AR和SKP2在三陰性乳腺癌中的表達(dá)及臨床意義

劉 娟 鄭唯強(qiáng)

三陰性乳腺癌(triple-negative breast cancer，TNBC)是ER、PR、HER-2均陰性表達(dá)的一組乳腺癌亞型，約占浸潤(rùn)性乳腺癌的10%～20%，屬于高度異質(zhì)性腫瘤，具有發(fā)病年齡小、侵襲性強(qiáng)、復(fù)發(fā)率高、臨床分期高、組織學(xué)級(jí)別高等臨床病理特征，在完成聯(lián)合化療后的前3～5年復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移風(fēng)險(xiǎn)高，主要為肺、肝、腦等重要器官的轉(zhuǎn)移[1]。由于缺乏受體的表達(dá)，內(nèi)分泌治療及靶向治療對(duì)TNBC均無(wú)明顯療效，相對(duì)于其他類型的浸潤(rùn)性乳腺癌，TNBC具有更差的預(yù)后，因此成為乳腺癌研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

雄激素受體(androgen receptor，AR)在正常乳腺組織和乳腺癌組織均廣泛表達(dá)，在ER陽(yáng)性的乳腺癌，AR陽(yáng)性表達(dá)顯示較好的預(yù)后；但在ER陰性乳腺癌組，AR表達(dá)與預(yù)后的關(guān)系存在爭(zhēng)議。S期激酶相關(guān)蛋白2(S-phase kinase-associated protein2，SKP2)在浸潤(rùn)性乳腺癌中高表達(dá)，且與較差的預(yù)后相關(guān)，但在TNBC中研究甚少。雄激素雙氫睪酮和SKP2的結(jié)合與增加P27的降解有關(guān)，這說(shuō)明了SKP2與性激素存在一定的關(guān)系，但是否與AR表達(dá)狀態(tài)有關(guān)還不清楚?；谝陨显颍狙芯恐荚诜治鯰NBC中AR、SKP2表達(dá)與不同臨床病理特征的關(guān)系，同時(shí)對(duì)兩者進(jìn)行相關(guān)性分析，以期為尋找TNBC的治療新靶點(diǎn)提供理論基礎(chǔ)。

材料與方法

1.標(biāo)本來(lái)源：收集筆者醫(yī)院2010～2015年病理確診為T(mén)NBC并具有完整臨床病理資料的石蠟標(biāo)本96例，同時(shí)選取35例乳腺良性病變(乳腺腺病、纖維腺瘤)做為對(duì)照。所有病例均重新調(diào)閱檔案資料，由高年資病理醫(yī)師復(fù)核切片。所有標(biāo)本均經(jīng)4%甲醛固定，石蠟包埋，連續(xù)切片并HE染色。在納入本實(shí)驗(yàn)的TNBC樣本中，隨機(jī)選取20例對(duì)應(yīng)的新鮮腫瘤組織及5例距腫瘤組織>5cm的癌旁乳腺組織。所有新鮮標(biāo)本均在病變組織離體30min內(nèi)取材，凍存于-80℃冰箱備用。納入本實(shí)驗(yàn)的TNBC具體標(biāo)準(zhǔn)如下：①所有病例都需具有完整的臨床病理資料；②所有患者均為初診手術(shù)；③術(shù)后病理確診為T(mén)NBC；④術(shù)前未行任何內(nèi)分泌治療或新輔助化療。

2.主要試劑：組織芯片預(yù)鑄蠟塊購(gòu)于UNITMA公司；鼠抗人單克隆抗體AR(克隆號(hào)AR441)購(gòu)于基因公司，兔抗人單克隆抗體SKP2[克隆號(hào)EPR3305(2)]購(gòu)于英國(guó)Abcam公司，PrimeScriptTM RT reagent Kit(for real-time)反轉(zhuǎn)錄試劑盒、SYBR?Premix Ex TaqTMⅡ PCR試劑盒購(gòu)自日本TaKaRa公司。

