多花黃精植株再生及繁殖研究

2

(1.福建農(nóng)林大學(xué)園藝學(xué)院， 福州 350002;2.蘭科植物保護(hù)與利用國(guó)家林業(yè)與草原局重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室， 福州 350002)

多花黃精(PolygonatumcyrtonemaHua)屬于百合科( Liliaceae )黃精屬(PolygonatumMill.)多年生草本藥用植物[1-2]。分布在東北、華北、西北和華東等地，多花黃精集藥用、觀賞和食用價(jià)值于一體，根莖含淀粉、煙酸、黃酮、多種氨基酸、維生素、多種皂甙，具有益氣養(yǎng)陰、強(qiáng)壯筋骨、治療風(fēng)濕痛、降血脂、降血壓、降血糖、抗衰老及抗腫瘤等作用[3-7]。隨著多花黃精藥用價(jià)值的開(kāi)發(fā)，野生資源被人為肆意挖掘破壞嚴(yán)重，使得有限的野生資源逐漸減少[8-9]。

由于多花黃精種子繁殖后代性狀分化嚴(yán)重，不能通過(guò)播種大量繁殖苗木[10]。繁育培養(yǎng)既能實(shí)現(xiàn)植物個(gè)體的快速大量繁殖，又能較好地保持植物的種質(zhì)特性[11]，是實(shí)現(xiàn)多花黃精工廠化育苗，加快良種推廣應(yīng)用的關(guān)鍵技術(shù)。有關(guān)多花黃精的組培快繁技術(shù)已有不少研究[12-19]，但主要集中在根莖繁殖[13]，使用未成熟黃精莢果進(jìn)行芽萌發(fā)誘導(dǎo)少見(jiàn)報(bào)道。為了建立一套高效、高質(zhì)、快速的多花黃精工廠化育苗體系，本實(shí)驗(yàn)在前人對(duì)多花黃精組培快繁技術(shù)研究與生產(chǎn)實(shí)踐的基礎(chǔ)上，選取優(yōu)質(zhì)多花黃精母株上成熟度為70%的莢果為外植體進(jìn)行繁育，研究不同激素、不同生長(zhǎng)素配比、不同光照強(qiáng)度控制等因素對(duì)多花黃精種子芽萌發(fā)誘導(dǎo)、芽增殖誘導(dǎo)、瓶苗生根誘導(dǎo)及移栽的影響，建立了多花黃精植株再生體系。

圖1 A為野生多花黃精植株，B為成熟度為70%莢果

1 材料與方法

1.1 材 料

試驗(yàn)材料采自福建泰寧大田鄉(xiāng)壘際村夏家地海拔500 m的林下，選擇長(zhǎng)勢(shì)良好黃精植株作為母株，取顆粒飽滿、無(wú)病蟲(chóng)害、成熟度為70%的莢果，用濕紗布包裹帶回實(shí)驗(yàn)室，置4 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 外植體處理

用洗衣粉清洗去除莢果表面塵埃，置于流水下沖洗干凈，純水沖蕩2～3遍，置于超凈工作臺(tái)內(nèi)用體積分?jǐn)?shù)為75%酒精消毒30 s，用5%次氯酸鈉消毒10～15 min并加入2～3滴吐溫80，無(wú)菌水沖蕩3～4遍后，用無(wú)菌濾紙吸干材料表面水分備用。

1.3 培養(yǎng)基與培養(yǎng)條件

基本培養(yǎng)基為MS，附加蔗糖 20 g·L-1、瓊脂 7.0 g·L-1、活性炭 0.5 g·L-1，pH值為5.8，溫度為(23±2)℃，初始接種的培養(yǎng)體在暗培養(yǎng)條件下5～10 d，然后移到光照強(qiáng)度為0～2 000 lx 遞增培養(yǎng)，光照時(shí)間為每天10 h。

