諾如病毒性胃腸炎快速檢測(cè)方法的研究

陳德超 曾迎春 徐昭英 郭艷

（自貢市大安區(qū)疾病預(yù)防控制中心 四川 自貢 643000）

病毒性腸胃炎主要的臨床癥狀為腹痛、嘔吐等情況，主要的致病病菌為諾如病毒，該病毒具有很高的隨機(jī)性，發(fā)病患者的年齡極為普遍，對(duì)人們的正常生活造成嚴(yán)重的影響。本文主要通過2017年5月—2019年5月于我院進(jìn)行就趁的腸胃炎患者進(jìn)行檢測(cè)，運(yùn)用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)和轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)檢測(cè)比較，研究?jī)?nèi)容報(bào)告如下。

1.資料與方法

1.1 一般資料

本次的研究所選擇的研究對(duì)象均為2017年5月—2019年5月于我中心進(jìn)行就診的腸胃炎患者120例，其中男性患者78例，女性患者42例，年齡為18～74歲，平均年齡（41.5±7.5）歲，所有的患者均有腹瀉、嘔吐等臨床癥狀、每日排便≥3次，且糞便以及血常規(guī)檢查無特殊情況。

1.2 方法

1.2.1 樣板采集方法 所有的實(shí)驗(yàn)樣板采集便盒均由市疾病預(yù)防中心統(tǒng)一發(fā)放。對(duì)所有患者3日內(nèi)的糞便樣板進(jìn)行采集，每份樣本在5～20ml之間，標(biāo)本采集后立即低溫送檢，如有不能及時(shí)送檢的情況，則需要在-20℃的環(huán)境下冰凍保存。

1.2.2 樣板處理方法 在進(jìn)行試驗(yàn)的過程中，對(duì)待處理的樣本在室溫下復(fù)融，取樣本稀釋液1ml，之后在其中加入0.1g的固態(tài)糞便樣本搖勻混合，在常溫環(huán)境下靜置10分鐘，接下來在5500r/min的離心機(jī)下進(jìn)行離心5～6min

1.2.3 反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng) 其主要的反應(yīng)體系有：2.5μL緩沖液，2.5μL的BSA，模板RNA 1.5μL，2.5mol/L MgCl2等。將PCR反應(yīng)體系離心，使用PCR儀進(jìn)行擴(kuò)增。在94℃的環(huán)境下變性反映3min，接下來反應(yīng)1min，58℃反應(yīng)80s，72℃反應(yīng)1min，將以上順序反復(fù)進(jìn)行30～40次。將反應(yīng)體系放入恒溫?cái)U(kuò)增系統(tǒng)中，在43℃的換機(jī)構(gòu)下預(yù)熱反應(yīng)5min，最后將5μL的反應(yīng)酶依次加入反應(yīng)體系中進(jìn)行檢測(cè)。最終得出檢測(cè)結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

對(duì)統(tǒng)計(jì)的所有數(shù)據(jù)均采用SPSS19.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2.結(jié)果

2.1 轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比

運(yùn)用兩種檢測(cè)方法對(duì)諾如病毒進(jìn)行檢測(cè)結(jié)果，其中有48例患者的結(jié)果均為陽性，60例患者的結(jié)果均為陰性。轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果為陽性53例，陰性67例；反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)為陰性的患者有65例，陰性55例，見表。

表 轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果對(duì)比（n）

通過表中的數(shù)據(jù)，在實(shí)驗(yàn)中，以反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果作為金標(biāo)準(zhǔn)，對(duì)轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)的靈敏度和特異性及準(zhǔn)確率進(jìn)行計(jì)算：

其靈敏度為：均為陽性數(shù)/反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)陽性數(shù)=48/55×100%=87.27%

其特異性為：均為陰性數(shù)據(jù)/反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)陰性數(shù)=60/65×100%=92.31%

準(zhǔn)確率=（均陽性+均陰性）/總例數(shù)=（48+60）/120×100%=90.0%

3.討論

病毒性腸胃炎是當(dāng)前臨床醫(yī)學(xué)上常見的癥狀之一。諸多研究結(jié)果表明，諾如病毒是導(dǎo)致病毒性腸胃炎的重要病原體之一[1]。諾如病毒有名若瓦克樣病毒，其本身具有感染性高，抵抗能力強(qiáng)、傳播速度快等特點(diǎn)，患者一旦感染后具有持續(xù)缺乏免疫力等現(xiàn)象，對(duì)患者的活動(dòng)造成嚴(yán)重的影響。諾如病毒形狀呈圓球狀，直徑大約在25～38nm之間，傳統(tǒng)的諾如病毒檢測(cè)方法是通過電鏡檢查，但是該檢查方法具有極低的檢出率，這項(xiàng)檢測(cè)方法是分別基于病毒外形特點(diǎn)、主要抗原決定簇和特異性核酸序列而建立的，并且和操作手法也有密切的關(guān)系[2]。伴隨著科技的發(fā)展，目前在臨床上對(duì)諾如病毒的檢測(cè)是采取轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)進(jìn)行檢測(cè)，該方法具有良好的靈敏度以及特異性，但是需要檢測(cè)人員具備更高技術(shù)水平，因此，運(yùn)用該項(xiàng)技術(shù)檢測(cè)前，需要提高操作人員的綜合能力。

本研究結(jié)果通過轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)和反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行對(duì)比，其中有48例患者兩種檢測(cè)均為陽性，60例患者均為陰性，通過對(duì)其靈敏度以及特異性的檢測(cè)，其靈敏度為87.27%，特異性為92.31%，準(zhǔn)確性為90.0%。本研究結(jié)果與劉遠(yuǎn)興[3]等人的研究結(jié)果相似，說明該結(jié)果的可靠性。

綜上所述，針對(duì)諾如病毒的檢測(cè)使用轉(zhuǎn)錄反轉(zhuǎn)錄協(xié)同實(shí)驗(yàn)，能夠快速有效檢測(cè)出來，并且具有良好的靈敏度以及特異性，值得臨床運(yùn)用。