3.方法：(1)免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry，IHC)技術(shù)是利用抗原抗體特異性結(jié)合的原理對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)的蛋白進(jìn)行定性、定位或半定量的研究，該技術(shù)組織形態(tài)學(xué)保存完整，蛋白定位直觀清晰，在進(jìn)行形態(tài)與功能相結(jié)合的研究時(shí)具有重要意義；石蠟包埋標(biāo)本能長(zhǎng)期保存，連續(xù)切片。因此筆者對(duì)96例TNBC及35例良性乳腺病變的石蠟包埋標(biāo)本采用了IHC法檢測(cè)AR、SKP2的蛋白表達(dá)情況：1)為避免傳統(tǒng)石蠟切片進(jìn)行IHC時(shí)出現(xiàn)的費(fèi)時(shí)費(fèi)力、染色結(jié)果存在批次時(shí)間誤差等缺點(diǎn)，本實(shí)驗(yàn)將所有納入的石蠟包埋標(biāo)本制成組織芯片。根據(jù)HE切片選取1～2個(gè)典型的腫瘤區(qū)域，在原始蠟塊上標(biāo)記相應(yīng)的打孔位置。構(gòu)建10×6的微陣列設(shè)計(jì)圖，在原始蠟塊的標(biāo)記位置鉆取直徑2mm的組織芯1～2 條，嚴(yán)格按照微陣列設(shè)計(jì)圖包埋組織芯。將組織芯片以3μm厚度連續(xù)切片，裱于涂膠玻片備用。2)按照IHC中的Envision兩步法檢測(cè)AR、SKP2。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用已知AR陽(yáng)性的睪丸組織和Skp2陽(yáng)性的腎透明細(xì)胞癌作陽(yáng)性對(duì)照。(2)Western blot法是對(duì)組織細(xì)胞內(nèi)提取的蛋白凝膠電泳處理后，用特異性的抗體檢測(cè)某特定抗原的一種蛋白質(zhì)定量檢測(cè)技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)對(duì)20例新鮮TNBC及5例對(duì)照癌旁組織采用Western blot法檢測(cè)組織內(nèi)AR、SKP2蛋白的表達(dá)情況：①取50mg凍存組織剪細(xì)后RIPA冰浴下勻漿，低溫高速離心后取上清液，BCA法測(cè)定蛋白濃度；②取等量蛋白水煮變性后依次恒壓電泳、轉(zhuǎn)膜；③脫脂奶粉封閉，滴加一抗(AR 1∶200； SKP2 1∶1000)、二抗，搖床孵育，ECL顯色;④暗室曝光，掃描成像。內(nèi)參為GAPDH。(3)RT-PCR是以mRNA反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的cDNA為模板進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增以檢測(cè)目的基因表達(dá)水平的一種分子定量技術(shù)。本實(shí)驗(yàn)擬采用該技術(shù)對(duì)20例新鮮TNBC及5例對(duì)照癌旁組織檢測(cè)AR、SKP2的mRNA表達(dá)情況：①根據(jù)NCBI網(wǎng)站公布人類AR、SKP2基因序列設(shè)計(jì)引物(表1)，引物由上海軼漚生物科技公司合成；②取50mg凍存組織剪細(xì)后相繼加入TRIzol、氯仿、異丙醇抽離總RNA，洗滌干燥后溶解RNA并測(cè)定濃度；③按照反轉(zhuǎn)錄試劑盒說(shuō)明合成cDNA；④以cDNA為模板根據(jù)PCR試劑盒說(shuō)明進(jìn)行擴(kuò)增。所有樣本均設(shè)3個(gè)復(fù)孔，結(jié)果取3次平均值，每次反應(yīng)均設(shè)空白對(duì)照，內(nèi)參為GAPDH。該實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

表1 RT-PCR實(shí)驗(yàn)AR、SKP2引物序列

4.結(jié)果判讀：(1)免疫組化結(jié)果判讀：AR、SKP2陽(yáng)性表達(dá)為定位于細(xì)胞核的棕黃色或棕褐色信號(hào)。采用H-score對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行半定量分析，總分>2分為陽(yáng)性表達(dá)[2]。(2)Western blot法檢測(cè)結(jié)果判讀：根據(jù)蛋白條帶灰度顯色結(jié)果比較樣本AR、SKP2的表達(dá)。(3)RT-PCR結(jié)果判讀：根據(jù)2-△Ct觀察樣本AR、SKP2的相對(duì)表達(dá)。

5.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 20.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。AR和SKP2的組間比較采用χ2檢驗(yàn)，兩者相關(guān)性分析采用Spearman等級(jí)相關(guān)分析檢驗(yàn),以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1.AR、SKP2蛋白在TNBC及乳腺良性病變中的表達(dá)：96例TNBC組織中AR陽(yáng)性表達(dá)為18例，SKP2陽(yáng)性表達(dá)為42例；35例良性乳腺病變中AR陽(yáng)性表達(dá)為14例，SKP2均陰性表達(dá)(圖1、圖2)。

