某豬場豬瘟病毒與豬圓環(huán)病毒混合感染的診斷

王 潤，牛緒東，張?jiān)穑S冠龍，李克鑫，李克欽，韓明遠(yuǎn)，劉建柱

（1.山東農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科技學(xué)院，山東 泰安 271018；2.中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所 農(nóng)業(yè)農(nóng)村部獸藥評審中心，北京 100081；3.山東德信生物科技集團(tuán)，山東 惠民 251700；4.濟(jì)南鑫寶星動物藥業(yè)有限公司，山東 濟(jì)南 250022）

豬圓環(huán)病毒病是由豬圓環(huán)病毒引起的豬的一種傳染病。本病可導(dǎo)致豬群產(chǎn)生嚴(yán)重的免疫抑制，從而容易導(dǎo)致繼發(fā)或并發(fā)其他傳染病。豬瘟俗稱“爛腸瘟”，是由豬瘟病毒引起的一種急性、發(fā)熱、接觸性傳染的傳染病。具有高度傳染性和致死性。本病在自然條件下只感染豬，不同年齡、性別、品種的豬和野豬都易感，一年四季均可發(fā)生。作者于2018 年4 月15 日對來診的山東省菏澤市某養(yǎng)豬戶飼養(yǎng)的豬群發(fā)病情況進(jìn)行全面的問診，并剖檢了1頭大約20 kg 體重的病死豬，經(jīng)過綜合分析，又通過實(shí)驗(yàn)室先進(jìn)的PCR 技術(shù)檢測，最終對本次病情確診為豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒混合感染而發(fā)生。現(xiàn)總結(jié)如下。

1 發(fā)病情況及其癥狀

該養(yǎng)殖場現(xiàn)存欄母豬29 頭，育肥豬180 頭。于2018 年2 月，育肥豬群開始大范圍的發(fā)生咳嗽、氣喘，畜主針對該癥狀使用獸用板藍(lán)根注射液，人用頭孢曲松鈉和慶大霉素口服，無明顯效果。3 月末至4 月初，因受天氣影響，溫差較大，病豬病初采食量減少，飲水尚可，精神沉郁，體溫40 ～41.5 ℃，隨后豬群開始發(fā)生腹瀉，大豬可自行恢復(fù)，仔豬病情時好時壞，尿液微黃并渾濁（圖1），個別豬只出現(xiàn)神經(jīng)癥狀，死后全身皮膚大范圍紫色出血點(diǎn)（圖2）。用人用炎琥寧與氧氟沙星混合口服使用，病情未見好轉(zhuǎn)，故4 月6 日上午對于病重豬進(jìn)行了15 頭份豬瘟疫苗注射。該養(yǎng)殖場平時對育肥豬春秋季于4 月、11 月各進(jìn)行一次豬口蹄疫免疫，仔豬于28 日齡斷奶前進(jìn)行了一次豬瘟免疫。

2 剖檢變化

病死豬全身淋巴結(jié)嚴(yán)重腫大，出血, 切面呈紅白相間的大理石樣周邊出血（圖3）；扁桃體腫脹、暗紅（圖4）喉頭、氣管及支氣管內(nèi)有黃色黏液和大量泡沫狀液體（圖5）；肺臟淤血、出血、水腫，呈暗紅色的肉樣變(圖6)；心包積液（圖7）；頭部皮下可見密集的針尖狀出血（圖8）；腎乳頭及輸尿管出血水腫(圖9）；膀胱黏膜點(diǎn)狀出血（圖10）。

3 CSFV、PRRSV、PCV2 和PRV 檢測

圖1 尿液微黃并渾濁

圖2 全身皮膚出現(xiàn)大范圍紫色出血點(diǎn)

分別采取病死豬的頜下淋巴結(jié)、脾臟、肝臟，肺臟用來提取病毒基因組。對豬瘟病毒(CSFV)和豬繁殖與呼吸綜合征病毒(PRRSV)，進(jìn)行RT-PCR 檢測，按照提取試劑盒(購置于北京全式金生物技術(shù)有限公司)說明書提取RNA，RTPCR 擴(kuò)增片段大小分別為599 bp 和432 bp，產(chǎn)物通過8%瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果。結(jié)果為CSFV 陽性，PRRSV 陰性（圖11）。

