液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定山藥中10種殺菌劑殘留

朱麗婷，王華珍，王峰，陳志民，盧軍，黃梅英，章舒祺

(麗水藍(lán)城農(nóng)科檢測(cè)技術(shù)有限公司，浙江 麗水 323000)

山藥又叫薯蕷、土薯、薯藥等，是人類很常用的食材之一?，F(xiàn)代藥理研究表明，山藥中含有人體需要的多種氨基酸、維生素和粘液質(zhì)等，具有提高免疫功能、改善消化功能、降血糖、降血脂、抗氧化、延緩衰老、抗腫瘤、抗突變、促進(jìn)腎臟再生修復(fù)、調(diào)節(jié)酸堿平衡等藥理作用[1]。不少人會(huì)用山藥進(jìn)行煲湯或烹飪，煲湯軟糯，炒菜酥脆，深受人們喜愛(ài)。山藥含有大量的粘液和淀粉，若受潮則易變軟發(fā)粘，2周左右就會(huì)發(fā)霉，皮色變黃，并極易生蟲，因此，不便于長(zhǎng)時(shí)間的運(yùn)輸和貯藏。近年來(lái)發(fā)現(xiàn)，一些不法商販為了在山藥貯藏和運(yùn)輸過(guò)程中保持其新鮮和不易腐爛，違規(guī)對(duì)其噴灑了殺菌劑。殺菌劑雖具有高效、廣譜、低毒等優(yōu)點(diǎn)，但長(zhǎng)期攝入，會(huì)對(duì)人體健康造成潛在的危害[2]。目前，美國(guó)、歐盟等許多國(guó)家和組織均制定了殺菌劑在農(nóng)產(chǎn)品和食品中的最高殘留限量(MRL)[3]。因此，隨著食品安全日益受到重視，為保障農(nóng)產(chǎn)品的質(zhì)量安全，迫切需要建立一種簡(jiǎn)單、快速、高效且可用于山藥中多種殺菌劑同時(shí)檢測(cè)的試驗(yàn)方法對(duì)農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留進(jìn)行有效監(jiān)控。

目前國(guó)內(nèi)殺菌劑的殘留檢測(cè)主要以草莓、楊梅、黃瓜等單種水果蔬菜為主[2-8]，對(duì)山藥的檢測(cè)研究基本以化學(xué)成分及營(yíng)養(yǎng)價(jià)值為主[9-15]，對(duì)山藥中殺菌劑的測(cè)定未見(jiàn)報(bào)導(dǎo)。本文利用液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀抗干擾能力強(qiáng)且快速、準(zhǔn)確等特點(diǎn)，建立了同時(shí)測(cè)定山藥中多菌靈、嘧霉胺等10種典型殺菌劑的分析方法，并應(yīng)用于實(shí)際的樣品分析中。結(jié)果表明，該方法簡(jiǎn)單、快速，完全滿足日常檢測(cè)的需求。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑

安捷倫液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜儀(G6460C系列)配1290液相、SORVALL高速冷凍離心機(jī)(美國(guó)Thermo公司)；PSA、C18、炭黑等凈化材料(上海安譜科學(xué)儀器有限公司)；霜霉威、多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈、抑霉唑、嘧霉胺、啶酰菌胺、腈菌唑、咪鮮胺、肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)品(均為液體標(biāo)準(zhǔn)品，濃度為1 000 mg·L-1，天津農(nóng)業(yè)部環(huán)境保護(hù)科研監(jiān)測(cè)所)；乙腈色譜級(jí)、氯化鈉和無(wú)水硫酸鎂均為分析純，水為超純水。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配置

準(zhǔn)確吸取霜霉威、多菌靈、噻菌靈、甲基硫菌靈、抑霉唑、嘧霉胺、啶酰菌胺、腈菌唑、咪鮮胺、肟菌酯標(biāo)準(zhǔn)溶液各1.0 mL于100 mL棕色容量瓶中，用乙腈稀釋定容到100 mL，配置成10.0 mg·L-1的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液，于0～4 ℃保存。

1.3 檢測(cè)條件

色譜柱為Agilent Eslipse Plus C18RRHD(2.1 m×50 mm，1.8 μm)，流動(dòng)相A為甲醇，B為2 mmol·L-1醋酸銨水溶液(含0.1%甲酸)，柱溫30 ℃。洗脫模式見(jiàn)表1。

表1 檢測(cè)中梯度洗脫比例

電噴霧正離子掃描(ESI+)。毛細(xì)管電壓4 500 V，干燥氣溫320 ℃，流速10 L·min-1，碰撞氣為氮?dú)猓F化器壓力40 psi，多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)模式。多菌靈、嘧霉胺等10種殺菌劑的母離子、子離子和碰撞能量見(jiàn)表2。

1.4 樣品前處理

稱取勻漿后的山藥5.0 g樣品于50 mL離心管中，加入乙腈10 mL，渦旋混勻0.5 min，然后加入1.5 g氯化鈉和4.0 g無(wú)水硫酸鎂，渦旋混勻2 min，超聲提取3.0 min，以6 000 r·min-1離心3 min，準(zhǔn)確吸取1.0 mL上清液置于1.5 mL離心管中，加入50 mg C18，混勻，于10 000 r·min-1離心3 min，準(zhǔn)確吸取0.2 mL上清液，加入0.8 mL純水，混勻，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，供液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀測(cè)定。