1.4 外植體選擇

將無(wú)菌處理后的莢果，用無(wú)菌手術(shù)刀剝除外種皮，把剝除種皮后的種子接種到MS培養(yǎng)基上，附加蔗糖20 g·L-1、瓊脂7.0 g·L-1、活性炭0.5 g·L-1，pH值為5.8，總計(jì)5個(gè)組，每組接10瓶，每瓶接入3粒種子，重復(fù)3次。在溫度(23±2)℃下暗培養(yǎng)10 d。10 d后移到光照強(qiáng)度為0～2 000 lx下培養(yǎng)，光照時(shí)間為每天10 h。30 d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，用于研究不同成熟度對(duì)種子萌發(fā)的影響。

萌發(fā)率(%)=(每組萌發(fā)種子粒數(shù)/每組接種種子粒數(shù))×100%。

1.5 誘導(dǎo)種子萌發(fā)

將無(wú)菌處理后的種子，用無(wú)菌手術(shù)刀剝除外種皮，把剝除種皮后的種子接種到MS基本培養(yǎng)基，附加蔗糖 20 g·L-1、瓊脂 7.0 g·L-1、活性炭 0.5 g·L-1，pH值為5.8，然后將不同質(zhì)量濃度的BA、NAA分組加入，總計(jì)15個(gè)組，每組接10瓶，每瓶接入3粒種子，重復(fù)3次。在溫度(23±2)℃下暗培養(yǎng)10 d。10 d后移到光照強(qiáng)度為0～500 lx遞增培養(yǎng)，光照時(shí)間為每天10 h。30 d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，研究不同質(zhì)量濃度BA、NAA配比對(duì)多花黃精種子芽誘導(dǎo)萌發(fā)的影響。

誘導(dǎo)萌發(fā)率(%)=(萌發(fā)粒數(shù)/接種總粒數(shù))×100%。

1.6 誘導(dǎo)芽增殖

當(dāng)種子抽出莖葉并長(zhǎng)出胚根時(shí)，切取莖段，將其轉(zhuǎn)入MS基本培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，附加蔗糖 20 g·L-1、瓊脂 7.0 g·L-1、活性炭 0.5 g·L-1，pH值為5.8，然后將不同質(zhì)量濃度的BA、KT、NAA分組加入(見(jiàn)表2)，總計(jì)9組，每組接10瓶，重復(fù)3次，每瓶接入3個(gè)莖段。在溫度(23±2)℃，光照強(qiáng)度從500～1 000 lx遞增，光照時(shí)間為每天10 h。培養(yǎng)30 d(見(jiàn)圖3)后統(tǒng)計(jì)各處理的誘導(dǎo)芽數(shù)和增殖率，從中篩選出最適宜多花黃精誘導(dǎo)芽增殖的培養(yǎng)基。

芽增殖率(%)=(每組增殖粒數(shù)/每組接種粒數(shù))×100%。

1.7 誘導(dǎo)瓶苗生根

經(jīng)誘導(dǎo)芽增殖培養(yǎng)后，選取長(zhǎng)勢(shì)健壯的植株，接種到1/2 MS基本培養(yǎng)基進(jìn)行生根培養(yǎng)(見(jiàn)圖4)，附加蔗糖 20 g·L-1、瓊脂 7.0 g·L-1、活性炭 0.5 g·L-1，pH值為5.8，然后將不同質(zhì)量濃度的IBA和IAA分組加入(見(jiàn)表3)，總計(jì)16組，每組接10瓶，重復(fù)3次，每瓶接入1棵植株，溫度(23±2)℃，光照強(qiáng)度從1 000～2 000 lx遞增，光照時(shí)間為每天10 h。培養(yǎng)40 d(見(jiàn)圖3)后統(tǒng)計(jì)生根率和平均生根數(shù)，從中篩選出最適宜多花黃精誘導(dǎo)瓶苗生根的培養(yǎng)基。

圖3 A為接種30 d，B為接種40 d

圖2 去除莢果種皮接種于MS培養(yǎng)基

生根率(%)=(生根苗數(shù)/接種苗數(shù))×100%;