圖1 TNBC癌組織中AR的表達(dá)(IHC Envision法，×200)
A.陰性表達(dá)；B.陽(yáng)性信號(hào)定位于胞質(zhì)，為陰性表達(dá)；C.陽(yáng)性信號(hào)定位于胞核和胞質(zhì)，為陽(yáng)性表達(dá)；D.AR弱陽(yáng)性表達(dá)；E.AR中等強(qiáng)度表達(dá)；F.AR強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)

2.AR、SKP2表達(dá)與TNBC不同臨床病理因素的相關(guān)性：在TNBC中，AR的陽(yáng)性表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)顯著相關(guān)(P<0.05)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的腫瘤組AR的陽(yáng)性表達(dá)率較高。AR的表達(dá)與發(fā)病年齡、腫瘤直徑、組織學(xué)級(jí)別以及脈管/神經(jīng)侵犯狀態(tài)無(wú)顯著相關(guān)性(P>0.05)。SKP2的陽(yáng)性表達(dá)與組織學(xué)級(jí)別、神經(jīng)/脈管侵犯狀態(tài)顯著相關(guān)(P<0.05)，組織學(xué)級(jí)別較高的腫瘤組其SKP2的陽(yáng)性表達(dá)率較高，有神經(jīng)/脈管受累的腫瘤組SKP2的陽(yáng)性表達(dá)率也較高。SKP2的表達(dá)情況與年齡、腫瘤直徑、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移狀態(tài)無(wú)相關(guān)性(P>0.05，表2)。

圖2 TNBC癌組織中SKP2的表達(dá)(IHC Envision法，×200)
A.陰性表達(dá)；B.陽(yáng)性信號(hào)定位于胞質(zhì)，為陰性表達(dá)；C.陽(yáng)性信號(hào)定位于胞核和胞質(zhì)，為陽(yáng)性表達(dá)；D.SKP2弱陽(yáng)性表達(dá)；E.SKP2中等強(qiáng)度表達(dá)；F.SKP2強(qiáng)陽(yáng)性表達(dá)

表2 AR、SKP2表達(dá)在TNBC中與各組臨床病理因素的關(guān)系[n(%)]

臨床病理特征nAR表達(dá)情況SKP2表達(dá)情況陰性陽(yáng)性χ2P陰性陽(yáng)性χ2P年齡(歲) <503329(87.9)4(12.1)1.4500.22819(57.6)14(42.4)0.0360.850 ≥506349(77.8)14(22.2)35(55.6)28(44.4)腫瘤直徑(cm) <22013(65.0)7(35.0)3.1350.0779(45.0)11(55.0)1.2990.254 ≥27665(85.5)11(14.5)45(59.2)31(40.8)組織學(xué)級(jí)別 Ⅰ、Ⅱ3829(76.3)9(23.7)1.0050.31627(71.1)11(28.9)5.6000.018 Ⅲ5849(84.5)9(15.5)27(46.6)31(53.4)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移 無(wú)4834(70.8)14(29.2)6.8380.00927(56.2)21(43.8)0.0001.000 有4844(91.7)4(8.3)27(56.2)21(43.8)神經(jīng)/脈管侵犯 無(wú)8066(82.5)14(17.5)0.1230.72649(61.3)31(38.8)4.8760.027 有1612(75.0)4(25.0)5(31.2)11(68.8)

3.AR、SKP2在TNBC及良性乳腺病的表達(dá)：在35例良性乳腺病變組織中AR的陽(yáng)性率為40.0%，在96例TNBC組織中AR的陽(yáng)性率為18.8%，其陽(yáng)性表達(dá)率相對(duì)較低(P<0.05)。SKP2在35例良性乳腺病變組織中均陰性表達(dá)，在96例TNBC中的陽(yáng)性率為43.8%，其陽(yáng)性表達(dá)率差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05,表3)。

表3 AR、SKP2表達(dá)在TNBC和纖維腺瘤/腺病的關(guān)系[n(%)]

4.對(duì)AR、SKP2表達(dá)在TNBC中的相關(guān)性分析：經(jīng)Spearman相關(guān)性分析，AR與SKP2在TNBC中顯著相關(guān)(r=0.222，P=0.030,表4)。

5.Western blot法檢測(cè)AR、SKP2蛋白在TNBC及癌旁乳腺組織的表達(dá)：20例TNBC中AR、SKP2高表達(dá)的各8例，AR、SKP2共同高表達(dá)的為3例；5例癌旁乳腺組織有3例AR高表達(dá)，SKP2 均弱表達(dá)或不表達(dá)(圖3)。

