糙葉五加花化學成分及其抗炎活性

李小軍， 吳賢哲， 金倫喆*， 劉向前

（1. 湖南中醫(yī)藥大學藥學院， 湖南 長沙410208； 2. 圓光大學藥學院， 韓國 益山54538； 3. 贛南醫(yī)學院藥學院， 江西 贛州341000）

糙葉五加Acanthopanax henryi （Oliv.） Harms 為中國特有的五加科五加屬植物, 廣泛分布于湖南、甘肅、 四川等地。 湖南省中藥材地方標準收載的“五加皮” 就是以該植物的根皮入藥, 具有祛風濕、 活血化瘀、 壯筋骨等功效, 主要用于治療風濕痹痛、 拘攣麻木、 筋骨痞軟、 水腫、 跌打損傷、 疝氣腹痛等[1]。 國內外學者對五加屬植物的研究多集中在《中國藥典》 收載的細柱五加、 刺五加。對糙葉五加的研究也多集中于其葉[2-5], 對其花的研究鮮有報道。 課題組首次在抗炎活性導向下對糙葉五加花進行成分研究, 從乙酸乙酯萃取部位中分離鑒定出17 個化合物, 所有化合物均為首次從糙葉五加花中分離得到。

1 儀器與材料

JEOL JNM ECP-400 核磁共振儀（日本電子株式會社）； Q-TOF micro LC-MS/MS 質譜儀（美國Waters 公司）； 高相液相色譜儀為YL9100 HPLC 系統(tǒng)（韓國英麟公司）； Kieselgel 60 F254和RP-18 F254s（德國默克公司）。 Dulbecco’s modified Eagle’s medium （DMEM）、 胎 牛 血 清 （FBS） （美 國Grand Island 公司）； 脂多糖（LPS）、 3- （4, 5-二甲基噻唑-2） -2, 5-二苯基四氮唑溴鹽（MTT）、二甲基亞砜（DMSO）、 Griess （美國Sigma-Aldrich公司）。 陽性對照紫鉚因為韓國圓光大學藥學院生藥及天然產物研究室自制（含有量≥98.5%）。 小鼠單核巨噬細胞RAW264.7 和小鼠小膠質細胞BV2 來源于韓國圓光大學Park Hyun 教授實驗室。

樣品于2017 年8 月采自湖南省新化, 經湖南中醫(yī)藥大學藥學院劉向前教授鑒定為五加科五加屬植物糙葉五加Acanthopanax henryi （Oliv.） Harms 的花, 標本保存于湖南省重點實驗室中藥新藥研究與開發(fā)實驗室, 標本號AH201708-04。

2 提取與分離

干燥的糙葉五加花5 kg, 粉碎至粗粉, 以70%甲醇回流提取3 次, 合并提取液, 濃縮后得總浸膏。 總浸膏加入適量蒸餾水分散后依次用石油醚、乙酸乙酯、 正丁醇進行萃取。 回收溶劑, 得石油醚萃取物（40 g）、 乙酸乙酯萃取物（60 g）、 正丁醇萃取物（42 g）。 乙酸乙酯部位分別經反相、 正相硅膠反復柱色譜分離, 分別以甲醇-水、 氯仿-甲醇-水梯度洗脫, 再經Sephadex LH-20 柱 （氯仿-甲醇）、 制備薄層及HPLC [甲醇-水（0.1%甲酸） ]得化合物1 （21 mg）、 2 （41 mg）、 3 （6 mg）、 4（24 mg）、 5 （15 mg）、 6 （48 mg）、 7 （54 mg）、 8（5 mg）、 9 （5 mg）、 10 （6 mg）、 11 （22 mg）、 12（18 mg）、 13 （14 mg）、 14 （4 mg）、 15 （12 mg）、16 （8 mg）、 17 （3 mg）。