平均生根數(shù)=每組根數(shù)總和/每組接種苗數(shù)。

1.8 煉苗與移栽

經(jīng)生根培養(yǎng)后，選取健壯植株試管苗，置自然光溫室環(huán)境下煉苗5～8 d,打開(kāi)瓶蓋煉苗3～5 d，將根表面殘留培養(yǎng)基沖洗干凈，移栽到V(腐殖質(zhì))∶V(粉碎落葉)=2∶1、V(腐殖質(zhì))∶V(沙子)=1∶1及V(泥炭土)∶V(腐殖質(zhì))∶V(珍珠巖)=6∶3∶1的3種混合基質(zhì)中，每盆種植1株在溫室環(huán)境下培養(yǎng)，移栽苗第1次水澆透，每隔3 d澆水1次(可根據(jù)不同季節(jié)、天氣來(lái)調(diào)整)，光照強(qiáng)度保持在1 000～2 000 lx，溫室內(nèi)空氣濕度保持在75%～85%之間，避免陽(yáng)光直射。30 d后統(tǒng)計(jì)成活率，篩選出最適宜多花黃精瓶苗移栽的基質(zhì)。

成活率(%)=(成活總數(shù)/移栽總數(shù))×100%。

1.9 數(shù)據(jù)分析

采用DPS分析軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理及方差分析，多重比較采用顯著系數(shù)為0.05的Duncan新復(fù)極差法分析評(píng)價(jià)差異顯著性。所有處理應(yīng)用正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)法，計(jì)算結(jié)果用“平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差”表示。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同成熟度莢果對(duì)種子萌發(fā)的影響

由表1可知，不同成熟度莢果對(duì)種子萌發(fā)具有不同的影響；30 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，萌發(fā)率最高。

表1 不同成熟度莢果對(duì)種子萌發(fā)的影響

處理成熟度/%萌發(fā)率/%H120 1.67±0.57eH25029.67±0.58bH37052.00±1.00aH49024.33±0.58cH5100 9.00±0.82d

注：表中同列不同小寫(xiě)字母表示差異顯著水平。下同。

2.2 不同濃度NAA、BA對(duì)芽誘導(dǎo)的影響

以MS為基本培養(yǎng)基，將不同濃度的NAA、BA分組加入，在溫度(23±2)℃下暗培養(yǎng)10 d。10 d后移到光照強(qiáng)度為0～500 lx條件下培養(yǎng)，光照時(shí)間為每天10 h。30 d后統(tǒng)計(jì)萌發(fā)率，由表2可知：在不加NAA的W 2到W 5中，隨著B(niǎo)A濃度的遞增，芽誘導(dǎo)萌發(fā)率呈先增后減的趨勢(shì)；當(dāng)BA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，萌發(fā)率最高，為61.33%，效果最明顯；隨著B(niǎo)A濃度從0.5 mg·L-1到1.5 mg·L-1增加，萌發(fā)率呈遞減趨勢(shì)；當(dāng)BA濃度為1.5 mg·L-1時(shí)，抽出的芽有死亡的預(yù)兆。在不加BA的W 6和W 11中，隨著NAA濃度的增加，誘導(dǎo)萌發(fā)率較低，與空白對(duì)照的W 1無(wú)顯著性差異；在W 7到W 10中，當(dāng)NAA濃度為0.1 mg·L-1時(shí)，隨著B(niǎo)A濃度的增加，誘導(dǎo)萌發(fā)率呈遞減趨勢(shì)，BA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，效果最明顯；W 12到W 15呈現(xiàn)出與W 6到W 11一致的現(xiàn)象。在W 2、W 7、W 12中，BA濃度為0.5 mg·L-1不變，隨著NAA濃度從0 mg·L-1到0.3 mg·L-1遞增，誘導(dǎo)萌發(fā)率呈遞減趨勢(shì)，且BA濃度為0.5 mg·L-1、NAA濃度為0 mg·L-1時(shí)，效果最明顯。綜上：多花黃精種子芽誘導(dǎo)培養(yǎng)最適宜的培養(yǎng)基為MS+BA 0.5 mg·L-1+瓊脂7.0 g·L-1+蔗糖 20 g·L-1+活性炭 0.5 g·L-1。