圖3 全身淋巴結(jié)嚴(yán)重腫大、出血

圖4 扁桃體腫脹、暗紅

圖5 喉頭、氣管及支氣管內(nèi)有黃色黏液和大量泡沫狀液體

圖6 肺臟淤血、出血、水腫，呈暗紅色的肉樣變

圖7 心包積液

圖8 頭部皮下可見密集的針尖狀出血

圖9 腎乳頭及輸尿管出血水腫

按照DNA 提取試劑盒說明書(購置于北京全式金生物技術(shù)有限公司) 進(jìn)行PCR 檢測。對采自病死豬的淋巴結(jié)，脾臟進(jìn)行DNA 提取，豬圓環(huán)病毒2 型（PCV2）擴(kuò)增片段為785 bp，豬偽狂犬病病毒（PRV）擴(kuò)增片段為632 bp，PCR產(chǎn)物經(jīng)過8%瓊脂糖凝膠電泳觀察結(jié)果，結(jié)果PCV2 為陽性、PRV 為陰性（圖11）。

4 診斷結(jié)果

經(jīng)過臨床癥狀、流行病學(xué)和病理剖檢顯示的變化，初步診斷為豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒的混合感染，隨后經(jīng)過實(shí)驗(yàn)室診斷，通過PCR檢測顯示CSFV、PCV2 為陽性，PRRSV、PRVgE 顯示為陰性，最終該病例確診為豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒混合感染。

圖10 膀胱黏膜點(diǎn)狀出血

5 討論與小結(jié)

根據(jù)養(yǎng)豬戶主提供的臨床信息，該豬場發(fā)生豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒混合感染的主要原因可能是：由于該養(yǎng)豬戶主按自定免疫程序?qū)嗄套胸i僅注射了較為廉價的豬瘟疫苗，無法保證其質(zhì)量，而且沒有對其他傳染病進(jìn)行免疫預(yù)防，造成豬群體內(nèi)對豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒免疫水平較低，豬圓環(huán)病毒病屬于免疫抑制性疾病，對豬瘟免疫效果產(chǎn)生一定的抑制作用，因此容易造成豬群發(fā)病[1]。豬圓環(huán)病毒病現(xiàn)在呈地區(qū)性流行趨勢且潛伏期長，一般只表現(xiàn)為輕微的呼吸道癥狀[2]不易引起養(yǎng)殖人員的重視，豬群得不到早期防治，造成豬群發(fā)生繼發(fā)感染。豬群發(fā)病時，正值季節(jié)交替、氣候多變，晝夜溫差較大，該養(yǎng)殖場的保溫措施較為簡單，養(yǎng)殖人員對氣溫快速變化應(yīng)對不及時，造成豬群多方面的嚴(yán)重應(yīng)激，使機(jī)體抵抗力下降，進(jìn)而引發(fā)豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒的感染。該豬群發(fā)病之前，在距該場1 km 遠(yuǎn)的地方有一發(fā)病豬場，極有可能是這次發(fā)病的重要原因之一。

圖11 PCR 的檢測

由于豬瘟病毒和豬圓環(huán)病毒的傳染能力強(qiáng)，目前沒有特效的治療方法[3]。針對這次發(fā)病豬群，建議讓畜主迅速隔離或淘汰發(fā)病嚴(yán)重豬只，對病死豬做無害化處理；對整個豬群進(jìn)行緊急免疫，加倍量注射豬瘟疫苗（細(xì)胞源），免疫3 d 后使用抗病毒中藥和增強(qiáng)免疫力的藥物；加強(qiáng)飼養(yǎng)管理，供給全價日糧，按合理飼養(yǎng)密度適應(yīng)季節(jié)變化，保持圈舍內(nèi)外的環(huán)境良好,減少豬群應(yīng)激。還應(yīng)注意，避免將不同日齡、不同大小的豬只混群，以減少和降低豬群之間PCV2 及其他病原的接觸感染機(jī)會[4]。建立完善生物安全體系，將消毒衛(wèi)生工作貫穿于養(yǎng)豬生產(chǎn)的各個環(huán)節(jié)，最大限度地降低豬場內(nèi)病原微生物的污染。

根據(jù)當(dāng)?shù)亓餍胁W(xué)的調(diào)查，做出相應(yīng)免疫的調(diào)整，進(jìn)行科學(xué)免疫。并且加強(qiáng)該豬場育肥豬免疫程序的完善，參考免疫程序：豬偽狂犬病首免為3 日齡滴鼻，二免為21日齡注射；豬瘟28 日齡首免注射，63 日齡二免注射；豬圓環(huán)病毒病于14 日齡進(jìn)行首免注射，35 日齡二免注射[5]。

對于豬傳染病的防制，要重視傳染病的三要素（傳染源、傳播途徑、易感群體），堅(jiān)持以養(yǎng)為主、防重于治、養(yǎng)防結(jié)合的原則。對疾病應(yīng)做到早發(fā)現(xiàn)、早處理，盡量避免擴(kuò)大化，把經(jīng)濟(jì)損失降到最低。