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      橡膠樹枯萎病病原菌室內(nèi)毒力測定

      2019-07-30 00:47:44肖宇明劉衍超李增平梁曉宇
      熱帶生物學(xué)報 2019年3期
      關(guān)鍵詞:咪鮮胺橡膠樹枯萎病

      彭 昀,肖宇明,劉衍超,李增平,王 萌,梁曉宇,張 宇

      (海南大學(xué) 植物保護(hù)學(xué)院,???570228)

      橡膠樹(Heveabrasiliensis)生產(chǎn)的乳膠是我國重要的戰(zhàn)略資源,隨著橡膠樹種植年代增加及周邊生態(tài)環(huán)境變化,一些新的病蟲害逐漸顯現(xiàn)出來[1]。2017年在對海南省瓊中加釵農(nóng)場橡膠樹的病情調(diào)查中發(fā)現(xiàn)尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)引起了橡膠樹枯萎病。該病導(dǎo)致橡膠幼樹頂梢自上而下回枯變褐,呈現(xiàn)“半邊死”癥狀。枯死枝條莖干木質(zhì)部髓心變褐,木質(zhì)部橫切面有零散分布的藍(lán)變癥狀。有的幼樹基部莖干一側(cè)的樹皮爆裂溢膠,溢膠凝固變黑,削去表皮,韌皮部組織變黃褐色至黑褐色,木質(zhì)組織有變黑褐色的縱向條紋。為預(yù)防這種橡膠樹新病害的潛在威脅,筆者對橡膠樹枯萎病進(jìn)行室內(nèi)藥劑篩選,采用生長速率法測定了4種常用殺菌劑對該病原菌進(jìn)行毒力測定[2],并選擇2種防效顯著的藥劑進(jìn)行復(fù)配研究[3],旨在為該病害防治提供參考。

      1 材料與方法

      1.1 材料 供試菌種:供試尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)分離于海南省瓊中加釵農(nóng)場熱研7-33-97橡膠樹幼樹枝條。供試藥劑:97.3 %咪鮮胺(prochloraz)原藥購自江蘇輝豐農(nóng)化股份有限公司;97 %異菌脲(iprodione)原藥購自江蘇快達(dá)農(nóng)化股份有限公司;96 %百菌清(chlorothalonil)原藥購自山東青島奧迪斯生物科技有限公司;96%吡唑醚菌酯(pyraclostrobin)購自海南正業(yè)中農(nóng)高科股份有限公司;97.2 %多菌靈(carbendazim)原藥購自江蘇省太倉市農(nóng)藥廠;99 %水楊羥肟酸(SHAM)購自上海麥克林生化科技有限公司。將各原藥配成10 000 mg·L-1的母液,4 ℃保存。 供試培養(yǎng)基:PDA(馬鈴薯葡萄糖瓊脂)培養(yǎng)基:馬鈴薯200 g,葡萄糖15 g,瓊脂粉15 g,蒸餾水1 000 mL,滅菌備用。

      1.2 方法

      1.2.1 含藥平板的制備 分別取各藥劑母液加入到定量的PDA培養(yǎng)基中搖晃混勻,使培養(yǎng)基含咪鮮胺的濃度為 0,0.1,0.5,1,5,10 mg·L-1,含百菌清的濃度為 0,1,2,4,8,16 mg·L-1,含吡唑嘧菌酯的濃度為 0,0.1,0.5,1,5,10 mg·L-1(為降低旁路呼吸途徑對藥劑的影響, 供試培養(yǎng)基中加入終濃度為100 mg·L-1的水楊羥肟酸[4]),含多菌靈的濃度為 0,0.1,0.5,1,5,10 mg·L-1。將含藥培養(yǎng)基倒入滅菌的培養(yǎng)皿中,每皿 20 mL,每個處理設(shè)置3個重復(fù)。

      1.2.2 處理方式 取制作好的含藥平板,空白對照為不加藥劑的PDA平板。使用5 mm打孔器在PDA培養(yǎng)基上28 ℃培養(yǎng)2 d的病原菌菌落邊緣取菌碟,分別接于處理培養(yǎng)基平板的中心位置上[5],每個處理做3個重復(fù),放置于28 ℃生化培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng),于對照組菌落生長6~7 cm時,用十字交叉法測量菌落直徑并記錄[6]。

