料中從而達(dá)到抑菌促進(jìn)生長(zhǎng)的作用，隨著抗生素在飼料中添加的進(jìn)一步被限制，我們選擇了利用包被酸化劑降低后腸道pH 值且配伍植物精油，用于滅殺動(dòng)物后腸道內(nèi)的有害微生物，進(jìn)而保護(hù)動(dòng)物的后腸道健康。在本次試驗(yàn)中，雖然LA、MA 組肝臟指數(shù)均顯著低于BASE 組（P＜0.05），但無(wú)論是MEA1 還是MEA2 的添加都沒(méi)有對(duì)試驗(yàn)豬只的生長(zhǎng)性能起到顯著作用(P＞0.05)。結(jié)果與張玲玲(2018)[9]、Cho 等(2015)[10]等的實(shí)驗(yàn)結(jié)果一致，即在有抗生素的情況下添加0.2%、0.3%、0.5%和1%的MEA 與抗生素組相比，生長(zhǎng)性能無(wú)差異。與抗生素組相比肉雞飼糧添加0.15%、0.20%、0.25%MEA 對(duì)肉雞生長(zhǎng)性能、免疫器官指數(shù)也無(wú)影響[11]。但當(dāng)斷奶仔豬試驗(yàn)天數(shù)延長(zhǎng)到22 周時(shí)，在飼料中添加0.1%或0.2%的MEA較對(duì)照組相比平均日增重、平均日采食量和飼料效率比均顯著提高[12]。這給了我們兩個(gè)提示，一個(gè)是在斷奶仔豬階段MEA 與抗生素的對(duì)比無(wú)顯著差異，其可能的提高腸道健康的功能無(wú)法直接顯示到生長(zhǎng)性能數(shù)據(jù)上，若把試驗(yàn)期延長(zhǎng)到育肥階段，MED 的保護(hù)腸道健康的功能可能會(huì)顯現(xiàn)出來(lái)；第二個(gè)是MEA或許可以作為一種添加到中大豬飼料中的綠色促生長(zhǎng)劑。

3.2 MEA對(duì)斷奶仔豬腸道pH值的影響

飼用酸化劑的重要理論目標(biāo)即為降低畜體胃腸道pH值。而相關(guān)產(chǎn)品在使用時(shí)往往會(huì)因?yàn)樗峄瘎┓N類特性、配伍比例、是否包被以及添加量等因素影響著試驗(yàn)結(jié)果。Piva等（2007）[4]用包被的香草醛混合山梨酸（MBP）和未包被的香草醛混合山梨酸（NBP）飼喂斷奶仔豬，發(fā)現(xiàn)兩組間香草醛或山梨酸濃度在胃內(nèi)沒(méi)有差異。而NBP 組在空腸檢出的山梨酸和香草醛濃度與胃內(nèi)的相比顯著減少，同時(shí)MBP 組腸道中香草醛或山梨酸濃度顯著高于NBP 組。Gomes 等（2011）[13]用富馬酸、乳酸、丙酸鈣聯(lián)用進(jìn)行了斷奶仔豬試驗(yàn)，結(jié)果對(duì)于胃和空腸的pH 值沒(méi)有觀察到處理之間的顯著差異。朱宇旌等（2012）[14]在肉雞基礎(chǔ)日糧中分別添加0.03%的由富馬酸、乳酸、檸檬酸、蘋果酸為活性單位的包被有機(jī)酸，和0.05%包被有機(jī)酸，發(fā)現(xiàn)各組胃腸道pH值差異不顯著。而晏家友（2009）[3]用延胡索酸、乳酸、檸檬酸和蘋果酸組成的0.05%到0.2%的包被酸化劑無(wú)論是和抗生素組比還是非抗生素組的基礎(chǔ)日糧相比均顯著降低了斷奶仔豬胃和小腸的pH 值，許麗惠等（2016）[15]用檸檬酸、乳酸、磷酸組成的0.3%及0.5%包被酸化劑飼喂黃羽肉雞觀測(cè)到十二指腸、腺胃pH 值顯著低于對(duì)照組。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，隨著MEA 化劑總添加量的增加，斷奶仔豬胃、十二指腸、空腸pH值均無(wú)顯著變化（P＞0.05），但在回腸部位BHA組pH值顯著低于BASE組、LA組、MA組（P＜0.05），且回腸部位BHA 組pH 值也比HA 組低了5.65%（P＞0.05），根據(jù)一元線性回歸分析結(jié)果所示，隨著總MEA在飼料中添加量的增加，回腸pH值逐漸降低（P＜0.01）。