3 結構鑒定

化合物1： 黃色粉末 （甲醇）, ESI-MS m/z：487 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：7.71 （1H, d, J=2.0 Hz, H-2′）, 7.56 （1H, dd,J=8.4, 2.0 Hz, H-6′）, 6.85 （1H, d, J=8.4 Hz,H-5′）, 6.32 （1H, d, J=1.6 Hz, H-8）,6.14 （1H,d, J=2.0 Hz, H-6）,5.23 （1H, d, J=7.6 Hz, glc-H-1″）, 3.86 ～3.23 （6H, m, H-2″～6″）；13C-NMR（CD3OD, 100 MHz） δ： 157.0 （C-2）, 134.4 （C-3）, 178.0 （C-4）, 161.6 （C-5）, 98.6 （C-6）,164.6 （C-7）, 93.5 （C-8）, 157.7 （C-9）, 104.3（C-10）, 121.7 （C-1′）, 114.7 （C-2′）, 144.5 （C-3′）, 148.5 （C-4′）, 116.3 （C-5′）, 121.9 （C-6′）,103.2 （glc-C-1″）,74.4 （C-2″）,76.8 （C-3″）,69.9（C-4″）,77.0 （C-5″）,61.2 （C-6″）。 以上數據與文獻[6] 一致, 故鑒定為槲皮素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物2： 黃色粉末 （甲醇）, ESI-MS m/z：471 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：8.05 （2H, d, J=9.2 Hz, H-2′,6′）,6.88 （2H, d,J=9.2 Hz,H-3′,5′）,6.38 （1H,d,J=2.0 Hz,H-8）, 6.19 （1H, d, J=2.0 Hz, H-6）,5.24 （1H, d,J=7.6 Hz, glc-H-1″）, 3.70 ～3.40 （6H, m, H-2″～6″）；13C-NMR （CD3OD, 100 MHz） δ： 157.2 （C-2）, 134.2 （C-3）, 178.2 （C-4）, 161.7 （C-5）,98.6 （C-6）, 164.6 （C-7）,93.5 （C-8）,157.7 （C-9）, 104.4 （C-10）, 121.5 （C-1′）, 131.0 （C-2′,6′）, 114.8 （C-3′, 5′）, 160.2 （C-4′）, 102.9 （glc-C-1″）, 74.4 （C-2″）, 76.7 （C-3″）, 70.0 （C-4″）,77.1 （C-5″）, 61.3 （C-6″）。 以上數據與文獻[7-8] 一致, 故鑒定為山柰酚-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物3： 黃色粉末 （甲醇）, ESI-MS m/z：455 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：8.05 （2H, d, J=9.2 Hz, H-2′,6′）,6.88 （2H, d,J=9.2 Hz,H-3′,5′）,6.38 （1H,d,J=2.0 Hz,H-8）, 6.19 （1H, d, J=2.0 Hz, H-6）,5.37 （1H, d,J=2.0 Hz, rha-H-1″）, 3.83-3.69 （4H, m, H-2″～5″）, 0.92 （3H, d, J= 6.0 Hz, H-6″, rha-CH3）；13C-NMR （CD3OD, 100 MHz） δ： 157.2 （C-2）,134.9 （C-3）, 178.3 （C-4）, 161.9 （C-5）, 98.5（C-6）, 164.5 （C-7）, 93.4 （C-8）, 158.0 （C-9）,104.6 （C-10）, 121.3 （C-1′）, 130.6 （C-2′, 6′）,115.2 （C-3′, 5′）, 160.2 （C-4′）, 102.2 （rha-C-1″）, 70.7 （C-2″）, 70.8 （C-3″）, 71.9 （C-4″）,70.6 （C-5″）, 16.3 （C-6″, rha-CH3）。 以上數據與文獻[8] 一致, 故鑒定為山柰酚-3-O-α-L-鼠李糖苷。

化合物4： 黃色粉末 （甲醇）, ESI-MS m/z：617 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：8.06 （2H, d, J=9.2 Hz, H-2′,6′）,6.89 （2H, d,J=9.2 Hz,H-3′,5′）,6.41 （1H,d,J=2.0 Hz,H-8）, 6.21 （1H, d, J=2.0 Hz, H-6）,5.10 （1H, d,J=7.6 Hz, glc-H-1″）, 4.50 （1H, d, J=1.2 Hz,rha-H-1?）, 3.81 （1H, dd, J=11.0, 1.2 Hz, H-6″a）, 3.63 （1H, m, H-6″b）, 3.70 ～3.20 （8H, m,glc-H-2″～5″, rha-H-2?～5?）, 1.12 （3H, d, J=6.0 Hz, H-6?, rha-CH3）；13C-NMR （CD3OD, 100 MHz）δ： 157.2 （C-2）, 134.2 （C-3）, 178.0 （C-4）,161.6 （C-5）, 98.7 （C-6）,164.7 （C-7）,93.7 （C-8）, 158.2 （C-9）, 104.4 （C-10）, 121.4 （C-1′）,131.1 （C-2′, 6′）, 114.9 （C-3′, 5′）, 160.2 （C-4′）,103.4 （glc-C-1″）,74.4 （C-2″）,75.9 （C-3″）,70.2 （C-4″）, 76.8 （C-5″）, 67.3 （C-6″）, 101.1（rha-C-1?）, 70.8 （C-2?）, 71.0 （C-3?）, 72.6 （C-4?）,68.4 （C-5?）,16.6 （C-6?,rha-CH3）。 以上數據與文獻 [9] 一致, 故鑒定為山柰酚-3-蕓香糖苷。