圖4 A為增殖誘導(dǎo)，B為移栽

表2 不同質(zhì)量濃度NAA、BA對(duì)芽誘導(dǎo)的影響

處理NAA/(mg·L-1)BA/(mg·L-1)誘導(dǎo)萌發(fā)率/%W10.00.0 8.04±0.78eW20.00.5 61.33±2.52aW30.01.0 42.24±2.05cW40.01.5 42.31±2.08cW50.02.0 25.33±2.07dW60.1 0.0 8.09±0.53eW70.1 0.5 52.81±2.04bW80.1 1.0 42.23±2.11cW90.1 1.5 42.30±2.12cW100.1 2.0 25.28±2.01dW110.3 0.0 8.12±0.48eW120.3 0.5 52.79±1.98bW130.3 1.0 42.29±2.11cW140.3 1.5 25.26±1.91dW150.3 2.0 8.08±0.62e

2.3 不同濃度激素配比對(duì)誘導(dǎo)芽增殖的影響

由表3可知，不同濃度激素配比對(duì)多花黃精誘導(dǎo)芽增殖具有不同的影響；經(jīng)增殖培養(yǎng)，30 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在M 1、M 4、M 7中，KT為0.5 mg·L-1，隨著B(niǎo)A濃度的遞增，誘導(dǎo)芽數(shù)和增殖率都呈遞增趨勢(shì)，當(dāng)BA濃度為1.5 mg·L-1，叢生芽較多，有效芽少，可知高濃度BA有利于增殖倍數(shù)的增加，抑制有效芽產(chǎn)生；在M 4到M 6中，BA為1.0 mg·L-1，隨著KT濃度的遞增，NAA濃度的遞減，誘導(dǎo)芽數(shù)和增殖率M 5>M 6>M 4，表明在KT濃度為1.0 mg·L-1時(shí)，出芽情況最佳；在M 2、M 4、M 7、M 8處理中，誘導(dǎo)芽數(shù)和增殖率沒(méi)有顯著性差異，但NAA濃度為0.5 mg·L-1的M 2和M 4較NAA濃度為0.3 mg·L-1和 0.1 mg·L-1的M 7和M 8長(zhǎng)勢(shì)差，M 7和M 8中芽苗長(zhǎng)勢(shì)好，葉色綠；NAA為0.3 mg·L-1時(shí)，接種的材料有毛細(xì)根生成，且生長(zhǎng)較快。芽苗長(zhǎng)勢(shì)最好且有效芽最多的是處理M 5，效果最明顯；綜上：多花黃精誘導(dǎo)芽增殖培養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基為MS + NAA 0.3 mg·L-1+ BA 1.0 mg·L-1+ KT 1.0 mg·L-1+ 蔗糖 20 g·L-1+ 瓊脂 7.0 g·L-1+ 活性炭 0.5 g·L-1，誘導(dǎo)芽數(shù)為3.42個(gè)，芽增殖率為76.74%，且長(zhǎng)勢(shì)好，生根快。

2.4 不同濃度激素配比對(duì)誘導(dǎo)生根的影響

由表4可知，不同濃度激素配比對(duì)誘導(dǎo)生根具有不同的影響，經(jīng)生根培養(yǎng)，40 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在只加入IAA的P 2到P 4中，隨著IAA濃度遞增，生根率和平均生根數(shù)呈遞增趨勢(shì)；在只加入IBA的P 5到P 7中，隨著IBA濃度的遞增，生根率和平均生根數(shù)呈遞增趨勢(shì)；從表4可看出，在相同濃度下，只加入IBA培養(yǎng)基各方面指標(biāo)明顯優(yōu)于只加入IAA的培養(yǎng)基；故生根培養(yǎng)誘導(dǎo)能力IBA>IAA。在加入不同濃度、不同配比的P 8到P 10中，IAA為0.5 mg·L-1，IBA從0.5 mg·L-1到1.5 mg·L-1遞增，生根率和平均生根數(shù)呈遞減趨勢(shì)；P 11到P 13和P 14到P 16與P 8到P 10結(jié)果一致；即IBA為0.5 mg·L-1最有利于瓶苗生根。在加入IBA 0.5 mg·L-1和IAA 1.0 mg·L-1的P 11中，生根率為81.71%，平均生根數(shù)為6.11個(gè)，效果最明顯；綜上：多花黃精瓶苗生根培養(yǎng)適宜培養(yǎng)基為1/2 MS+IAA 1.0 mg·L-1+IBA 0.5 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+瓊脂7.0 g·L-1+活性炭0.5 g·L-1。