由此可見(jiàn)，酸化劑的不同配伍、包被技術(shù)以及添加量會(huì)直接影響到試驗(yàn)結(jié)果，本次試驗(yàn)用MEA 均為氫化脂肪微囊包被，在動(dòng)物體內(nèi)經(jīng)脂肪酶水解包被材料，主要在動(dòng)物后小腸釋放。因此試驗(yàn)數(shù)據(jù)觀測(cè)到在胃、十二指腸、空腸pH 值均無(wú)顯著變化，但顯著降低了回腸的pH值（P＜0.05)，且在0～0.25%的區(qū)間有劑量依賴效應(yīng)（P＜0.01）。

3.3 MEA對(duì)斷奶仔豬免疫力的影響及其機(jī)理

動(dòng)物在采食時(shí)，會(huì)不斷地從飼料或者飲水中攝入病原體，這部分病原體直接面對(duì)的就是畜體的胃腸道。緊密連接蛋白ZO-1和Occludin位于腸上皮細(xì)胞間隙，可通過(guò)旁細(xì)胞途徑調(diào)節(jié)腸溶質(zhì)和水進(jìn)出腸細(xì)胞[16]，他們是腸道本身的物理防御屏障結(jié)構(gòu)蛋白，當(dāng)他們表達(dá)量降低時(shí)可說(shuō)明細(xì)胞間緊密連接的狀態(tài)變差，因此ZO-1、Occludin 基因的mRNA 相對(duì)表達(dá)量可以用來(lái)作為腸道健康的指標(biāo)[17-18]。當(dāng)病原體“定植”在腸道黏膜上進(jìn)而侵染畜體或在畜體腸道內(nèi)營(yíng)寄生生活時(shí)，動(dòng)物腸道作為最大的能起到免疫功能的器官會(huì)通過(guò)一些炎癥反應(yīng)來(lái)產(chǎn)生特定的抗體清除掉腸腔內(nèi)的病原體。為此我們挑選了血清促炎因子IL-2和與緊密連接蛋白表達(dá)相關(guān)的抑炎因子IL-10[5]，具有中和病原菌毒素能力的抗炎因子SIgA[19]以及大家公認(rèn)的血清IgG 免疫球蛋白來(lái)綜合評(píng)價(jià)斷奶仔豬腸道免疫能力。本次試驗(yàn)各組間血清IL-2，回腸Occludin mRNA 相對(duì)表達(dá)量與空腸SlgA 差異均不顯著(P＞0.05)。但血清IgG在BASE組基礎(chǔ)上添加0.08%MEA2的MA 組較添加0.2%MEA1 的HA 組顯著增加；較添加0.05%MEA2 的LA 組有升高的趨勢(shì)（P=0.069）。結(jié)果與Han 等（2019）[20]用MEA 作為飼料添加劑從斷奶仔豬階段一直飼喂到育肥豬階段發(fā)現(xiàn)MEA組血清免疫球蛋白G顯著增加；孫代鵬等（2018）[21]在斷奶仔豬飼料中添加肉桂醛和百里香酚組可以提高仔豬血清中IgG 水平；王宇（2017）[5]在斷奶仔豬飼料中添加1%的綠原酸血清免疫球蛋白G 含量較0.25%綠原酸組顯著升高(P＜0.05)，與王亞男（2017）[19]的對(duì)照組、抗生素組、0.2%包被精油組之間小腸IL-10mRNA 相對(duì)表達(dá)量無(wú)顯著差異，空腸SlgA 精油組與對(duì)照組相比差異顯著略有差異，但本次結(jié)果回腸SlgA 在數(shù)值上也是隨著MEA 的添加而增加，但結(jié)果不顯著（P＞0.05）?？梢?jiàn)在斷奶仔豬飼糧中添加0.08%的MEA2可能會(huì)通過(guò)促進(jìn)血清IgG 的分泌進(jìn)而起到提升其體液免疫力的作用。