化合物5： 黃色粉末 （甲醇）； ESI-MS m/z：539 [M + Na]+。1H-NMR （DMSO-d6, 400 MHz） δ：7.50 （1H, d, J=16.0 Hz, H-7″）, 7.38 （1H, d,J=16.0 Hz, H-7′）, 7.03 （2H, brs, H-2′, 2″）,6.94 （2H, t, J=8.0 Hz, H-6′, 6″）, 6.73 （2H, t,J=8.0 Hz, H-5′, H-5″）, 6.23 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8″）,6.20 （1H, d, J=16.4 Hz, H-8′）,5.18（1H, d, J=10.8 Hz, H-5）,3.68 （1H, brs, H-3）,3.65 （1H, brs, H-4）, 2.25 （1H, t, J=12.0 Hz,H-6a）, 1.98 （3H, m, H-2a, 2b, 6b）；13C-NMR（DMSO-d6, 100 MHz） δ： 174.2 （C-7）, 166.4 （C-9″）, 165.7 （C-9′）, 148.9 （C-4″）, 148.6 （C-4′）,146.3 （C-3″）,146.2 （C-3′）,145.3 （C-7″）,144.3（C-7′）, 126.3 （C-1″）, 126.1 （C-1′）, 121.6 （C-6″）, 121.0 （C-6′）, 116.3 （C-5″）, 116.3 （C-5′）,115.5 （C-2″）,115.4 （C-2′）,115.1 （C-8″）,116.2（C-8′）, 83.1 （C-1）, 71.4 （C-4）, 69.3 （C-3）,70.1 （C-5）, 40.0 （C-2）, 34.0 （C-6）。 以上數據與文獻[10-11] 一致, 故鑒定為1, 5-雙咖啡?？鼘幩?。

化合物6： 黃色粉末 （甲醇）； ESI-MS m/z：539 [M + Na]+。1H-NMR （DMSO-d6, 400 MHz） δ：7.50 （2H, d, J=15.6 Hz, H-7′, 7″）, 7.02 （2H,m, H-2′, 2″）, 6.95 （2H, m, H-6′, 6″）, 6.75（2H, m, H-5′, H-5″）, 6.24 （2H, d, J=15.6 Hz,H-8′, 8″）, 5.55 （1H, brs, H-3）, 4.98 （1H, brs,H-4）, 4.24 （1H, brs, H-5）, 2.15 （3H, m, H-6a,6b,2a）,1.87 （1H, brs, H-2b）；13C-NMR （DMSOd6, 100 MHz） δ： 177.6 （C-7）, 166.8 （C-9″）,166.6 （C-9′）,149.2 （C-4″）,149.2 （C-4′）,146.2（C-3″）, 146.2 （C-3′）, 146.1 （C-7″）, 146.1 （C-7′）, 126.1 （C-1″）, 125.8 （C-1′）, 122.0 （C-6″）,122.0 （C-6′）,116.4 （C-5″）,116.4 （C-5′）,115.4（C-2″）, 115.4 （C-2′）, 114.2 （C-8″）, 114.2 （C-8′）, 76.8 （C-1）, 76.1 （C-4）, 68.4 （C-3）, 69.1（C-5）,40.2 （C-2）,38.3 （C-6）。 以上數據與文獻[10, 12] 一致, 故鑒定為1, 4-雙咖啡?？鼘幩帷?/p>

