厚樸及其不同炮制品中揮發(fā)性成分GC-MS 分析

袁金鳳， 喬藝涵， 彭詩(shī)濤， 劉 娜， 王靖越， 柴沖沖， 李 飛

（北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院，北京102488）

厚樸為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.或凹葉厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.Var.biloba Rehd.et Wils.的干燥干皮、枝皮及根皮，具有燥濕消痰、下氣除滿的功效，常用于濕滯傷中、脘腹吐瀉、食積氣滯、腹脹便秘、痰飲喘咳等［1］。宋代《本草衍義》 記載“厚樸不以姜制，則棘人舌喉”［2］，厚樸生品辛辣峻烈，對(duì)咽喉有強(qiáng)烈的刺激性，炮制后不僅能降低刺激性，還能增強(qiáng)寬中和胃的作用［3-4］，故臨床多用其炮制品。厚樸炮制方法多樣，以姜制法為主，2015 版《中國(guó)藥典》 及各省市炮制規(guī)范中收載的厚樸炮制方法主要有姜炙法、姜煮法、姜浸法等［5-7］。

厚樸的主要化學(xué)成分為酚類、揮發(fā)油、生物堿等，其中揮發(fā)油含有量約1%，有報(bào)道揮發(fā)油成分具有殺菌、鎮(zhèn)靜、驅(qū)風(fēng)健胃等藥理作用［8-10］，現(xiàn)有姜煮厚樸、姜炙厚樸炮制前后揮發(fā)性成分變化的相關(guān)研究［11-14］，但結(jié)果有所不同，且未見(jiàn)姜浸、姜炙、姜煮不同炮制方法同時(shí)進(jìn)行比較研究的報(bào)道，因此探討不同炮制方法對(duì)厚樸揮發(fā)性成分的影響。本研究采用GC-MS 法對(duì)厚樸生品及不同炮制品中的揮發(fā)性成分進(jìn)行分析，探尋不同炮制方法及輔料姜對(duì)厚樸揮發(fā)性成分的影響。

1 材料

1.1 儀器 Agilent 7890B／5977A-GC／MSD 型氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國(guó)Agilent 公司）；PL2002 電子天平 （梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；ZDHW 型電熱套（北京中興偉業(yè)儀器有限公司）。

1.2 試藥 厚樸生品（四川，批號(hào)E20170701）由湖北金貴中藥飲片有限公司提供，經(jīng)北京中醫(yī)藥大學(xué)中藥學(xué)院楊瑤珺教授鑒定為木蘭科植物厚樸Magnolia officinalis Rehd.et Wils.的干燥干皮。生姜購(gòu)自市場(chǎng)。乙酸乙酯、無(wú)水硫酸鈉等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品制備

2.1.1 生姜 洗凈表面泥土，切成小塊，備用。

2.1.2 生品 取厚樸飲片，凈制備用。

2.1.3 姜汁 按2015 版《中國(guó)藥典》 四部炮制通則制備，將生姜洗凈，搗爛，加水適量，壓榨取汁，姜渣再加水適量重復(fù)壓榨1 次，合并汁液，即為姜汁。姜汁與生姜的比例為1 ∶1。

2.1.4 姜炙品［1］將厚樸飲片與姜汁拌勻悶潤(rùn)，悶潤(rùn)至姜汁吸盡，置于鍋內(nèi)，文火炒干，取出，放涼，備用。每100 kg 厚樸用生姜10 kg。

2.1.5 姜浸品［6］取厚樸飲片，用姜汁拌勻，悶潤(rùn)至姜汁吸盡，烘干（不超過(guò)60 ℃）。每100 kg厚樸用生姜10 kg。

2.1.6 姜煮品［7］取厚樸飲片與姜汁拌勻，煮至姜汁被吸盡，烘干（不超過(guò)60 ℃）。每100 kg 厚樸用生姜10 kg。

2.1.7 清水煮品 按“2.1.6” 項(xiàng)下炮制方法制備等量清水代替姜汁。

2.2 供試品溶液制備 按2015 版《中國(guó)藥典》四部附錄揮發(fā)油測(cè)定法甲法提取揮發(fā)油，稱取生姜、厚樸及其炮制品粗粉（過(guò)2 號(hào)篩） 100 g，置燒瓶中，加7 倍量水浸泡過(guò)夜，加熱并保持微沸狀態(tài)，以水蒸氣蒸餾法提取8 h，至揮發(fā)油量不再增加，停止加熱，放置片刻，開(kāi)啟測(cè)定器下端的活塞，將水緩緩放出，至油層上端到達(dá)刻度0 線上面5 mm 處為止，放置1 h 以上，再開(kāi)啟活塞使油層下降至其上端恰與刻度0 線平齊，讀取揮發(fā)油量，并計(jì)算供試品中揮發(fā)油含有量，收集各樣品揮發(fā)油以適量乙酸乙酯溶解，無(wú)水硫酸鈉脫水后備用。輔料姜、厚樸生品、姜浸品、姜炙品、姜煮品、清水煮品的揮發(fā)油得率分別為 0.42%、 0.30%、0.34%、0.24%、0.22%、0.20%。