有研究者用輪狀病毒對(duì)斷奶仔豬攻毒，18天后檢測(cè)到小組回腸黏膜中閉鎖小帶蛋白-1(ZO-1)、閉合蛋白(Occludin)的表達(dá)量顯著降低了(P＜0.05)[22]。類似的，王若瑾（2013）[23]用雙氧水建立大鼠應(yīng)激模型后發(fā)現(xiàn)對(duì)照組大鼠腸道Occludin mRNA 相對(duì)表達(dá)豐度極顯著的高于應(yīng)激組(P＜0.01)，而止痢草油組顯著高于應(yīng)激組(P＜0.05)，ZO-1 mRNA相對(duì)表達(dá)豐度應(yīng)激組和OEO組均顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)；Yan等（2018）[24]總結(jié)，被大腸桿菌K88 感染的仔豬腸道ZO-1 表達(dá)量顯著降低，而用丁酸梭菌預(yù)處理處理的仔豬腸道ZO-1蛋白表達(dá)顯著增加。這似乎預(yù)示著當(dāng)動(dòng)物體在受到病毒、氧化應(yīng)激或致病性細(xì)菌的侵襲時(shí)，其緊密連接蛋白會(huì)遭到破壞，而高的緊密連接蛋白相對(duì)表達(dá)量對(duì)于健康畜體抵抗病原體是有益的。本次試驗(yàn)中MA組回腸IL-10基因相對(duì)表達(dá)量較BASE組有上調(diào)的趨勢(shì)（P=0.094），MA 組回腸ZO-1 基因相對(duì)表達(dá)量較BASE 組、BHA 組顯著上調(diào)（P＜0.05）。有研究者用未包被的有機(jī)酸添加到飼料中發(fā)現(xiàn)小腸ZO-1、Occludin無(wú)差異[5]。說(shuō)明對(duì)精油或有機(jī)酸進(jìn)行包被還是有必要的，MEA2在BASE組中添加量為0.08%時(shí)可以提高腸道ZO-1mRNA基因相對(duì)表達(dá)量；IL-10基因相對(duì)表達(dá)量結(jié)果趨勢(shì)亦相同，說(shuō)明MEA2 添加量在0.08%時(shí)有提高腸道物理屏障免疫能力的趨勢(shì)。但是BHA的較MA 組相比ZO-1mRNA 基因相對(duì)表達(dá)量降低（0.05＜P＜0.10），說(shuō)明本次試驗(yàn)用MEA 的總添加量不宜達(dá)到0.45%。

3.4 MEA對(duì)斷奶仔豬盲腸微生物的影響及其機(jī)理

在養(yǎng)殖條件下畜體在出生后，其腸道內(nèi)主要優(yōu)勢(shì)菌為雙歧桿菌等厭氧菌，但斷奶應(yīng)激會(huì)破壞該菌群的動(dòng)態(tài)平衡，使大腸桿菌、腸球菌等兼性厭氧菌等占優(yōu)勢(shì)，隨著發(fā)育的成熟，厭氧菌再重新占據(jù)優(yōu)勢(shì)[25]。在斷奶期間給仔豬腸道內(nèi)投放一定量酸化劑和精油或許可以抑制有害菌的生長(zhǎng)，而促進(jìn)腸道正常菌群的盡早建立。Piva等（2007）[4]拿用氫化脂肪包被（PB）和未包被（NPB）的香草醛混合山梨酸飼喂斷奶仔豬，發(fā)現(xiàn)在盲腸和空腸末端PB比對(duì)照組大腸桿菌數(shù)更少。朱宇旌等（2012）[14]用0.05% MEA 組盲腸雙歧桿菌數(shù)量極顯著高于其他各組(P＜0.01)，有文章表明在斷奶仔豬日糧中添加香芹酚、肉桂醛和辣椒油與甲酸混合的添加劑，改變了盲腸和結(jié)腸中的揮發(fā)性脂肪酸譜，進(jìn)而有效改變胃腸道生態(tài)系統(tǒng)[26]。本試驗(yàn)MA組盲腸大腸桿菌和沙門氏菌只有在數(shù)值上低于BASE 組，并沒(méi)有達(dá)到差異顯著，但MA 組盲腸雙歧桿菌有高于BASE的趨勢(shì)(P=0.066)、MA組盲腸雙歧桿菌顯著高于LA 組。說(shuō)明MEA2 在斷奶仔豬日糧中添加量為0.08%時(shí)可能通過(guò)促進(jìn)雙歧桿菌這一類完全厭氧菌的生長(zhǎng)，進(jìn)而達(dá)到對(duì)大腸桿菌、沙門氏菌等兼性厭氧菌的抑制效果。

4 結(jié)論

①飼料中添加包被精油復(fù)合酸化劑2 可以顯著降低斷奶仔豬肝臟指數(shù)。

②飼料中添加包被精油復(fù)合酸化劑可以顯著降低斷奶仔豬回腸pH值，且有劑量依賴效應(yīng)。

③飼料中添加0.08%的包被精油復(fù)合酸化劑2有增加斷奶仔豬免疫力的趨勢(shì)。

④飼料中添加0.08%的包被精油復(fù)合酸化劑2可以改善斷奶仔豬盲腸微生物菌群結(jié)構(gòu)。