疏肝補(bǔ)腎法對(duì)肝郁腎虛型黃褐斑患者血SOD、MDA及總（-SH）水平的影響

李溫如 馬麗俐 陳志偉

黃褐斑是一種由多種因素誘發(fā)而出現(xiàn)于面部的色素沉著性皮膚病，屬中醫(yī)“面塵”、“黧黑斑”、“肝斑”等范疇。該病病因、發(fā)病機(jī)制尚不明確，主要與遺傳、內(nèi)分泌因素及紫外線照射有關(guān)[1]。此外，氧化應(yīng)激也參與黃褐斑的發(fā)病[2]。筆者運(yùn)用疏肝補(bǔ)腎法治療女性肝郁腎虛型黃褐斑，取得較好療效[3]，同時(shí)檢測(cè)其血清超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）、總巰基（-SH）的水平，探討疏肝補(bǔ)腎法對(duì)女性肝郁腎虛型黃褐斑患者氧化應(yīng)激的影響，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 臨床資料

1.1 一般資料 選取2014 年2 月—2015 年7 月于浙江省中醫(yī)院皮膚科門診就診的女性黃褐斑患者70例，中醫(yī)辨證分型為肝郁腎虛型，采用隨機(jī)數(shù)字表法分為中藥組和成藥組，各35 例。同期選取面部無黃褐斑等色素沉著性皮膚病的女性健康體檢志愿者30名為正常對(duì)照組。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審核通過，所有患者均簽署知情同意書。

1.2 診斷及中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn) 黃褐斑診斷參照中國中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)皮膚性病專業(yè)委員會(huì)色素病學(xué)組《黃褐斑的臨床診斷和療效標(biāo)準(zhǔn)（2010 年版）》[4]：（1）面部淡褐色至深褐色、界限清楚的斑片，通常對(duì)稱性分布，無炎癥表現(xiàn)及鱗屑；（2）無明顯自覺癥狀；（3）女性多發(fā)，主要發(fā)生于青春期后；（4）病情可有季節(jié)性，常夏重冬輕；（5）排除其他疾?。ㄈ顼E部褐青色痣、Riehl 黑變病及色素性光化性扁平苔蘚等）引起的色素沉著。中醫(yī)診斷、辨證分型參照國家技術(shù)監(jiān)督局1997 年版《中華人民共和國國家標(biāo)準(zhǔn)·中醫(yī)臨床診療術(shù)語證候部分》[5]中肝郁腎虛型的診斷：以脅脹作痛，情緒抑郁，耳鳴，腰膝酸軟等為常見證候。

1.3 納入標(biāo)準(zhǔn) （1）符合上述診斷及中醫(yī)辨證分型標(biāo)準(zhǔn)；（2）女性，年齡20～50 歲；（3）近1 個(gè)月內(nèi)未使用治療黃褐斑及影響內(nèi)分泌的藥物；（4）依從性良好的患者。

1.4 排除標(biāo)準(zhǔn) （1）口服避孕藥、妊娠、哺乳婦女；（2）年齡＜20 歲或＞50 歲；（3）男性黃褐斑患者；（4）由其他皮膚病引起的色素沉著；（5）合并有心、肝、腎、內(nèi)分泌、造血系統(tǒng)等內(nèi)科疾病。