2.3 氣相色譜-質(zhì)譜條件

2.3.1 色譜條件 HP-5MS 毛細(xì)管色譜柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；進(jìn)樣量1 μL；進(jìn)樣口溫度250 ℃，傳輸線溫度280 ℃，初始溫度60 ℃保持2 min，以8 ℃／min 上升至280 ℃保持10 min；恒流模式；分流比20 ∶1；載氣為高純氦氣，體積流量1 mL／min。

2.3.2 質(zhì)譜條件 EI 電離源；電子能量70 eV；離子源溫度200 ℃；掃描質(zhì)量范圍m／z 33～450。

2.4 GC-MS 分析 采用GC-MS 法分析輔料生姜、厚樸生品及其炮制品的揮發(fā)油，得其總離子流色譜圖，見(jiàn)圖1。所得各組分峰的質(zhì)譜數(shù)據(jù)通過(guò)計(jì)算機(jī)數(shù)據(jù)系統(tǒng)NIST 數(shù)據(jù)庫(kù)檢索對(duì)照，根據(jù)相似度，確定了輔料生姜、厚樸生品及炮制品中揮發(fā)油的主要化學(xué)成分，按峰面積歸一化法計(jì)算各化合物在揮發(fā)油中的相對(duì)百分含有量，將其進(jìn)行分析比較。生姜中鑒別出47 種成分，鑒于生姜中成分較多，本研究只對(duì)厚樸生品及其炮制品進(jìn)行了比較，見(jiàn)表1。

圖1 各樣品GC-MS 總離子流圖Fig.1 GC-MS total ion current chromatograms of various samples

表1 揮發(fā)性成分GC-MS 分析（%）Tab.1 GC-MS analysis of volatile oil constituents（%）

3 討論

厚樸經(jīng)炮制后揮發(fā)油含有量均有變化，不同炮制品揮發(fā)油含有量由高到低依次為姜浸品＞生品＞姜炙品＞姜煮品，姜炙、姜煮后揮發(fā)油含有量降低，姜浸品揮發(fā)油含有量升高，表明揮發(fā)油總量與不同的加熱方式有關(guān)。表1 表明，生品、姜浸品、姜炙品、姜煮品、清水煮品揮發(fā)油提取物經(jīng)GCMS 分析檢測(cè)出30、30、27、26、22 種成分，分別鑒定出28、28、24、25、20 個(gè)化合物，占揮發(fā)油總量的95.21%～97.99%。厚樸生品及其各炮制品揮發(fā)油中鑒別出20 種共有成分，共有成分占揮發(fā)油總量的90.09%～96.87%，其中β-桉葉醇含有量最高，相對(duì)含有量較高的成分還有γ-桉葉油醇、石竹烯氧化物、石竹烯、δ-杜松烯等。

對(duì)厚樸不同的姜制品進(jìn)行分析，姜浸品與生品相比，消失了1 種成分，新增了1 種成分，兩者共有成分29 種；姜炙品與生品相比，消失了4 種成分，新增了1 種成分，兩者共有成分26 種；姜煮品與生品相比，消失了5 種成分，新增了1 種成分，兩者共有成分25 種；其中姜炙品、姜煮品中長(zhǎng)葉蒎烯、丁香烯醇、6，8-五烯-17-酮3 種成分均消失，而姜浸品中未消失；姜浸品與姜煮品中2-己?；秽?，而姜炙品中未消失；表明不同的炮制方法對(duì)厚樸揮發(fā)性成分的總量及化學(xué)組成有影響。

本實(shí)驗(yàn)以清水煮品為對(duì)照，探討水煮過(guò)程及姜汁煮過(guò)程中輔料姜對(duì)厚樸揮發(fā)性成分的影響，同時(shí)也對(duì)生姜中所含揮發(fā)性成分進(jìn)行GC-MS 分析，綜合分析輔料生姜對(duì)厚樸揮發(fā)性成分含有量的影響。結(jié)果清水煮品與生品相比消失了8 種成分，無(wú)新增成分，水煮過(guò)程會(huì)對(duì)厚樸揮發(fā)性成分產(chǎn)生影響；姜煮品與清水煮品相比新增了5 種成分，其中1，3，3-三甲基三環(huán)［2.2.1.02，6］ 庚烷、龍腦、香葉醇，在生姜中均被檢出，表明輔料生姜的代入對(duì)厚樸揮發(fā)性成分有一定的影響。

綜上所述，不同的炮制方法及輔料生姜對(duì)厚樸揮發(fā)性成分的總量及化學(xué)組成有影響，以往的研究多集中在厚樸炮制前后的酚類成分的變化上［15-18］。本研究對(duì)厚樸不同炮制品的揮發(fā)性成分進(jìn)行比較，以期為厚樸的炮制工藝提供依據(jù)，且不同炮制品在藥效方面是否有差異，有待于進(jìn)一步研究。