表4 AR、SKP2表達(dá)在TNBC中相關(guān)性分析[n(%)]

圖3 Western blot法檢測(cè)顯示TNBC癌旁乳腺組織及癌組織AR、SKP2蛋白表達(dá)
樣本編號(hào)48P、90P、97P、11P、74P為對(duì)照組癌旁乳腺組織，其余為實(shí)驗(yàn)組TNBC癌組織

6.RT-PCR檢測(cè)AR、SKP2 mRNA在TNBC及癌旁乳腺組織的表達(dá)：20例TNBC中AR、SKP2高水平表達(dá)的組織均為8例，其中AR、SKP2共同高表達(dá)的組織有3例；5例癌旁乳腺組織有3例AR高水平表達(dá)，SKP2均低水平表達(dá)(圖4、圖5)。

圖4 RT-PCR顯示AR基因在TNBC癌旁乳腺組織及癌組織的相對(duì)表達(dá)

圖5 RT-PCR顯示SKP2基因在TNBC癌旁乳腺組織及癌組織的相對(duì)表達(dá)

經(jīng)檢驗(yàn)上述3種不同實(shí)驗(yàn)方法從蛋白水平、分子水平對(duì)TNBC組織的AR、SKP2檢測(cè)結(jié)果基本一致。

討 論

在過(guò)去的幾十年里，TNBC的治療方案進(jìn)展甚微，目前主要的治療方案仍為常規(guī)化療，但療效常常不佳，仍易發(fā)生早期復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移，針對(duì)TNBC進(jìn)行更精準(zhǔn)的個(gè)性化治療至關(guān)重要，因此尋找新的治療靶點(diǎn)也成為T(mén)NBC研究領(lǐng)域的熱點(diǎn)和難點(diǎn)。

AR屬于類固醇激素受體家族的成員，是配體依賴性的反式轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，基因編碼位于Xq11.12，相對(duì)分子質(zhì)量為110000，具有4個(gè)獨(dú)特功能域：① 與轉(zhuǎn)錄激活相關(guān)的氨基末端結(jié)構(gòu)域(NTD)，即配體獨(dú)立激活功能域；②DNA結(jié)合域(DBD)，由2個(gè)Zn2+和8個(gè)半胱氨酸形成一對(duì)與雄激素反應(yīng)元件相互作用的鋅指構(gòu)成；③配體結(jié)合域(LBD)，為受體與激素結(jié)合的區(qū)域；④鉸鏈區(qū)(flexible hinge)，為連接DNA結(jié)合域與配體結(jié)合域，調(diào)控核定位。未結(jié)合配體的AR以非激活形式存在于細(xì)胞質(zhì)，與熱休克蛋白HSP70與90形成復(fù)合物；與配體結(jié)合的AR則發(fā)生構(gòu)象變化而活化，與熱休克蛋白解離，轉(zhuǎn)位至細(xì)胞核，與雄激素反應(yīng)元件(ARE)相結(jié)合，同時(shí)與其他轉(zhuǎn)錄因子相互作用，調(diào)控下游靶基因的轉(zhuǎn)錄與翻譯，從而實(shí)現(xiàn)雄激素對(duì)靶細(xì)胞的調(diào)控。若AR缺失，則雄激素對(duì)組織無(wú)刺激反應(yīng)。

在ER陽(yáng)性的乳腺癌，AR的陽(yáng)性表達(dá)常常顯示更好的預(yù)后[3]。但在ER陰性的乳腺癌，尤其是TNBC，AR與預(yù)后的關(guān)系存在較大的爭(zhēng)議。有研究表明，AR的陽(yáng)性表達(dá)顯示更差的預(yù)后[4]；也有研究提示AR表達(dá)與預(yù)后無(wú)明顯相關(guān)，各臨床病理特征在AR的差異性表達(dá)下并沒(méi)有明顯區(qū)別，多數(shù)研究認(rèn)為，AR陽(yáng)性表達(dá)與更好的預(yù)后相關(guān)[5～7]。本研究中，AR在TNBC中的陽(yáng)性表達(dá)率為18.8%，與大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的10%～36%相近，同時(shí)也證實(shí)了AR的陽(yáng)性表達(dá)在TNBC中顯示更好的預(yù)后相關(guān)，無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的TNBC中AR更易陽(yáng)性表達(dá)[4,8]。