2 方 法

2.1 治療方法 中藥組：予自擬方疏肝補(bǔ)腎湯：柴胡、當(dāng)歸、炒枳殼、炒白芍各12g，川芎、丹皮、澤瀉各9g，熟地、山萸肉、女貞子各15g，淮山藥30g，甘草6g。臨癥加減：肝郁氣滯為主者，加郁金、香櫞各9g，白蒺藜6g，玫瑰花5g；肝腎不足者，加枸杞子9g，菟絲子、杜仲各12g；伴失眠者，加珍珠母（先煎）、夜交藤各15g，合歡花9g；褐斑日久色深者，加丹參、赤芍各9g，白僵蠶6g，白芷9g；月經(jīng)不調(diào)、痛經(jīng)者，加制香附9g，桃仁、紅花各6g，益母草15g，澤蘭12g。水煎服，1 天1 劑，分2 次溫服，每次250mL。成藥組：予六味地黃丸（仲景宛西制藥股份有限公司，規(guī)格：1.44g/丸，批號(hào)131237），8 丸/次，3 次/天，紅花逍遙膠囊（云南楚雄天利藥業(yè)有限公司，規(guī)格：0.4g/粒，批號(hào)20131127），4 粒/次，3 次/天。兩組患者均外用廣譜防曬霜（薇諾娜，SPF30，PA+++，外出前30min 適量均勻涂抹于面部，戶外活動(dòng)時(shí)每2h 重復(fù)使用1 次）。4周為1 個(gè)療程，連續(xù)治療3 個(gè)療程。

2.2 觀察指標(biāo) 血清SOD、MDA、（-SH）含量檢測(cè)，清晨采集兩組患者治療前后及正常對(duì)照組空腹靜脈血2mL，于離心機(jī)3000r/min 離心10min，取上層血清1mL 置于-20℃冰箱保存待測(cè)。酶標(biāo)測(cè)試儀（美國伯樂公司，型號(hào)：iMark）檢測(cè)血清SOD、MDA 含量，全波長多功能酶標(biāo)儀（美國賽默飛世爾科技公司，型號(hào)：Varioskan Flash）檢測(cè)總（-SH）含量。采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫分析法（ELISA）檢測(cè)血清SOD、MDA含量（試劑盒均購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)20160182932、2016018293），采 用 微 量 酶 標(biāo) 法（MELIA）檢測(cè)總（-SH）含量（上海酶聯(lián)生物科技有限公司，批號(hào)2016011928），實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照說明書進(jìn)行。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS19.0 進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差） 表示，采用t 檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn)，P＜0.05 差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01為差異有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 兩組黃褐斑患者及正常對(duì)照組一般資料比較中藥組35 例，年齡26～48 歲，平均（39.80±4.88）歲；病程0.5～20 年，平均（4.24±3.95）年；根據(jù)皮損部位進(jìn)行分型：蝶型27 例，面上型6 例，泛發(fā)型2 例。成藥組35 例，年齡23～50 歲，平均（39.89±6.83）歲；病程0.1～20 年，平均（4.08±4.15）年；蝶型28 例，面上型5 例，泛發(fā)型2 例。正常對(duì)照組30 名，年齡20～50歲，平均（38.07±3.84）歲。三組一般資料比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

3.2 兩組治療前后及正常對(duì)照組血SOD、MDA、總（-SH）含量比較 治療前，兩組黃褐斑患者SOD、總（-SH）均低于正常對(duì)照組，MDA 均高于正常對(duì)照組（P 均＜0.01）；兩組間比較，血清SOD、MDA、總（-SH）含量差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P 均＞0.05）。治療后，中藥組、成藥組患者SOD、總（-SH）含量較治療前明顯升高，MDA 顯著降低（P 均＜0.01）；且中藥組上述指標(biāo)改善較成藥組更明顯（P 均＜0.05），見表1。

表1 兩組黃褐斑患者治療前后及正常對(duì)照組血SOD、MDA、總（-SH）含量比較（

表1 兩組黃褐斑患者治療前后及正常對(duì)照組血SOD、MDA、總（-SH）含量比較（

注：與正常對(duì)照組比較，*P＜0.01；與同組治療前比較，△P＜0.01；與成藥組治療后比較，▲P＜0.05；SOD：超氧化物歧化酶；MDA：丙二醛；總（-SH）：總巰基；中藥組：自擬疏肝補(bǔ)腎湯，成藥組：六味地黃丸+紅花逍遙膠囊