化合物7： 黃色粉末 （甲醇）； ESI-MS m/z：539 [M + Na]+。1H-NMR （DMSO-d6, 400 MHz） δ：7.49 （1H, d, J=15.6 Hz, H-7″）, 7.40 （1H, d,J=15.6 Hz, H-7′）, 7.05 （1H, brs, H-2″）, 7.01（1H, brs, H-2′）,6.94 （1H, d, J=8.0 Hz, H-6″）,6.90 （1H, d, J=8.0 Hz, H-6′）, 6.74 （2H, brs,H-5″, H-5′）, 6.25 （1H, d, J= 15.6 Hz, H-8″）,6.18 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8′）, 5.28 （1H, brs,H-3）, 4.01 （1H, brs, H-5）, 3.54 （1H, d, J=8.4 Hz, H-4）,2.58 （1H,m,H-6a）,2.38 （1H,m,H-2a）, 2.19 （1H, m, H-6b）, 1.81 （1H, m, H-2b）；13C-NMR （DMSO-d6, 100 MHz） δ： 175.8 （C-7）,166.9 （C-9″）,165.6 （C-9′）,149.9 （C-4″）,149.1（C-4′）, 146.6 （C-3″）, 146.5 （C-3′）, 145.5 （C-7″）, 144.3 （C-7′）, 126.1 （C-1″）, 125.6 （C-1′）,121.9 （C-6″）,121.2 （C-6′）,116.5 （C-5″）,116.5（C-5′）, 115.3 （C-2″）, 115.2 （C-2′）, 116.5 （C-8′）, 114.7 （C-8″）,82.4 （C-1）,73.2 （C-4）,70.9（C-3）, 69.6 （C-5）, 38.3 （C-2）, 35.3 （C-6）。 以上數據與文獻[10-11] 一致, 故鑒定為1, 3-雙咖啡?？鼘幩?。

化合物8： 黃色粉末 （甲醇）； ESI-MS m/z：539 [M + Na]+。1H-NMR （DMSO-d6, 400 MHz） δ：7.50 （1H, d, J=16.0 Hz, H-7″）, 7.40 （1H, d,J=16.0 Hz, H-7′）, 7.03 （2H, brs, H-2′, 2″）,6.94 （2H, dd, J=8.0, 2.0 Hz, H-6′, 6″）, 6.73（2H, d, J=8.0 Hz, H-5′, H-5″）, 6.23 （1H, d,J=16.0 Hz, H-8″）, 6.20 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8′）, 5.40 （1H, m, H-5）, 4.91 （1H, m, H-4）,4.07 （1H, m, H-3）, 2.20-1.90 （4H, m, H-2, H-6）；13C-NMR （DMSO-d6, 100 MHz） δ： 175.5 （C-7）, 165.7 （C-9′）, 165.6 （C-9″）, 148.3 （C-4′）,148.2 （C-4″）,145.2 （C-3′）,145.0 （C-3″）,145.3（C-7′）, 145.3 （C-7″）, 125.3 （C-1′）, 125.2 （C-1″）, 121.3 （C-6′）, 121.2 （C-6″）, 115.4 （C-5′）,115.4 （C-5″）,114.4 （C-2′）,114.5 （C-2″）,114.0（C-8′）, 114.1 （C-8″）, 73.2 （C-1）, 72.4 （C-4）,68.0 （C-3）, 64.0 （C-5）, 39.7 （C-6）, 35.4 （C-2）。 以上數據與文獻[13-14] 一致, 故鑒定為4,5-雙咖啡?？鼘幩?。

化合物9： 黃色粉末 （甲醇）； ESI-MS m/z：539 [M + Na]+。1H-NMR （DMSO-d6, 400 MHz） δ：7.45 （1H, d, J=16.0 Hz, H-7′）, 7.42 （1H, d,J=16.0 Hz, H-7″）, 7.01 （2H, brs, H-2′, 2″）,6.94 （2H, dd, J=8.0, 1.6 Hz, H-6′, 6″）, 6.74（1H, d, J=8.0 Hz, H-5′）, 6.72 （1H, d, J=8.0 Hz, H-5″）,6.21 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8′）,6.16（1H, d, J=16.0 Hz, H-8″）, 5.52 （1H, m, H-3）,4.88 （1H, m, H-4）, 4.15 （1H, brs, H-5）, 2.11-1.71 （4H, m, H-2, H-6）；13C-NMR （DMSO-d6,100 MHz） δ： 177.5 （C-7）, 168.0 （C-9′）, 168.0（C-9″）, 150.1 （C-4′）, 150.1 （C-4″）, 147.2 （C-3′）, 147.2 （C-3″）, 147.3 （C-7′）, 147.2 （C-7″）,127.2 （C-1′）,127.2 （C-1″）,123.4 （C-6′）,123.4（C-6″）, 117.5 （C-5′）, 117.5 （C-5″）, 116.3 （C-2′）, 116.3 （C-2″）, 115.6 （C-8′）, 115.6 （C-8″）,77.7 （C-1）, 77.0 （C-4）, 70.5 （C-5）, 70.1 （C-3）, 40.6 （C-2）, 39.5 （C-6）。 以上數據與文獻[13-14] 一致, 故鑒定為3, 4-雙咖啡酰奎寧酸。