2.5 移栽基質(zhì)的選擇

經(jīng)移栽培養(yǎng)，30 d后統(tǒng)計(jì)發(fā)現(xiàn)，在V(腐殖質(zhì))∶V(落葉)=2∶1、V(腐殖質(zhì))∶V(沙子)=1∶1及V(泥炭土)∶V(腐殖質(zhì))∶V(珍珠巖)=6∶3∶1三種混合基質(zhì)中都能成活，移栽成活率分別為72%、65%、85%，因此移栽的適宜基質(zhì)為V(泥炭土)∶V(腐殖質(zhì))∶V(珍珠巖)=6∶3∶1的混合基質(zhì)。

表3 不同濃度激素配比對(duì)誘導(dǎo)芽增殖的影響

處理BA/(mg·L-1)KT/(mg·L-1)NAA/(mg·L-1)誘導(dǎo)芽數(shù)增殖率/%長(zhǎng)勢(shì)M10.50.50.11.24±0.05d41.37±1.38e﹣M20.510.52.29±0.12c58.07±2.02c﹢M30.51.50.33.28±0.07b62.44±2.12b﹢﹢M410.50.52.27±0.06c58.12±1.92c﹢M5110.33.42±0.09a76.74±2.35a﹢﹢﹢M611.50.13.26±0.05b62.47±2.07b﹢﹢M71.50.50.32.31±0.14c62.41±2.08b﹢﹢M81.510.12.29±0.08c62.39±2.14b﹢﹢M91.51.50.51.27±0.04d43.36±1.34d﹣

注：“﹢﹢﹢”表示長(zhǎng)勢(shì)好，“﹢﹢”表示長(zhǎng)勢(shì)較好，“﹢”表示長(zhǎng)勢(shì)一般，“﹣”表示長(zhǎng)勢(shì)差。下同。

表4 不同濃度的激素配比對(duì)誘導(dǎo)生根的影響

處理IAA/(mg·L-1)IBA/(mg·L-1)生根率/%平均生根數(shù)長(zhǎng)勢(shì)P10012.01±0.32g1.70±0.10f﹣P20.5024.93±0.91f2.96±0.15e﹢P31024.97±0.82f3.09±0.11e﹢P41.5026.82±1.21e3.11±0.09e﹢P500.526.78±1.18e3.13±0.05e﹢P60136.27±1.47d4.17±0.12d﹢P701.536.33±1.52d4.18±0.08d﹢P80.50.570.66±2.08b5.14±0.15b﹢﹢P90.5158.23±1.98c4.72±0.09c﹢﹢P100.51.558.27±2.02c4.82±0.12c﹢﹢P1110.582.71±2.52a6.11±0.08a﹢﹢﹢P121170.64±2.09b5.14±0.13b﹢﹢P1311.558.31±2.09c4.84±0.06c﹢﹢P141.50.570.68±2.02b5.15±0.11b﹢﹢P151.5170.62±1.94b5.12±0.14b﹢﹢P161.51.536.32±1.42d4.16±0.09d﹢﹢