關(guān)于AR在TNBC中表達(dá)及意義，部分統(tǒng)計(jì)結(jié)果出現(xiàn)差異性的原因可能與以下幾個(gè)方面有關(guān)：①研究的樣本量相對(duì)較少；②研究對(duì)象存在差異：不同實(shí)驗(yàn)室對(duì)ERα、PR、HER-2的人工判讀可能存在差異，進(jìn)而導(dǎo)致對(duì)TNBC的篩選出現(xiàn)差異；③腫瘤的異質(zhì)性：同一個(gè)例乳腺癌組織不同區(qū)域可能出現(xiàn)不同的免疫表型；④AR檢測(cè)中存在差異：測(cè)定AR存在實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、抗體種類及技術(shù)操作的不同；⑤AR陽(yáng)性的cut-off值不同：不同研究對(duì)AR陽(yáng)性細(xì)胞所占比例的統(tǒng)計(jì)數(shù)值選取不同。

在TNBC中，AR可能會(huì)模仿ERα效應(yīng)成為致癌因子，刺激腫瘤的增殖[9]； AR陽(yáng)性的TNBC通常攜帶PI3KCA突變，對(duì)PI3K/mTOR抑制敏感，促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖[10]；同時(shí)通過(guò)磷酸化AKT作用的AR磷酸化可以消除AR誘導(dǎo)的凋亡效應(yīng)，促進(jìn)腫瘤的發(fā)展。以上可能是AR在TNBC陽(yáng)性表達(dá)顯示更差預(yù)后的原因，為采用AR作為T(mén)NBC治療新靶位提供了理論依據(jù)。也有研究表明，AR的陽(yáng)性表達(dá)可誘導(dǎo)PTEN抑制PI3KCA的激活，同時(shí)PTEN與蛋白killing作用可誘導(dǎo)P53、P73表達(dá)增加，導(dǎo)致乳腺癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和凋亡增加，因此AR在TNBC中的抗增殖作用可能是AR陽(yáng)性的TNBC患者顯示較好預(yù)后的原因[11]?？傮w說(shuō)來(lái)，由于TNBC發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性，AR信號(hào)通路與其他信號(hào)通路在TNBC中存在復(fù)雜的交互作用，這些都可能是AR在TNBC的表達(dá)與預(yù)后關(guān)系的研究出現(xiàn)差異性結(jié)果的原因。

由于TNBC缺乏明確的內(nèi)分泌或靶向治療的受體，但卻有約1/3的TNBC患者顯示AR的陽(yáng)性表達(dá)，且在不同亞型的TNBC中AR的表達(dá)與預(yù)后存在明顯差異，因此參照AR抑制劑應(yīng)用于前列腺癌的治療研究，在乳腺癌研究領(lǐng)域涌現(xiàn)了大量關(guān)于AR抑制劑應(yīng)用于TNBC的研究。其中研究較多的是比卡魯胺、恩雜魯胺、阿比特龍，多項(xiàng)實(shí)驗(yàn)證明AR抑制劑在AR+的TNBC中能有效地抑制腫瘤細(xì)胞的增殖，增加細(xì)胞凋亡，減緩疾病進(jìn)程[12]?？傊@些研究都不同程度地指出了針對(duì)AR的靶向藥物在改善TNBC預(yù)后方面的積極意義，因此AR也可能成為T(mén)NBC的潛在治療靶點(diǎn)，雖然AR在TNBC中的具體作用機(jī)制還有待進(jìn)一步研究，但這仍為尋找治療TNBC新途徑提供了新思路。

S期激酶相關(guān)蛋白2(S-phase kinase-associated protein2，SKP2)是泛素蛋白連接酶復(fù)合物SCF(SKP1-Cullin1-F-box)中的一種F-box蛋白亞基，其基因編碼位于5p13，相對(duì)分子質(zhì)量約為47000。SKP2作為泛素-蛋白酶體途徑(ubiquitin-proteasome pathway，UPP)中是一種重要的調(diào)節(jié)因子，介導(dǎo)泛素連接酶(E3)對(duì)磷酸化的底物(主要是CKI，如P21、P27、P57等多種細(xì)胞周期蛋白)進(jìn)行特異性識(shí)別，進(jìn)而底物被蛋白酶體迅速降解。SKP2在細(xì)胞周期的G0/G1期幾乎不表達(dá)，S期表達(dá)增加，在細(xì)胞的增殖、凋亡以及細(xì)胞正常周期進(jìn)程中發(fā)揮關(guān)鍵調(diào)控作用。SKP2的過(guò)表達(dá)會(huì)引發(fā)泛素蛋白酶途徑對(duì)CKI的降解增強(qiáng)，導(dǎo)致P27、P57等周期抑制蛋白的降低，進(jìn)而對(duì)G1/S調(diào)控點(diǎn)的抑制作用減弱，細(xì)胞增殖加速及分化紊亂，因此SKP2屬于一種原癌基因，它的激活能夠?qū)е履[瘤的發(fā)生。

