五種殺菌劑防治菩提樹黑痣病試驗(yàn)

黃宇豪，韋繼光，羅基同，楊秀好，吳耀軍，羅輯

(1.廣西大學(xué)農(nóng)學(xué)院，農(nóng)業(yè)環(huán)境與農(nóng)產(chǎn)品安全廣西重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，植物科學(xué)國家級(jí)實(shí)驗(yàn)教學(xué)示范中心，廣西 南寧 530004；2.廣西壯族自治區(qū)林業(yè)有害生物防治檢疫站，廣西 南寧 530028；3.廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530002)

菩提樹Ficus religiosa，又名菩提榕，是?？芃oraceae 榕屬Ficus的大喬木植物，一般高達(dá)15～25 m，葉片呈三角狀卵形，具有生長(zhǎng)速度較快，樹齡長(zhǎng)，樹形優(yōu)美等特點(diǎn)，具有一定的觀賞價(jià)值。菩提樹是廣西、廣東、云南等地的行道樹，也是公園、寺廟等地的觀賞樹種。菩提樹黑痣病[Phyllachora repens(Corda)Sacc.][1]在廣西憑祥市、南寧市、東興市發(fā)病較嚴(yán)重，葉片產(chǎn)生黑色的凸起斑塊，影響菩提樹的光合作用，造成葉片組織壞死并大量落葉，嚴(yán)重影響其觀賞價(jià)值、經(jīng)濟(jì)效益和引種工作。目前菩提樹黑痣病的相關(guān)研究較為缺乏，尚未有防治藥劑篩選的相關(guān)報(bào)道。筆者測(cè)定5 種殺菌劑對(duì)菩提樹黑痣病病原菌的子囊孢子萌發(fā)的抑制作用，并進(jìn)行田間防治試驗(yàn)，以期篩選出適于田間防治的藥劑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料 防治地點(diǎn)為廣西憑祥市的綠化樹種苗圃，該苗圃菩提樹面積18 hm2。地理坐標(biāo)為:E 106°45′15″，N 22°6′38″，屬熱帶季風(fēng)氣候。土壤狀況良好，土壤質(zhì)地屬于黏質(zhì)土類，有機(jī)質(zhì)含量達(dá)平均水平，有效養(yǎng)分較為協(xié)調(diào)，土壤整體偏酸性。

試驗(yàn)用殺菌劑為:80% 代森錳鋅可濕性粉劑(WP)，河北雙吉化工有限公司；50%多菌靈WP，江蘇藍(lán)豐生物化工股份有限公司；70% 甲基硫菌靈WP，日本日友商社香港有限公司；45%咪鮮胺水乳劑(EW)，山東澳得利化工有限公司；等量式波爾多液(自配)。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 子囊孢子液制備 將葉片上的黑痣病病斑刮下經(jīng)研磨處理后放入離心管，加入3 mL 無菌水后，渦旋震蕩3 min，用4 000 r/min 的轉(zhuǎn)速進(jìn)行離心處理 3 min，過濾多余雜質(zhì)，取上清液，再用8 000 r/min的轉(zhuǎn)速離心4 min，使孢子沉淀，用移液槍吸走多余上清液，保留1 mL 液體于離心管中，得到純凈子囊孢子液備用。

1.2.2 殺菌劑對(duì)子囊孢子萌發(fā)的抑制作用測(cè)定將處理好的子囊孢子液取出，調(diào)節(jié)子囊孢子懸浮液濃度至10 ×10 倍顯微鏡下每視野有100～150 個(gè)子囊孢子。將孢子懸浮液與配置好濃度的藥劑按1∶1的體積混勻，使藥劑濃度分別為0.05，0.1，0.5，1.0，2.0 μg/mL，以不加藥劑的處理作為空白對(duì)照，每個(gè)處理吸取20 μL 液體滴在干凈的凹玻片上，于25 ℃培養(yǎng)24 h 觀察子囊孢子的萌發(fā)情況，子囊孢子的芽管長(zhǎng)于子囊孢子的直徑視為萌發(fā)。每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)計(jì)數(shù)200 個(gè)子囊孢子的萌發(fā)情況。根據(jù)下列公式計(jì)算子囊孢子的萌發(fā)率及抑制率。

孢子萌發(fā)率(%) ＝萌發(fā)的孢子數(shù)/孢子總數(shù)×100

孢子萌發(fā)抑制率(%)＝(對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)-藥劑處理后孢子萌發(fā)數(shù))/對(duì)照孢子萌發(fā)數(shù)×100

1.2.3 殺菌劑對(duì)子囊孢子萌發(fā)的室內(nèi)毒力測(cè)定室內(nèi)毒力測(cè)定采用孢子萌發(fā)抑制法。先通過預(yù)試驗(yàn)將各個(gè)藥劑濃度的抑制率控制在10%～90%后，用無菌水把殺菌劑配制成有效成分含量為50 mg/L的母液，再用無菌水分別稀釋成5 個(gè)預(yù)試驗(yàn)范圍內(nèi)不同的濃度梯度 0.01，0.05，0.1，0.2，0.35 μg/mL的藥液。分別將0.1 mL 藥劑與4.9 mL 孢子液混合于試管中，以等量無菌水與孢子液混勻作為空白對(duì)照組，保證在10 ×10 倍顯微鏡每個(gè)視野下有150～200 個(gè)孢子，之后用移液槍分別取40 μL 混合液滴至凹玻片內(nèi)，將凹玻片放置于玻璃干燥器中保濕，靜置36 h 后取出用顯微鏡觀察并按上列公式計(jì)算孢子萌發(fā)抑制率。