化合物10： 黃色粉末（甲醇）； ESI-MS m/z：539 [M + Na]+。1H-NMR （DMSO-d6, 400 MHz） δ：7.50 （1H, d, J=16.0 Hz, H-7″）, 7.46 （1H, d,J=16.0 Hz, H-7′）, 7.10 （1H, d, J=1.6 Hz, H-2″）, 7.08 （1H, d, J=1.6 Hz, H-2′）, 7.02 （2H,dd, J=8.0, 1.6 Hz, H-6′, 6″）, 6.83 （1H, d, J=8.0 Hz, H-5″）, 6.80 （1H, d, J=8.0 Hz, H-5′）,6.29 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8″）, 6.20 （1H, d,J=16.0 Hz, H-8′）, 5.22 （1H, m, H-3）, 5.15（1H, brs, H-5）, 3.85 （1H, m, H-4）, 2.20 ～1.97（4H, m, H-2, H-6）；13C-NMR （DMSO-d6, 100 MHz） δ： 175.5 （C-7）, 166.6 （C-9″）, 166.0 （C-9′）, 148.4 （C-4″）, 148.3 （C-4′）, 145.6 （C-3″）,145.2 （C-3′）,145.7 （C-7″）,145.7 （C-7′）,125.9（C-1″）, 125.8 （C-1′）, 122.0 （C-6″）, 121.8 （C-6′）, 116.2 （C-5″）, 116.1 （C-5′）, 114.8 （C-2″）,114.5 （C-2′）, 115.1 （C-8″）, 115.0 （C-8′）, 72.8（C-1）, 71.2 （C-3）, 71.2 （C-5）, 71.0 （C-4）,36.1 （C-2）, 35.0 （C-6）。 以上數據與文獻[13-14] 一致, 故鑒定為3, 5-雙咖啡?？鼘幩?。

化合物11： 黃色粉末（甲醇）, ESI-MS m/z：309 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：8.05 （2H, d, J=9.2 Hz, H-2′,6′）,6.88 （2H, d,J=9.2 Hz,H-3′,5′）,6.38 （1H,d,J=2.0 Hz,H-8）, 6.19 （1H, d, J = 2.0 Hz, H-6）；13C-NMR（CD3OD, 100 MHz） δ： 157.2 （C-2）, 134.2 （C-3）, 178.2 （C-4）, 161.7 （C-5）, 98.6 （C-6）,164.6 （C-7）, 93.5 （C-8）, 157.8 （C-9）, 104.4（C-10）, 121.5 （C-1′）, 131.0 （C-2′, 6′）, 114.8（C-3′, 5′）, 160.2 （C-4′）。 以上數據與文獻[8]一致, 故鑒定為山柰酚。

化 合 物 12： 黃 色 粉 末 （ 甲 醇）。1H-NMR（CD3OD, 400 MHz） δ： 7.66 （1H, d, J=2.0 Hz,H-2′）, 7.61 （1H, dd, J = 8.4, 2.0 Hz, H-6′）,6.85 （1H, d, J=8.4 Hz, H-5′）,6.38 （1H, d, J=2.4 Hz, H-8）, 6.19 （1H, d, J=2.0 Hz, H-6）,5.10 （1H, d, J=7.6 Hz, glc-H-1″）, 4.51 （1H, d,J=1.6 Hz, rha-H-1?）, 3.81 （1H, dd, J= 11.0,1.2 Hz, H-6″a）, 3.63 （1H, m, H-6″b）, 3.55-3.24（8H, m, glc-H-2″～5″, rha-H-2?～5?）, 1.12 （3H,d, J=6.0 Hz, H-6?, rha-CH3）；13C-NMR （CD3OD,100 MHz） δ： 157.2 （C-2）, 134.3 （C-3）, 178.1（C-4）, 161.6 （C-5）, 98.7 （C-6）, 164.8 （C-7）,93.6 （C-8）, 158.0 （C-9）, 104.3 （C-10）, 121.8（C-1′）, 114.7 （C-2′）, 144.5 （C-3′）, 148.5 （C-4′）, 116.4 （C-5′）, 122.2 （C-6′）, 103.4 （glc-C-1″）, 74.4 （C-2″）, 75.9 （C-3″）, 70.1 （C-4″）,76.9 （C-5″）, 67.2 （C-6″）, 101.1 （rha-C-1?）,70.8 （C-2?）, 70.9 （C-3?）, 72.6 （C-4?）, 68.4（C-5?）, 16.6 （C-6?, rha-CH3）。 以上數據與文獻[9] 一致, 故鑒定為蘆丁。