3 討 論

3.1 外植體的選擇

本研究以成熟度為70%的野生多花黃精母株上的莢果為外植體，在繁育過(guò)程中發(fā)現(xiàn)，取完全成熟的果子比70%成熟度莢果為外植體的萌發(fā)時(shí)間要遲30～35 d，成熟度為20%～50%的種子萌發(fā)時(shí)間較成熟度70%種子萌發(fā)率低，萌發(fā)生長(zhǎng)不一致甚至出現(xiàn)死亡發(fā)黑現(xiàn)象。內(nèi)源激素ABA會(huì)抑制胚的萌發(fā)，誘導(dǎo)種子休眠；而多花黃精種子在成熟過(guò)程中，前期ABA含量較高，中期ABA含量最低，完熟期ABA變高[20]。這與本研究結(jié)果一致，因此，選擇莢果成熟度為70%的野生多花黃精為外植體，更有利于解除種子休眠，促進(jìn)離體培養(yǎng)時(shí)種子的萌發(fā)。

3.2 芽誘導(dǎo)培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)中，在W 2到W 5中，隨著B(niǎo)A濃度遞增，種子萌發(fā)率呈先增后減的趨勢(shì)；當(dāng)BA濃度為0.5 mg·L-1時(shí)，萌發(fā)率最高，為61.33%；隨著B(niǎo)A濃度(0.5～1.5 mg·L-1)的增加，萌發(fā)率呈降低趨勢(shì)；當(dāng)BA濃度為1.5 mg·L-1時(shí)，抽出的芽有死亡的預(yù)兆；在W 2、W 7、W 12中，BA濃度為0.5 mg·L-1不變，隨著NAA濃度從0～0.3 mg·L-1遞增，誘導(dǎo)萌發(fā)率呈遞減趨勢(shì)，表明NAA在多花黃精芽誘導(dǎo)培養(yǎng)中沒(méi)有明顯作用。由于黃精種子在打破休眠，生長(zhǎng)期長(zhǎng)、難以取材等方面有一定的難度，所以有關(guān)使用未成熟黃精莢果進(jìn)行芽萌發(fā)誘導(dǎo)的研究少有報(bào)道。在繁育培養(yǎng)中，多花黃精種子易于消毒，較根莖容易建立無(wú)菌體系[21]。本研究61.33%的芽誘導(dǎo)率不太理想，希望能為多花黃精種子芽誘導(dǎo)萌發(fā)培養(yǎng)提供材料。

3.3 芽增殖培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

在誘導(dǎo)芽增殖培養(yǎng)中，若要提高增殖倍數(shù)需增加BA和KT的用量，但得到的芽苗細(xì)弱，相反若想讓芽苗長(zhǎng)得完整、健壯，則增殖倍數(shù)就會(huì)降低[22]，這與本研究結(jié)果一致，當(dāng)BA濃度為1.5 mg·L-1時(shí)，增殖倍數(shù)增加，有效芽少；因此，在既保證有效健壯芽的增加又能提高增殖倍數(shù)的情況下，選擇出多花黃精種子誘導(dǎo)芽增殖最適宜的培養(yǎng)基是MS+BA 1.0 mg·L-1+KT 1.0 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+瓊脂7.0 g·L-1+活性炭0.5 g·L-1；誘導(dǎo)芽數(shù)為3.42個(gè)，芽增殖率為76.74%。

表5 不同基質(zhì)配方對(duì)瓶苗移栽成活的影響

處理基質(zhì)成活率/%V1V(泥炭土)∶V(腐殖質(zhì))∶V(珍珠巖)=6∶3∶185V2V(腐殖質(zhì))∶V(沙子)=1∶165V3V(腐殖質(zhì))∶V(粉碎落葉)=2∶172