將各藥劑抑制率與對(duì)應(yīng)濃度用DPS 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，可以取得濃度對(duì)數(shù)與萌發(fā)率的線性回歸方程y＝ax+b，以及藥劑對(duì)菩提樹黑痣病的抑制中量濃度(EC50)、濃度對(duì)數(shù)、萌發(fā)率三者之間的相關(guān)系數(shù)r。

1.2.4 田間防治試驗(yàn) 在憑祥市苗圃園區(qū)內(nèi)選取統(tǒng)一大小的菩提樹進(jìn)行室外防治試驗(yàn)。每種藥劑根據(jù)使用說明確定其濃度，80%代森錳鋅WP 1 000 倍液，70%甲基硫菌靈WP 1 200 倍液，450 g/L咪鮮胺EW 1 000 倍液，等量式波爾多液(硫酸銅∶生石灰∶水 ＝1∶1∶200)。每種藥劑選擇 10 株健康的菩提樹，設(shè)置重復(fù)。在3月初剛展葉時(shí)采用噴霧器對(duì)菩提樹進(jìn)行2 次藥劑噴灑，每次間隔期15 d，以噴清水作為對(duì)照組。分別于第一次施藥后15 d，第二次施藥后15 d 進(jìn)行調(diào)查，在每種藥劑噴灑的10 棵樹上隨機(jī)選取100 片葉片，記錄葉片的病害級(jí)別，計(jì)算每個(gè)處理的病情指數(shù)，最終獲得藥劑的防效。

病情指數(shù)＝[∑(各病級(jí)株數(shù)×各病級(jí)代表數(shù)值)/(株數(shù)總和×發(fā)病最高級(jí)的代表數(shù)值)]×100。

相對(duì)防治效果(%) ＝(對(duì)照病情指數(shù)-處理病情指數(shù))/對(duì)照病情指數(shù)×100[6-7]。

2 結(jié)果與分析

2.1 殺菌劑對(duì)孢子萌發(fā)的抑制作用 菩提樹黑痣菌的子囊孢子對(duì)藥劑比較敏感，在0.05 μg/mL 濃度條件下5 種殺菌劑對(duì)孢子的萌發(fā)已經(jīng)顯現(xiàn)出不同程度的抑制作用。在1.0 μg/mL 的濃度條件下除了70%甲基硫菌靈WP 外，其余4 種殺菌劑都能完全抑制孢子萌發(fā)。其中等量式波爾多液對(duì)黑痣菌游動(dòng)孢子的抑制效果最強(qiáng)，在0.5 μg/mL 的濃度下對(duì)孢子萌發(fā)的抑制率就達(dá)到100%。相比之下，70%甲基硫菌靈WP 的抑制效果較差，藥劑濃度需達(dá)到2.0 μg/mL 時(shí)才能完全抑制孢子萌發(fā)。而其余3 種殺菌劑均有較理想的抑制效果(表1)。

表1 5 種殺菌劑不同濃度對(duì)黑痣菌子囊孢子萌發(fā)的抑制率%

2.2 5 種殺菌劑對(duì)菩提樹黑痣病病菌的抑制中量濃度比較 5 種供試藥劑對(duì)菩提樹黑痣病菌的室內(nèi)毒力以80%代森錳鋅 WP 和等量式波爾多液的EC50值較小，其次是50%多菌靈WP。70%甲基硫菌靈WP 和45%咪鮮胺EW 毒力相對(duì)較弱(表2)。

表2 5 種殺菌劑對(duì)菩提黑痣病的室內(nèi)毒力

2.3 殺菌劑田間防治試驗(yàn)結(jié)果 所選藥劑對(duì)菩提樹黑痣病都有一定預(yù)防作用，以波爾多液的防效最好，代森錳鋅和咪鮮胺防效中等，70%甲基硫菌靈防效較低(表3)。

表3 4 種殺菌劑對(duì)菩提樹黑痣病的田間防治試驗(yàn)結(jié)果

3 討論

Hsieh T J 和Hsieh W H(2003)報(bào)道用免賴得和代森錳鋅對(duì)菩提樹黑痣病菌子囊孢子有較好的抑制作用[8]。本試驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)代森錳鋅對(duì)菩提樹黑痣病防效較好，與臺(tái)灣報(bào)道的結(jié)果一致，還發(fā)現(xiàn)波爾多液也是一個(gè)較好的防治藥劑。在后續(xù)調(diào)查中，施藥植株比未施藥植株發(fā)生病害的程度明顯減少，可見代森錳鋅和波爾多液也起到了一定的預(yù)防作用，并且施藥植株沒有發(fā)生藥害。在實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中，菩提樹的長(zhǎng)葉期是防治效果最好時(shí)期。由于病害發(fā)生的復(fù)雜性，在病害防治時(shí)不能僅依靠化學(xué)防治，還應(yīng)該合理運(yùn)用抗病品種，或根據(jù)種植地形、種植分布等合理布局來對(duì)病害的發(fā)生進(jìn)行研究。