咪鮮胺對(duì)楊梅的殘留試驗(yàn)

趙梅勤，梁赤周，徐雅飛，陳淑娟

(1.浙江天豐生物科學(xué)有限公司，浙江 金華 321025； 2.浙江省農(nóng)藥檢定管理總站，浙江 杭州 310020)

楊梅(Myriarubra)是中國(guó)南方一種特色的水果，種植歷史悠久，經(jīng)濟(jì)收益較高，是很多山區(qū)人民致富的途徑。近年來(lái)，隨著楊梅栽培面積不斷擴(kuò)大，田間精細(xì)化管理水平提高，楊梅褐斑病(MycosphaerellaMyricaeSaw)等病蟲(chóng)發(fā)生危害也日益加重[1]。楊梅褐斑病是一種由真菌引起的病害，主要危害葉片，是楊梅的主要病害，分布很廣，不同品種上均有發(fā)生，近年來(lái)浙江省東魁楊梅的發(fā)病率為30%～50%，管理粗放的果園發(fā)病率高達(dá)80%以上，對(duì)楊梅產(chǎn)量和品質(zhì)影響極大[2]。咪鮮胺是一種廣譜性的麥角甾醇生物合成抑制劑，廣泛用于防治由尾孢屬、核腔菌屬、喙孢屬、核盤(pán)菌屬、鐮孢屬及白粉菌、炭疽菌等致病菌所引起的多種病害，具有治療和鏟除作用[3]。為確保咪鮮胺水乳劑的安全使用，評(píng)價(jià)其在楊梅上的消解趨勢(shì)、殘留水平及對(duì)環(huán)境的污染情況，本項(xiàng)目研究了450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅上的殘留動(dòng)態(tài)及最終殘留水平的1年4地殘留試驗(yàn)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

2016年樣品采集于4個(gè)地區(qū)，分別是浙江省桐廬縣瑤琳鎮(zhèn)琴溪村(東魁楊梅)、浙江省開(kāi)化縣音坑鄉(xiāng)對(duì)門(mén)村(東魁楊梅)、湖南省張家界市永定區(qū)三家館鄉(xiāng)三家館村(烏梅)、貴州省黔南州惠水縣七里沖果樹(shù)站(東魁楊梅)。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀(LC-MS-MS)和氣相色譜儀(GC-ECD)檢測(cè)楊梅中的咪鮮胺和三氯苯酚含量。

儀器。液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀；Waters Xevo TQ(美國(guó)Waters公司)；氣相色譜儀(Agilent 6890)；N-EVAP112氮吹儀(美國(guó)OrganonationAssociates.Jnc)；電子天平(PL202-L瑞士Mettler公司)；Milli-Q超純水凈化系統(tǒng)(美國(guó)Millipore公司)；渦旋混合器(德國(guó)IKA公司)；勻質(zhì)器(IKAT25)；電熱恒溫水浴鍋(上海浦東榮豐科學(xué)儀器有限公司)；三角漏斗、具塞量筒、容量瓶及實(shí)驗(yàn)室常用儀器設(shè)備等。

試劑。1 000.0 mg·kg-1咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)溶液、100.0 mg·kg-12，4，6-三氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液(農(nóng)業(yè)部環(huán)境質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)天津測(cè)試中心)；乙腈、正己烷、丙酮(HPLC級(jí)，美國(guó)Tedia公司)；甲醇(HPLC級(jí)，德國(guó)Merck公司)；氯化鈉(AR級(jí)，河北華光科技股份有限公司)；乙酸銨(色譜純，美國(guó)Fisher公司)；乙酸(分析純，浙江中興化工試劑有限公司)。

液相條件。色譜柱Phenomenx XB-C18(100 mm×2.1 mm×2.6 μm)；流動(dòng)相為甲醇(A)和5 nmol乙酸銨0.1%乙酸緩沖溶液(B)；流速0.2 mL·min-1；進(jìn)樣量為5 μL；柱溫35 ℃。

