龜甲中多肽的分析方法研究

【摘 要】 本文采用液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析龜甲活性組分中的多肽，通過MOSCOT分析檢索鑒定出3個(gè)肽類化合物的氨基酸序列。

【關(guān)鍵詞】 龜甲 多肽 分析

1儀器材料

質(zhì)譜（TripleTOF 5600，AB SCIEX），離子源（NanosprayⅢ source，AB SCIEX），液相系統(tǒng)（nanoACQuity，Waters），BEH130 C18柱（1.7μm， 100um×100mm，安捷倫），Symmetry C18柱（5μm， 180um×20mm，安捷倫），質(zhì)譜乙腈，質(zhì)譜甲醇。

2液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用分析活性組分中的多肽

流動(dòng)相A液（水：乙腈：甲酸 = 98：2：0.1）和B液（水：乙腈：甲酸 = 2：98：0.1）。每次上樣量為2.25 ?g，A液以2 μL/min的流速洗脫15 min，進(jìn)行肽段吸附和除鹽。接下來含5% B液的流動(dòng)相以300 nl/min流速洗脫1 min，洗脫梯度：40 min內(nèi)B液梯度線型從5%升至35%，5 min從35%升至80%，然后80%持續(xù)洗脫5min，最后2min恢復(fù)柱料。數(shù)據(jù)采集時(shí)，機(jī)器的參數(shù)設(shè)置如下：離子源噴霧電壓2.5 kv，氮?dú)鈮毫?0 psi，噴霧氣壓15 psi，噴霧接口處溫度150℃;反射掃描模式;第二個(gè)四極桿（Q2）傳輸窗口設(shè)置為100Da為100%;檢測器的檢測頻率為40 GHz;離子碎裂的能量設(shè)置為35±5 eV。

3數(shù)據(jù)庫檢索和多肽鑒定

采用MASCOT進(jìn)行分析，檢索NCBI-Chelonia蛋白庫，設(shè)置非特異性酶切，最低多肽長度為5個(gè)氨基酸，母離子的質(zhì)量偏差設(shè)置為50 ppm，碎片離子的質(zhì)量偏差設(shè)置為0.2 Da。單個(gè)多肽的置信度大于95%為可信的鑒定。

4實(shí)驗(yàn)結(jié)果

采用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)對(duì)龜甲活性組分中的多肽進(jìn)行分析鑒定，鑒定了3個(gè)肽類化合物的氨基酸序列，分別為GGYEIGYD（437.1833m/z）、GLPGPIGPA（397.7222m/z）、GPAGPRGPAGP（466.7545m/z）。

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作者簡介：郭有愛（1964年-），女，漢族，隨州，工程師，大學(xué)本科，長江職業(yè)學(xué)院。