SKP2高表達(dá)與許多惡性腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展密切相關(guān)。Fagan-Solis等[13]發(fā)現(xiàn)SKP2在浸潤(rùn)性乳腺癌中顯著高表達(dá)，ERα陰性的乳腺癌中SKP2陽(yáng)性率高于ERα陽(yáng)性的乳腺癌；ERα陰性的乳腺癌中，TNBC中SKP2的表達(dá)率比非TNBC的表達(dá)率更高。Meta分析提示SKP2的表達(dá)與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，SKP2的高表達(dá)使腫瘤更具侵襲性，是乳腺癌不良預(yù)后的獨(dú)立因素[14]。研究指出SKP2在乳腺上皮細(xì)胞中具有致癌潛能，在ERα陰性的乳腺癌中的表達(dá)與腫瘤的分級(jí)、細(xì)胞周期調(diào)控基因的表達(dá)呈正相關(guān)[15]。在浸潤(rùn)性乳腺癌中細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)也證實(shí)了SKP2能抑制細(xì)胞凋亡，改變細(xì)胞周期分布狀態(tài)，誘導(dǎo)S期細(xì)胞增多，從而促進(jìn)乳腺癌細(xì)胞的增殖[16]。關(guān)于SKP2在TNBC中表達(dá)的研究較少，筆者的研究結(jié)果顯示SKP2在TNBC的陽(yáng)性表達(dá)率為43.8%，顯著高于良性對(duì)照組，SKP2的表達(dá)與預(yù)后呈負(fù)相關(guān)，在組織學(xué)級(jí)別較高、有脈管/神經(jīng)累犯的TNBC中SKP2的陽(yáng)性表達(dá)率較高。體外細(xì)胞系實(shí)驗(yàn)證實(shí)SKP2抑制劑可誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞的凋亡，抑制其增殖、侵襲及遷移，因此SKP2在TNBC中的高表達(dá)使其有可能成為T(mén)NBC的潛在治療新靶點(diǎn)及評(píng)價(jià)預(yù)后新指標(biāo)[17]。

在乳腺癌和卵巢癌中，SKP2可扮演雄激素雙氫睪酮受體的角色，兩者結(jié)合后直接作用于P27，導(dǎo)致P27降解增加，這一過(guò)程與底物P27是否磷酸化的狀態(tài)無(wú)關(guān)。在去勢(shì)抵抗的前列腺癌中，SKP2與AR顯示正相關(guān)，SKP2的高表達(dá)可增加AR的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)活性[18]。以上研究都表明SKP2與雄激素、AR存在一定的關(guān)系，在TNBC中關(guān)于AR、SKP2關(guān)系的研究甚少，筆者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示AR和SKP2在TNBC中存在正相關(guān)，提示AR、SKP2在TNBC中的表達(dá)可能同受某因素的影響，但兩者在TNBC中的具體關(guān)系仍需更多研究證實(shí)。

筆者采用免疫組化法、Western blot法及RT-PCR法 3種不同的實(shí)驗(yàn)方法分別對(duì)AR、SKP2從基因到蛋白水平進(jìn)行檢測(cè)，經(jīng)驗(yàn)證3種實(shí)驗(yàn)方法結(jié)果基本一致；通過(guò)免疫組化對(duì)收集的所有TNBC及對(duì)照組織的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，揭示AR、SKP2在TNBC表達(dá)與各臨床病理特征的意義，同時(shí)AR、SKP2在TNBC的較高表達(dá)提示它們有可能成為評(píng)價(jià)TNBC預(yù)后的潛在新指標(biāo)、治療TNBC的潛在新靶點(diǎn)。當(dāng)然由于TNBC發(fā)病機(jī)制的復(fù)雜性，AR、SKP2在TNBC中的具體信號(hào)通路還不是很清楚，兩者在TNBC中的關(guān)系和表達(dá)特點(diǎn)還需要更深入的研究，相信隨著TNBC研究領(lǐng)域的深入拓展，會(huì)為這類患者的治療及預(yù)后帶來(lái)新希望。