化合物13： 白色粉末（甲醇）； ESI-MS m/z：541 [M + Na]+。1H-NMR （400 MHz, DMSO-d6） δ：6.89 （1H, d, J=1.8 Hz, H-2′）,6.79 （1H, d, J=8.4 Hz, H-5′）,6.68 （1H, dd, J=1.8,8.4 Hz, H-6′）, 2.37 （1H, m, H-7′a）, 2.85 （1H, dd, J=13.2, 4.8 Hz, H-7′b）,2.59 （1H, m, H-8′）,3.89（1H, dd, J=8.4, 6.6 Hz, H-9′a）, 3.56 （1H, m,H-9′b）, 6.84 （1H, d, J = 1.8 Hz, H-2）, 6.78（1H, d, J=8.4 Hz, H-5）, 6.78 （1H, dd, J=1.8,8.4 Hz, H-6）, 4.68 （1H, d, J= 6.7 Hz, H-7）,2.28 （1H, m, H-8）, 3.62 （1H, m, H-9a）, 3.80（1H, dd, J=6.6, 10.8 Hz, H-9b）, 4.17 （1H, d,J= 7.8 Hz, H-1″）, 2.98 （1H, m, H-2″）, 3.13（1H, m, H-3″）, 3.06 （1H, m, H-4″）, 3.09 （1H,m, H-5″）, 3.42 （1H, m, H-6″a）, 3.66 （1H, m,H-6″b）, 5.98 （2H, d, J=2.4 Hz, -OCH2O-）,5.96（2H, s, -OCH2O-）, 5.15, 4.98, 4.94, 4.52 （each 1H, brs, 2″, 3″, 4″, 6″-OH）；13C-NMR （DMSO-d6,100 MHz） δ： 137.9 （C-1）, 108.6 （C-2）, 147.8（C-3）, 146.9 （C-4）, 108.4 （C-5）, 119.7 （C-6）,81.8 （C-7）, 50.8 （C-8）, 66.7 （C-9）, 101.4 （C-10, -OCH2O-）, 135.3 （C-1′）, 106.9 （C-2′）,147.8 （C-3′）,145.9 （C-4′）,109.7 （C-5′）,122.2（C-6′）, 32.8 （C-7′）, 42.6 （C-8′）, 72.1 （C-9′）,101.2 （C-10′, -OCH2O-）, 103.7 （glc-C-1″）, 74.0（C-2″）, 77.2 （C-3″）, 70.5 （C-4″）, 77.5 （C-5″）,61.5 （C-6″）。 以上數據與文獻[15] 一致, 故鑒定為二氫芝麻素-9-O-β-D-吡喃葡萄糖苷。

化合物14： 無色針晶（甲醇）； ESI-MS m/z：349 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：7.09 （1H, d, J=8.2 Hz, H-6）, 6.82 （1H, d, J=1.8 Hz, H-3）, 6.73 （1H, dd, J=8.2, 1.9 Hz, H-5）, 5.95 （1H, m, H-8）, 5.07 （2H, m, H-9）,4.85 （1H, d, J=7.3 Hz, glc-H-1′）, 3.87 （1H, d,J=12.5 Hz, glc-H-6′a）, 3.83 （3H, s, -OCH3）,3.70 （1H, m, glc-H-6′b）,3.49-3.31 （6H, m, glc-H-2′～5′, H-7）；13C-NMR （CD3OD, 100 MHz） δ：145.0 （C-1）, 149.5 （C-2）, 112.8 （C-3）, 135.1（C-4）, 120.8 （C-5）, 116.9 （C-6）, 39.4 （C-7）,137.7 （C-8）, 114.5 （C-9）, 55.4 （2-OCH3）,101.8 （glc-C-1′）,73.6 （C-2′）,76.9 （C-3′）,70.0（C-4′）,76.5 （C-5′）,61.2 （C-6′）。 以上數據與文獻[16] 一致, 故鑒定為丁香酚苷。