3.4 生根培養(yǎng)中存在的問(wèn)題

本研究結(jié)果表明：生根培養(yǎng)時(shí)以1/2 MS為基本培養(yǎng)基，加入IBA 0.5 mg·L-1和IAA 1.0 mg·L-1后，效果最佳，生根率為81.71%，這與劉紅美等[23]的研究結(jié)果不同，這可能與試驗(yàn)中使用的藥品來(lái)源、碳源種類(lèi)、光照時(shí)間、光照強(qiáng)度、培養(yǎng)時(shí)間或黃精的種源等不同有關(guān)；本研究還得出不同質(zhì)量濃度的生長(zhǎng)素對(duì)生根培養(yǎng)的誘導(dǎo)能力IBA>IAA，這與周新華等[24]的研究結(jié)論相同。然而，由于試驗(yàn)規(guī)模和時(shí)間的限制，加之生根培養(yǎng)受多種因素的影響[25]，本研究?jī)H從IBA和IAA的不同配比、溫度、光照時(shí)間及光照強(qiáng)度等幾方面入手探討其對(duì)黃精誘導(dǎo)生根的影響；未能從不同添加劑、不同激素種類(lèi)及其濃度與配比、不同基本培養(yǎng)基等對(duì)誘導(dǎo)生根的影響問(wèn)題進(jìn)行探討，有不足之處還需要作進(jìn)一步的試驗(yàn)研究。

3.5 不同光照強(qiáng)度對(duì)多花黃精種子離體培養(yǎng)的影響

通過(guò)觀察，誘導(dǎo)芽增殖培養(yǎng)時(shí)，將瓶苗從500 lx移到1 000 lx下，培養(yǎng)幾天后，發(fā)現(xiàn)在突然增加光照強(qiáng)度時(shí)，瓶苗出現(xiàn)黃化，長(zhǎng)勢(shì)不良的狀況；誘導(dǎo)生根時(shí)，從1 000 lx移到2 000 lx則不會(huì)出現(xiàn)這樣的現(xiàn)象；綜上，多花黃精種子誘導(dǎo)芽增殖培養(yǎng)時(shí)對(duì)光照強(qiáng)度較敏感，需要一定的適應(yīng)階段，在繁育過(guò)程中可根據(jù)不同的生長(zhǎng)階段供給不同區(qū)間的光照強(qiáng)度，光照強(qiáng)度從0～2 000 lx遞增培養(yǎng)，光照時(shí)間為每天10 h，幫助植物盡快適應(yīng)外部環(huán)境；多花黃精誘導(dǎo)生根培養(yǎng)時(shí)對(duì)光照強(qiáng)度適應(yīng)性強(qiáng)，這與周新華等[24]的研究結(jié)論相同。

4 結(jié) 論

本試驗(yàn)以成熟度為70%的優(yōu)質(zhì)多花黃精種子為外植體，進(jìn)行了種子萌發(fā)、芽增殖、瓶苗生根和移栽的研究，建立多花黃精植株再生體系。芽誘導(dǎo)適宜培養(yǎng)基為MS+BA 0.5 mg·L-1+KT 0.5 mg·L-1瓊脂7.0 g·L-1+蔗糖20 g·L-1+活性炭0.5 g·L-1；芽增殖適宜培養(yǎng)基為MS+BA 1.0 mg·L-1+KT 1.0 mg·L-1+NAA 0.3 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+瓊脂7.0 g·L-1+活性炭0.5 g·L-1；生根適宜培養(yǎng)基為1/2 MS+IBA 0.5 mg·L-1+IAA 1.0 mg·L-1+蔗糖20 g·L-1+瓊脂7.0 g·L-1+活性炭0.5 g·L-1；瓶苗移栽適宜基質(zhì)為V(泥炭土)∶V(腐殖質(zhì))∶V(珍珠巖)=6∶3∶1的混合基質(zhì)。

試驗(yàn)結(jié)果表明：采用成熟度為70%的優(yōu)質(zhì)多花黃精莢果為外植體，進(jìn)行繁育培養(yǎng)。通過(guò)該技術(shù)建立的再生體系可獲得61.33%以上的正常萌芽；芽增殖培養(yǎng)時(shí)，誘導(dǎo)芽數(shù)為3.42個(gè)，芽增殖率為76.74%；經(jīng)瓶苗生根培養(yǎng)，生根率為81.71%，平均生根數(shù)為6.11個(gè)；經(jīng)煉苗移栽，成活率達(dá)85%。