表2 10種殺菌劑的定性定量離子對(duì)、碎裂電壓、 碰撞能量和保留時(shí)間

注：*表示定量離子對(duì)，未標(biāo)的為定性離子對(duì)。

2 結(jié)果與分析

2.1 圖譜分析

在本試驗(yàn)條件下，多菌靈等10種殺菌劑在9.0 min內(nèi)能得到較好的分離，標(biāo)準(zhǔn)液的總離子流圖(TIC)如圖1所示。

圖1 10種殺菌劑的TIC圖譜

2.2 凈化材料的選擇

山藥中含有黏蛋白、淀粉酶、皂苷、游離氨基酸、多酚氧化酶等化合物及礦物質(zhì)，且含量較為豐富。為減少液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜測(cè)定時(shí)的基質(zhì)效應(yīng)，分別選取PSA(N-丙基乙二胺)、C18、炭黑等3種常用于農(nóng)藥殘留分析過(guò)程中使用的吸附劑用于凈化條件優(yōu)化。首先考察3種粉末對(duì)10種化合物的吸附作用。分別稱取50 mg凈化粉末，加入0.1 mg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液，每種材料平行操作3次，離心后取上清液經(jīng)水稀釋1倍后進(jìn)樣分析。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，加入炭黑后，其粉末對(duì)10種化合物均產(chǎn)生不同程度的吸附；而加入PSA和C18后，兩種化合物響應(yīng)值與標(biāo)樣相當(dāng)。故選取PSA和C18為試驗(yàn)凈化材料。

采用分別經(jīng)PSA和C18凈化后的提取液配制基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線，通過(guò)基質(zhì)標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率a與溶劑標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率b比值研究其基質(zhì)效應(yīng)。表3表明，經(jīng)C18凈化的提取液中10種殺菌劑的基質(zhì)效應(yīng)均較大，說(shuō)明C18的去雜質(zhì)能力較弱；而經(jīng)PSA凈化的提取液中，僅甲基硫菌靈的基質(zhì)效應(yīng)較大，其他目標(biāo)物基質(zhì)效應(yīng)0.85～1.09，因此，選用PAS作為凈化材料。

表3 不同稀釋倍數(shù)的基質(zhì)效應(yīng)(a/b)

2.3 稀釋倍數(shù)的選擇

參照前處理的步驟對(duì)山藥樣品進(jìn)行前處理，加入PSA凈化后，對(duì)提取液采用不同稀釋比例(1、5、10倍)進(jìn)行稀釋以研究其基質(zhì)效應(yīng)。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，提取液稀釋后，甲基硫菌靈的基質(zhì)效應(yīng)明顯降低。當(dāng)提取液稀釋10倍時(shí)，基質(zhì)效應(yīng)與5倍稀釋時(shí)的基質(zhì)效應(yīng)相差不大。為兼顧儀器靈敏度，本方法選取提取液5倍稀釋進(jìn)行試驗(yàn)。

2.4 方法的標(biāo)準(zhǔn)曲線

分別配置0.5、1.0、5.0、10.0、20.0、50.0 μg·L-1的混合標(biāo)準(zhǔn)溶液。以濃度為橫坐標(biāo)，峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，進(jìn)行線形回歸。結(jié)果表明，10種殺菌劑的線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r)不低于0.993。本方法符合試驗(yàn)要求，可用于實(shí)際樣品的定量分析?；貧w方程見(jiàn)表4。并在該試驗(yàn)條件下，分別以3倍信噪比(S/N=3)和10倍信噪比(S/N=10)來(lái)計(jì)算方法的檢出限(LOD)和定量限(LOQ)。

表4 不同殺菌劑的線性和靈敏度

2.5 方法精密度、準(zhǔn)確度和回收試驗(yàn)

選取空白山藥基質(zhì)，在基質(zhì)中分別添加濃度為10.0、50.0和100.0 μg·kg-1的標(biāo)品做回收率試驗(yàn)，每個(gè)濃度操作6個(gè)平行試驗(yàn)，按照1.4節(jié)所述步驟處理后進(jìn)樣，計(jì)算各添加濃度的回收率和相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)。在該試驗(yàn)條件下，添加濃度為10.0 μg·kg-1，10種殺菌劑的回收率為88.6%～105.5%，RSD為2.7%～8.3%；添加濃度為50.0 μg·kg-1，10種殺菌劑的回收率為89.6%～104.8%，RSD為1.2%～7.9%；添加濃度為100.0 μg·kg-1，10種殺菌劑的回收率為94.3%～104.7%，RSD為1.9%～9.1%(表5)。

表5 殺菌劑不同添加濃度下的回收情況

2.6 實(shí)際樣品分析

利用該方法對(duì)在農(nóng)貿(mào)市場(chǎng)、超市隨機(jī)購(gòu)買的15批次山藥樣品進(jìn)行10種殺菌劑殘留量的測(cè)定，結(jié)果從2批次的山藥樣品中檢出多菌靈和嘧霉胺，測(cè)定值分別為2.51×102和1.03×103μg·kg-1，其余8種殺菌劑未檢出。

3 小結(jié)

通過(guò)建立快速測(cè)定山藥中10種殺菌劑殘留的LC-MS/MS分析方法，對(duì)于上述10種殺菌劑，本方法回收率為88.6%～105.5%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為1.2%～9.1%，10種化合物檢測(cè)限為0.05～0.31 μg·kg-1，定量限為0.10～0.62 μg·kg-1。該試驗(yàn)方法有效的減少了基質(zhì)對(duì)10種殺菌劑測(cè)定的干擾，且前處理簡(jiǎn)單，具有快速高效等特點(diǎn)，可用于山藥中10種殺菌劑殘留的快速篩查。