化合物15： 白色粉末（甲醇）； ESI-MS m/z：553 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：7.63 （1H, d, J=15.9 Hz, H-7″）, 7.56 （1H, d,J=15.9 Hz, H-7′）, 7.06 （2H, brs, H-2′, 2″）,6.97 （2H, d, J=8.1 Hz, H-5′, 5″）, 6.79 （2H,dd, J=8.1, 1.6 Hz, H-6′, 6″）, 6.36 （1H, d, J=15.9 Hz,H-8″）,6.23 （1H,d,J=15.9 Hz,H-8′）,5.40 （1H, m, H-5）, 5.31 （1H, m, H-3）, 3.98（1H, m, H-4）, 3.68 （3H, s, -OCH3）, 2.34-2.27（2H, m, H-6）； 2.20-2.11 （2H, m, H-2）；13CNMR （CD3OD, 100 MHz） δ： 73.3 （C-1）, 34.3（C-2）, 70.6 （C-3）, 68.3 （C-4）, 70.9 （C-5）,35.4 （C-6）, 174.3 （C-7, -C=O）, 126.3 （C-1′）,113.8 （C-2′）,145.5 （C-3′）,148.2 （C-4′）,115.2（C-5′）, 121.7 （C-6′）, 145.8 （C-7′）, 113.5 （C-8′）, 166.6 （C-9′）, 126.6 （C-1″）, 113.8 （C-2″）,145.6 （C-3″）,148.4 （C-4″）,115.2 （C-5″）,121.8（C-6″）, 146.1 （C-7″）, 114.1 （C-8″）, 167.4 （C-9″）, 51.7 （7-OCH3）。 以上數據與文獻[16] 一致, 故鑒定為3, 5-雙咖啡酰奎寧酸甲酯。

化合物16： 白色粉末（甲醇）； ESI-MS m/z：553 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：7.62 （1H, d, J=16.0 Hz, H-7″）, 7.52 （1H, d,J=16.0 Hz, H-7′）, 7.02 （1H, d, J=1.6 Hz, H-2′）, 7.00 （1H, d, J=1.6 Hz, H-2″）, 6.92 （2H,dd, J=8.0, 1.6 Hz, H-6′, 6″）, 6.76 （2H, d, J=8.0 Hz, H-5′, 5″）, 6.31 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8″）, 6.19 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8′）, 5.53 （1H,m, H-3）, 5.12 （1H, m, H-4）, 4.35 （1H, m, H-5）, 3.71 （3H, s, -OCH3）, 2.35 ～2.27 （2H, m,H2-6）； 2.23 ～2.05 （2H, m, H-2）；13C-NMR（CD3OD, 100 MHz） δ： 74.4 （C-1）, 37.0 （C-2）,67.2 （C-3）, 73.4 （C-4）, 67.7 （C-5）, 37.0 （C-6）,173.8 （C-7,-C=O）,126.3 （C-1′）,113.3 （C-2′）, 145.5 （C-3′）, 148.4 （C-4′）, 115.2 （C-5′）,121.8 （C-6′）,146.4 （C-7′）,113.8 （C-8′）,167.1（C-9′）, 126.2 （C-1″）, 113.2 （C-2″）, 145.5 （C-3″）, 148.4 （C-4″）, 115.2 （C-5″）, 121.8 （C-6″）,146.4 （C-7″）, 113.8 （C-8″）, 166.5 （C-9″）, 51.7（7-OCH3）。 以上數據與文獻[16] 一致, 故鑒定為3, 4-雙咖啡?？鼘幩峒柞ァ?/p>

化合物17： 白色粉末（甲醇）； ESI-MS m/z：553 [M + Na]+。1H-NMR （CD3OD, 400 MHz） δ：7.63 （1H, d, J=16.0 Hz, H-7″）, 7.56 （1H, d,J=15.9 Hz, H-7′）, 7.06 （2H, brs, H-2′, 2″）,6.97 （1H, dd, J=8.0, 1.6 Hz, H-6′, 6″）, 6.78（1H, d, J=8.0 Hz, H-5″）, 6.74 （1H, d, J=8.4 Hz, H-5′）,6.36 （1H, d, J=16.0 Hz, H-8″）,6.23（1H, d, J=16.0 Hz, H-8′）, 5.73 （1H, m, H-4）,5.69 （1H, m, H-5）, 5.40 （1H, m, H-3）, 3.69（3H, s, -OCH3）,2.35～2.10 （4H, m, H-2, H-6）；13C-NMR （CD3OD, 100 MHz） δ： 80.4 （C-1）, 37.6（C-2）, 68.6 （C-3）, 70.3 （C-4）, 71.3 （C-5）,37.4 （C-6）, 173.3 （C-7, -C=O）, 126.3 （C-1′）,113.8 （C-2′）,145.5 （C-3′）,148.3 （C-4′）,115.2（C-5′）, 121.7 （C-6′）, 145.8 （C-7′）, 113.5 （C-8′）, 166.6 （C-9′）, 126.5 （C-1″）, 113.8 （C-2″）,145.6 （C-3″）,148.4 （C-4″）,115.2 （C-5″）,121.8（C-6″）, 146.1 （C-7″）, 114.1 （C-8″）, 167.4 （C-9″）, 51.7 （7-OCH3）。 以上數據與文獻[17] 一致, 故鑒定為1, 3-雙咖啡?？鼘幩峒柞?。

