MMP-9、D-二聚體在川崎病患兒中的水平變化分析

邱大健 張怡 華益民 石曉青

（1四川大學(xué)華西第二醫(yī)院心臟發(fā)育與早期干預(yù)研究室出生缺陷與相關(guān)婦兒疾病教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室四川 成都 610041）

（2四川大學(xué)華西第二醫(yī)院兒童心血管科 四川 成都 610041）

川崎?。↘D）是一種好發(fā)于5歲以下人群的皮膚黏膜淋巴結(jié)綜合征，是一種血管炎綜合征；臨床癥狀主要有持續(xù)發(fā)熱、皮疹、口腔黏膜炎、手足硬性水腫等，可累及冠狀動(dòng)脈等，是小兒后天性心臟病的重要原因。KD病因尚不明確，但研究發(fā)現(xiàn)，血管內(nèi)皮損傷、血液高凝狀態(tài)等在KD發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮重要作用。本研究探討KD患兒中基質(zhì)金屬蛋白酶9（MMP-9）、D-二聚體（D-D）的水平，旨在為KD的早期診斷提供更多依據(jù)。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本研究選取2016年12月—2018年12月我院收治的確認(rèn)為KD的120例患兒作為觀察組，納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均確診為KD，診斷標(biāo)準(zhǔn)參照日本川崎病研究委員會(huì)第4次修訂的川崎病診斷標(biāo)準(zhǔn)[1]，病程＜10d，本研究經(jīng)我院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，所有患兒家屬知情同意并自愿參與。排除標(biāo)準(zhǔn)：先心病患兒，血液系統(tǒng)疾病患兒，嚴(yán)重感染患兒，近一周接受過抗凝藥、丙種球蛋白、免疫抑制劑等治療患兒，不能配合完成研究患兒。其中男75例，女45例；年齡11個(gè)月～5歲，平均年齡（2.3±0.7）歲。同期選取在我院進(jìn)行健康體檢的120名兒童作為對(duì)照組，所有患者均無心血管及血液系統(tǒng)疾病，近一周未進(jìn)行藥物治療；其中男70例，女50例；年齡1歲～5歲，平均年齡（2.2±0.6）歲。兩組一般資料經(jīng)統(tǒng)計(jì)分析，差異不顯著（P＞0.05），組間具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 影像學(xué)檢查 利用心電圖儀測(cè)定心電圖；利用彩色電腦超聲診斷儀測(cè)定超聲心動(dòng)圖，觀察患兒有無冠脈損害。

1.2.2 樣品采集 所有受試患兒均晨起采外周靜脈血5 mL，其中3ml用于離心收集外周血單個(gè)核細(xì)胞，MMP-9 mRNA的檢測(cè)；2ml用于檢測(cè)血清MMP-9及血漿D-D水平。

1.2.3 血清MMP-9及血漿D-D水平檢測(cè) 血清MMP-9蛋白水平采用ELISA法進(jìn)行測(cè)定，血漿D-D水平采用乳膠凝集法進(jìn)行測(cè)定；具體操作按試劑盒說明書進(jìn)行。

1.2.4 外周血單個(gè)核細(xì)胞中MMP-9 mRNA水平檢測(cè) 采用TRIzol法提取總RNA，總RNA提取后電泳法測(cè)定其完整性，紫外分光光度儀測(cè)量其質(zhì)量及濃度。采用反轉(zhuǎn)錄試劑盒（TaKaRa）得cDNA，qRT-PCR法檢測(cè)MMP-9 mRNA表達(dá)量。反應(yīng)體系為：95℃30s，變性（95℃，45s），退火（72℃，45s），延伸（60，34s），共40個(gè)循環(huán)，72℃延伸10min，見表1。

表1 熒光實(shí)時(shí)定量PCR引物

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

數(shù)據(jù)采用SPSS21.0軟件進(jìn)行分析，計(jì)量資料采用（均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差）表示，進(jìn)行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料采用百分比表示，進(jìn)行卡方檢驗(yàn)；P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 兩組患兒血漿D-D水平比較結(jié)果

觀察組患兒血漿D-D水平為（1.57±0.32）mg/L，對(duì)照組患兒血漿D-D水平為（0.25±0.11）mg/L，兩組比較差異顯著（t=42.7328，P＜0.05）。

2.2 兩組患兒血清MMP-9蛋白水平及外周血單個(gè)核細(xì)胞中MMP-9 mRNA水平比較結(jié)果

觀察組患兒血清MMP-9蛋白水平及外周血單個(gè)核細(xì)胞中MMP-9 mRNA水平均顯著高與對(duì)照組（P＜0.05），見表2。

表2 兩組患兒血清觀察指標(biāo)結(jié)果比較（）

表2 兩組患兒血清觀察指標(biāo)結(jié)果比較（）

組別 n 血清MMP-9（ng/ml） MMP-9 mRNA觀察組 120 213.57±23.71 0.57±0.11對(duì)照組 120 78.93±12.84 0.11±0.08 t-54.7002 37.0478 P-＜0.05 ＜0.05

3.討論

KD是一種發(fā)病機(jī)制尚不明確的免疫相關(guān)性炎性疾病，其主要臨床特征為全身性的血管炎，以心血管系統(tǒng)損害特別是冠狀動(dòng)脈損傷最為嚴(yán)重，嚴(yán)重影響患兒的身體健康及生長發(fā)育。MMP-9是一種基質(zhì)金屬蛋白酶家族成員，在細(xì)胞外基質(zhì)降解及組織重建中發(fā)揮重要作用；已有研究發(fā)現(xiàn)，MMP-9在受損冠狀動(dòng)脈損傷組織中高表達(dá)[2]；D-D是一種機(jī)體血液高凝狀態(tài)的重要分子標(biāo)志，而既往研究表明，KD與機(jī)體高凝狀態(tài)存在一定關(guān)系[3]；基于以上理論基礎(chǔ)，我們推測(cè)MMP-9及KD的水平變化可能與KD的發(fā)生發(fā)展相關(guān)。

本研究結(jié)果顯示，MMP-9、D-D可作為KD，特別是不完全、不典型KD早期診斷的一項(xiàng)參考指標(biāo)，減少對(duì)該病的誤診、漏診，使患者能及時(shí)接受針對(duì)性的治療。