組別中藥組治療前治療后成藥組治療前治療后正常對(duì)照組例數(shù)35 SOD（U/mL）MDA（nmol/mL）總（-SH）（μmol/L）60.54±10.69*67.82±9.04△▲5.73±1.40*3.98±0.94△▲407.01±93.24*493.64±82.80△▲35 30 57.69±4.61*61.10±5.07△73.15±10.09 6.11±1.16*5.24±1.19△4.41±1.37 384.70±61.63*417.16±63.25△510.47±70.46

3.3 不良反應(yīng) 兩組患者治療期間均未出現(xiàn)嚴(yán)重不良反應(yīng)。

4討 論

研究發(fā)現(xiàn)，自由基增加及其代謝產(chǎn)物參與黃褐斑的發(fā)病[2，6-7]。抗氧化系統(tǒng)中，SOD、過氧化氫酶（CAT）和谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）是細(xì)胞內(nèi)的主要抗氧化酶，巰基（-SH）是還原型谷胱甘肽（GSH）的活性基團(tuán)，這些物質(zhì)的含量常用來評(píng)價(jià)氧化/抗氧化系統(tǒng)的功能。細(xì)胞膜上的脂質(zhì)過氧化物（LPO）容易分解產(chǎn)生MDA，促進(jìn)脂褐素即色素的生成，當(dāng)LPO、自由基增多，SOD、CAT、GSH-Px、（-SH）等抗氧化劑含量或活性降低，不能有效發(fā)揮協(xié)同作用清除MDA等氧化產(chǎn)物，自由基堆積，氧化/抗氧化系統(tǒng)失衡，導(dǎo)致酪氨酸酶活化，黑素細(xì)胞功能活躍，黑素生成增加，引起皮膚色素沉著。Havva 等[6]檢測(cè)55 例黃褐斑患者血清Cu/Zn-SOD 和GSH-Px 的酶活性、MDA、NO、蛋白羰基水平，結(jié)果顯示患者Cu/Zn-SOD 和GSH-Px 酶活性增高，但明顯低于正常對(duì)照組、MDA、NO 高于對(duì)照組，蛋白羰基水平低于對(duì)照組，張慧[7]檢測(cè)90 例黃褐斑患者血清SOD、MDA、GSH-Px、晚期氧化蛋白產(chǎn)物（AOPP），結(jié)果顯示黃褐斑患者氧自由基和TLRs/MYD88 水平與患者病情和治療效果密切相關(guān)，以上研究均表明黃褐斑患者體內(nèi)存在氧化應(yīng)激損傷。本研究對(duì)兩組黃褐斑患者及正常對(duì)照組血清SOD、MDA、總（-SH）含量進(jìn)行檢測(cè)，SOD、總（-SH）含量明顯低于正常對(duì)照組，MDA 含量顯著高于正常對(duì)照組，表明黃褐斑患者體內(nèi)存在氧化/抗氧化失衡，與上述研究結(jié)果相符，提示皮膚色素代謝障礙與氧化應(yīng)激損傷有關(guān)。

藥理研究證實(shí)，甘草、川芎、澤瀉、當(dāng)歸可抑制酪氨酸酶活性，減少黑素細(xì)胞增殖，川芎、當(dāng)歸對(duì)酪氨酸酶活性有雙向調(diào)節(jié)作用，山茱萸、枳殼、白芍等均對(duì)酪氨酸酶有不同程度的抑制作用，山萸肉、當(dāng)歸對(duì)多巴自動(dòng)氧化生成黑素具有顯著抑制作用[8-10]。李根林等[11]研究表明，丹皮、地黃、當(dāng)歸均有不同程度的體外清除自由基能力。本研究結(jié)果顯示，疏肝補(bǔ)腎湯治療后患者血清SOD、總（-SH）含量均明顯升高，MDA含量明顯降低，表明疏肝補(bǔ)腎法可能通過增加SOD、總（-SH）含量，改善患者的氧化應(yīng)激狀態(tài)，加速清除MDA 等氧自由基代謝產(chǎn)物來調(diào)節(jié)黑素代謝。