4 抗炎活性

4.1 MTT 法細胞毒性試驗 取對數生長期RAW264.7/BV2 細胞接種于96 孔板中（1×105個細胞/孔）, 37 ℃、 5%CO2條件下溫孵培養(yǎng)12 h后, 給藥組分別加入不同質量濃度的待測樣品（最終質量濃度分別為50、 100、 200 μg/mL）, 同時每種藥物均設加入或不加入LPS （1 μg/mL） 2組。 溶劑對照組均不加入受試藥物及LPS, 但加入0.1% DMSO。 繼續(xù)溫孵培養(yǎng)12 h 后, 每孔取出100 μL 上清液, 加入100 mg/mL MTT 工作液孵育0.5 h。 形成的甲臜鹽使用酸化異丙醇溶解, 在酶標儀540 nm 處測定各孔吸光度（A） 值, 以正常組細胞（未處理） 的A 值所對應的細胞存活率為100%, 計算細胞存活率。 每組重復3 次獨立實驗。結果見表1。

4.2 對NO 的抑制作用 采用Griess 法檢測對LPS刺激下的RAW264.7/BV2 細胞分泌NO 的抑制作用。 取對數生長期RAW264.7/BV2 細胞接種于96孔板中（1×105個細胞/孔）, 37 ℃、 5% CO2條件下溫孵培養(yǎng)12 h 后加入100 μL 不同質量濃度的待測樣品（最終質量濃度分別為50、 100、 200 μg/mL）,溫孵培養(yǎng)1 h 后加入100 μL 1 μg/mL LPS, 同時設模型組（LPS+培養(yǎng)液）、 陽性對照組（紫鉚因+LPS+培養(yǎng)液）、 空白對照組（培養(yǎng)液）, 繼續(xù)溫孵培養(yǎng)12 h。 每組重復3 次獨立實驗。 將上清液（100 mL） 與等體積格氏試劑混合, 用酶聯免疫檢測儀測定混合物在540 nm 處的A 值, 計算NO 抑制率, 結果見表2。

表1 各粗提物對LPS 刺激的RAW264.7/BV2 細胞存活率的影響Tab.1 Effects of cell viability of different extracts on LPSstimulated RAW264.7/BV2 cells

表2 各粗提物對LPS 刺激的RAW264.7/BV2 細胞NO 抑制作用Tab.2 Inhibitory effects of different extracts on LPS-stimulated NO production in RAW264.7/BV2 cells

5 討論

本研究首次對糙葉五加花進行了抗炎活性導向下的化學成分研究, 且從抗炎活性較好的乙酸乙酯萃取部位中分離鑒定出17 個化合物, 包括6 個黃酮及其苷類、 9 個咖啡?；鼘幩犷?、 1 個木脂素苷類、 1 個苯丙素苷類。 其主要成分為帶有槲皮素或山柰酚母核的黃酮類及二取代的咖啡?；鼘幩犷? 進一步豐富了五加科五加屬植物的研究內容,同時為中國特產植物糙葉五加的研究提供參考。 由于近年來許多研究者對于咖啡?；鼘幩犷惢衔锏娜〈幪柮鞑幌嗤? Clifford[18]把綠原酸、 隱綠原酸、 新綠原酸分別命名為5-O-咖啡?；鼘幩?、 4-O-咖啡酰基奎寧酸、 3-O-咖啡?；鼘幩?。 后來的大多數研究者均采用此法命名。 然而, 根據國際純粹與應用化學聯合會 （IUPAC）命名規(guī)則, 綠原酸、 隱綠原酸、 新綠原酸應分別命名為3-O-咖啡?；鼘幩?、 4-O-咖啡酰基奎寧酸、5-O-咖啡酰基奎寧酸。 本研究按照IUPAC 命名法對二取代的咖啡酰基奎寧酸類化合物進行取代基編號及命名, 以期對以后該類化合物的結構解析和命名提供參考。 對于這些單體化合物的潛在抗炎活性有待進一步研究。