質(zhì)譜條件。離子源為電噴霧離子源150 ℃；電離方式為EST；毛細(xì)管電壓3.0 kV；脫溶劑氣溫度500 ℃，流速800 L·h-1；錐孔反吹氣流速40 L·h-1，碰撞氣流速0.15 mL·min-1；采用外標(biāo)法面積定量。

色譜柱。DB-17(30 m×0.25 mm×0.25 μm)，彈性石英毛細(xì)管柱；載氣為高純氮?dú)猓?.0 mL·min-1；尾吹氣為氮?dú)猓?0.0 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度220 ℃，前檢測(cè)器溫度320 ℃；采用不分流進(jìn)樣方式，進(jìn)樣量1 μL。

柱溫程序。初始溫度150 ℃，保持2 min，以6 ℃·min-1速率程序升溫至270 ℃，繼續(xù)恒溫20 min至樣品全部流出。采用標(biāo)準(zhǔn)農(nóng)藥樣品保留時(shí)間定性，外標(biāo)法面積定量。

方法。楊梅中的咪鮮胺和2，4，6-三氣苯酚經(jīng)乙腈提取，鹽析后咪鮮胺過(guò)氨基柱和有機(jī)濾膜，LC-MS-MS檢測(cè)，外標(biāo)法定量；2，4，6-三氯米酚過(guò)Florisil柱，50 ℃氮吹，正己烷定容后，GC檢測(cè)(ECD檢測(cè)器)。

1.2 田間試驗(yàn)處理設(shè)計(jì)

按農(nóng)藥殘留試驗(yàn)準(zhǔn)則要求設(shè)計(jì)試驗(yàn)小區(qū)，2株楊梅樹(shù)為1小區(qū)，重復(fù)3次，順序排列，小區(qū)間設(shè)保護(hù)帶。另設(shè)對(duì)照小區(qū)。根據(jù)該農(nóng)藥田間藥效試驗(yàn)報(bào)告，450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅上防治褐斑病推薦使用劑量：有效成分用藥量250～500 mg·kg-1，制劑用藥量900～1 800倍液施藥次數(shù)2次，施藥間隔7～10 d，在病發(fā)初期噴霧施藥。

施藥劑量。消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)按有效成分750 mg·kg-1(600倍液)的劑量于楊梅成熟期一半大小時(shí)均勻噴霧施藥，施藥1次，噴藥后2 h及1、3、5、7、14、21、28 d取樣。

最終殘留試驗(yàn)。2個(gè)施藥劑量：低劑量500 mg·kg-1，高劑量750 mg·kg-1。各設(shè)2和3次施藥，施藥間隔期為3、5、7、14 d。另設(shè)清水空白對(duì)照，處理間設(shè)保護(hù)帶。

1.3 樣品處理

1.3.1 樣品中咪鮮胺的提取凈化

提取。稱取勻漿處理好的試樣25.0 g(精確至0.01 g)于250 mL燒杯中，加入50.0 mL乙腈，高速勻漿2 min；將溶液通過(guò)濾紙完全過(guò)濾至有5～7 g氯化鈉的100 mL具塞量筒中，塞子塞緊后，激烈震蕩1 min，在室溫下靜置30 min，使水相和乙腈相分層。

凈化。從具塞量筒中吸取上清有機(jī)相10.0 mL于50.0 mL燒杯中，置于80 ℃水浴鍋上，氮吹至近干。加入2.0 mL的甲醇∶二氯甲烷(1/9，V/V)溶劑，充分溶解，待凈化。將氨基柱用4.0 mL的甲醇∶二氯甲烷(1/9，V/V)預(yù)洗，上述提取液轉(zhuǎn)移至氨基柱；小燒杯用甲醇∶二氯甲烷(1/9，V/V)洗滌3次，洗滌液全部轉(zhuǎn)移至氨基柱，15 mL離心管收集洗脫液；然后將裝有洗脫液的離心管置于氮吹儀，氮吹至近干(水浴溫度為50 ℃)，用甲醇∶水(2/3，V/V)定容至5 mL；在混合器上混勻后，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，待測(cè)。