      1.2.3 藥劑復(fù)配 選取2種藥效作用較好的藥劑進(jìn)行復(fù)配,以EC50濃度按照不同比例配比,配比為1∶1,1∶3,1∶5,3∶1,5∶1。再在不同比例配比下設(shè)置5個濃度梯度,濃度稀釋按照逐級稀釋法稀釋濃度,實(shí)驗(yàn)按照1.2.2和1.2.3中所述方法進(jìn)行。

      1.2.4 數(shù)據(jù)處理 使用EXCEL2016,DPS7.05數(shù)據(jù)處理軟件對所得的數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,得出各藥劑的毒力回歸方程、EC50和相關(guān)系數(shù)。

      復(fù)配增效系數(shù)(SR)[7]計(jì)算方法如下:

      式中:a,b分別代表2種農(nóng)藥的含量比例。根據(jù)增效系數(shù)(SR)作出2種藥的聯(lián)合作用評價:當(dāng)SR>1.5 時,藥劑混用時毒力大于各單劑單用時毒力的總和,表現(xiàn)為增效作用;當(dāng)SR在 0.5~1.5 時,表現(xiàn)為相加作用;當(dāng)SR<0.5時,藥劑混用毒力低于各單劑的毒力總和,表現(xiàn)為拮抗作用[8]。

      2 結(jié)果與分析

      2.1 4種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果 4種殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表1。由表1可見,4種常見殺菌劑對尖孢鐮刀菌絲的生長抑制效果為:咪鮮胺> 多菌靈>吡唑醚菌酯>百菌清。結(jié)果表明,麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機(jī)雜環(huán)類(苯并咪唑類)殺菌劑的多菌靈對尖孢鐮刀菌具有較高的抑制活性,故選擇咪鮮胺和多菌靈作為單劑進(jìn)行下一階段的復(fù)配實(shí)驗(yàn)。

      表1 供試4種殺菌劑對尖孢鐮刀菌的抑制作用

      2.2 復(fù)配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果 復(fù)配殺菌劑對橡膠樹枯萎病病原菌的抑制效果見表2,由表2可見,咪鮮胺和多菌靈1∶1,1∶3,1∶5,3∶1及5∶1復(fù)配條件下EC50值分別為0.96,0.71,0.17,0.87,1.01 mg·L-1,1∶5的復(fù)配效果最佳,5∶1的復(fù)配效果最差。

      表2 復(fù)配藥劑對菌絲的生長抑制結(jié)果

      咪鮮胺和多菌靈的復(fù)配增效系數(shù)見表3,由表3可見,咪鮮胺和多菌靈1∶1,1∶3,3∶1及5:1復(fù)配條件下增效系數(shù)分別為 0.92,1.37,0.92,0.77,均在0.5~1.5之間,2者藥效作用為相加作用,無拮抗作用。咪鮮胺和多菌靈配比在1∶5時,SR值為6.01,表現(xiàn)為增效作用。

      表3 咪鮮胺和多菌靈的復(fù)配增效系數(shù)

      3 討 論

      本研究對4種常見殺菌劑對橡膠樹尖孢鐮刀菌絲的生長抑制進(jìn)行了測定,除百菌清外,咪鮮胺、多菌靈、吡唑醚菌酯抑制菌絲效果顯著。其中麥角甾醇合成抑制劑類殺菌劑的咪鮮胺和有機(jī)雜環(huán)類(苯并咪唑)殺菌劑的多菌靈對橡膠樹尖孢鐮刀菌的抑菌效果尤為突出,故選擇咪鮮胺和多菌靈進(jìn)行復(fù)配實(shí)驗(yàn),通過5種不同比例復(fù)配得出的抑菌效果來看,其中咪鮮胺:多菌靈為1∶5的復(fù)配效果最佳,表現(xiàn)為增效作用,并且EC50達(dá)到了0.17 mg·L-1,效果優(yōu)于任何一種單劑。

      綜上所述,橡膠樹枯萎病可由常用藥劑進(jìn)行防治,鑒于咪鮮胺與多菌靈的復(fù)配效果尤為突出,推薦在病害發(fā)生時采用,避免單一藥劑的過度使用所導(dǎo)致病菌抗藥性的增強(qiáng)。

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