1.3.2 樣品中三氯苯酚的提取凈化

提取。步驟同1.3.1中提取步驟。

凈化。從具塞量筒中吸取上清有機(jī)相10.0 mL于50 mL燒杯中，置于80 ℃水浴鍋上，氮吹至近干，加入2.0 mL正己烷溶劑，充分溶解，待凈化。將Florisil柱用4.0 mL正己烷∶丙酮(9/1，V/V)預(yù)洗1次，上述提取液轉(zhuǎn)移至Florisil柱，小燒杯用正己烷∶丙酮(9/1，V/V)洗滌3次，洗滌液全部轉(zhuǎn)移至Florisil柱，10 mL離心管收集洗脫液；然后將裝有洗脫液的離心管置于氮吹儀，氮吹至小于5 mL(水浴溫度為50 ℃)，用正己烷定容至5 mL；在混合器上混勻后，過(guò)0.22 μm有機(jī)濾膜，待測(cè)。

1.4 添加回收率與相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差

按上述色譜條件及檢測(cè)步驟，進(jìn)行添加回收率試驗(yàn)，在楊梅樣品中添加咪鮮胺標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加濃度分別為0.01、0.10、1.00 mg·kg-1時(shí)，回收率在96.0%～106.4%，變異系數(shù)5.2%～6.1%。在楊梅樣品中添加2，4，6-三氯苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液，添加濃度分別為0.05、0.10、1.00 mg·kg-1時(shí)，回收率在92.5%～107.6%，變異系數(shù)4.9%～6.5%。

1.5 數(shù)據(jù)分析

咪鮮胺在楊梅中的降解符合一級(jí)動(dòng)力學(xué)反應(yīng)模式[4]，可用Ct=C0e-kt求其降解方程。C0為起始濃度，k為降解常數(shù)，t為藥后天數(shù)，通過(guò)此方程可求出降解半衰期。

2 結(jié)果與分析

2.1 咪鮮胺在楊梅上的消解動(dòng)態(tài)

2016年，分別在浙江桐廬縣、浙江開(kāi)化縣、湖南張家界市、貴州惠水縣4地開(kāi)展450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅上的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)。

表1結(jié)果顯示，浙江省桐廬縣試驗(yàn)點(diǎn)咪鮮胺在楊梅中C=6.692 6e-0.186t，R2=0.887 7，半衰期為3.7 d，咪鮮胺初始沉積量4.862 mg·kg-1，14 d后降解率為74.7%；浙江省開(kāi)化縣試驗(yàn)點(diǎn)C=0.615 7e-0.107t，R2=0.928 2，半衰期6.5 d，咪鮮胺初始沉積量1.043 2 mg·kg-1，14 d后降解率83.1%；湖南省張家界市試驗(yàn)點(diǎn)C=9.424 9e-0.083 6t，R2=0.950 9，半衰期為8.4 d，咪鮮胺初始沉積量8.603 mg·kg-1，14 d后降解率為65.0%；貴州省惠水縣試驗(yàn)點(diǎn)C=1.422 7e-0.113t，R2=0.888 4，半衰期為6.1 d，咪鮮胺初始沉積量2.302 mg·kg-1，14 d后降解率為88.7%；咪鮮胺在楊梅上的半衰期為3.7～8.4 d。

表1 楊梅中的咪鮮胺消解動(dòng)態(tài)

2.2 楊梅上的最終殘留

2016年450 g·L-1咪鮮胺水乳劑及其代謝物2，4，6-三氯苯酚在楊梅中的最終殘留試驗(yàn)結(jié)果如表2。按企業(yè)最高推薦劑量500 mg·kg-1(按有效成分計(jì)，試驗(yàn)設(shè)為低劑量)和推薦劑量的1.5倍(750 mg·kg-1，試驗(yàn)設(shè)為高劑量)施藥，施藥2和3次，距末次施藥3、5、7、14 d，檢測(cè)楊梅中咪鮮胺及其代謝物2，4，6-三氯苯酚最終殘留量，折算后以咪鮮胺表示。結(jié)果顯示，末次施藥后3 d，咪鮮胺在楊梅中最終殘留量為0.101～8.789 mg·kg-1，5 d后咪鮮胺最終殘留量為0.067～9.757 mg·kg-1，7 d后最終殘留量為0.022～7.767 mg·kg-1，14 d后最終殘留量為0.005～2.357 mg·kg-1。

表2 2016年楊梅中咪鮮胺的最終殘留量

3 小結(jié)與討論

按照《化學(xué)農(nóng)藥環(huán)境安全評(píng)價(jià)試驗(yàn)準(zhǔn)則》，根據(jù)T1/2值可將農(nóng)藥殘留性劃分為3個(gè)等級(jí)：即土壤中的T1/2<1個(gè)月的為易降解農(nóng)藥，1～3個(gè)月的為中等降解農(nóng)藥，3～6個(gè)月為較難降解農(nóng)藥，>6個(gè)月的為長(zhǎng)殘留農(nóng)藥。2016年分別在浙江桐廬縣、浙江開(kāi)化縣、湖南張家界市、貴州惠水縣開(kāi)展了450 g·L-1咪鮮胺水乳劑在楊梅中的消解動(dòng)態(tài)試驗(yàn)，試驗(yàn)結(jié)果顯示，浙江開(kāi)化、湖南張家界、貴州惠水和浙江桐廬的咪鮮胺半衰期分別為6.5、8.4、6.1和3.7 d，說(shuō)明咪鮮胺在楊悔上降解速度快，屬易降解農(nóng)藥。最終殘留量總體符合施藥濃度高、施藥次數(shù)多、采樣間隔短則最終殘留量高，施藥濃度低、施藥次數(shù)少、采樣間隔長(zhǎng)則殘留量低的規(guī)律，最終殘留量與施藥濃度、施藥次數(shù)、采樣間隔時(shí)間直接相關(guān)。試驗(yàn)地的氣候條件，作物種類、土壤類型等也是影響農(nóng)藥最終殘留的重要因素；另外，最終殘留量與施藥器具、噴藥方式、作物的生長(zhǎng)時(shí)期、天氣條件等也有密切的關(guān)系。從本次最終殘留試驗(yàn)結(jié)果看，湖南張家界市試驗(yàn)點(diǎn)最終殘留量明顯比其他3個(gè)試驗(yàn)點(diǎn)高，可能就是由于這些因素引起的。

我國(guó)和國(guó)際食品法典委員會(huì)及相關(guān)國(guó)家都沒(méi)有制定咪鮮胺在楊梅上的最大殘留限量。中國(guó)GB 2763—2016規(guī)定了咪鮮胺在相關(guān)水果上的最大殘留限量值為柑橘類水果(柑橘除外)10 mg·kg-1、柑橘5 mg·kg-1、蘋(píng)果2 mg·kg-1、葡萄2 mg·kg-1、皮不可食熱帶和亞熱帶水果7 mg·kg-1、荔枝2 mg·kg-1、龍眼5 mg·kg-1、芒果2 mg·kg-1、香焦5 mg·kg-1、西瓜0.1 mg·kg-1。根據(jù)本試驗(yàn)結(jié)果，建議我國(guó)咪鮮胺在楊梅上的最大殘留限量值為5 mg·kg-1。450 g·L-1咪鮮胺水乳劑防治楊梅褐斑病有效成分用藥量250～500 mg·kg-1，最多施藥2次，安全間隔期為14 d。