標準法和改良法測定飼料中喹乙醇的比較研究

杜楊，李彬，朱貴冠

（河南省安陽市畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)測檢驗中心，河南 安陽 455000）

喹乙醇是一種化學合成的生長促進劑，可促進機體蛋白質(zhì)合成代謝，提高飼料能量利用率，促進生長發(fā)育[1]，同時具有較強的抑制或殺滅細菌的作用[2]。在飼料加工工業(yè)中常與淀粉或麥麩、磷酸氫鈣、碳酸鈣配制成飼料預混劑。在畜牧和水產(chǎn)養(yǎng)殖行業(yè)，為了盲目追求經(jīng)濟價值[3]，曾被養(yǎng)殖戶廣泛添加于飼料中。有研究發(fā)現(xiàn)，大劑量喹乙醇對動物有毒性作用，而且喹乙醇在體內(nèi)有蓄積性，在動物體內(nèi)蓄積到一定程度時，會對動物和人產(chǎn)生致畸、致癌、致突變的“三致”作用[4]。農(nóng)業(yè)農(nóng)村部2638號公告規(guī)定：自2018年5月1日起，停止生產(chǎn)喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥的原料藥及各種制劑，相關企業(yè)的獸藥產(chǎn)品批準文號同時注銷；自2019年5月1日起，停止經(jīng)營、使用喹乙醇、氨苯胂酸、洛克沙胂等3種獸藥的原料藥及各種制劑。

目前，我們多采用國家標準方法——高效液相色譜法（GB/T 8381.7-2009）對飼料中的喹乙醇進行測定，但該方法前處理過程中，離心后 的上清液要經(jīng)濾紙過濾，過濾過程可能對目標檢測物質(zhì)產(chǎn)生一定的吸附，同時增加檢測成本，延長檢測時間。本試驗對該標準法進行了改良，通過提高離心機轉速并縮短離心時間來替代濾紙過濾這一環(huán)節(jié)，在保證檢驗結果的準確性和重復性較好的情況下，提高了工作效率，降低了檢測成本。

1 材料

1.1 試劑 甲醇，超純水，鹽酸；提取液：甲醇+水，其比例為5∶95。

1.2 標準儲備液 準確稱取喹乙醇標準品50mg于50mL棕色容量瓶中，加30mL水超聲溶解，冷卻至室溫，定容至刻度，搖勻，即得1 mg/mL濃度的標準儲備液。4℃保存，有效期為1個月。

1.3 標準工作液 精密量取標準儲備液1mL于100 mL容量瓶中，以水定容至刻度。混勻，制成濃度為10μg/mL的標準工作液。

1.4 空白添加樣品 分別按照10、50、100 mg/kg的比例在空白樣品中添加喹乙醇標準品，混勻。

1.5 儀器與設備 離心機，超聲波清洗器，固相萃取裝置，恒溫振蕩器。

2 測定方法

2.1 標準方法 稱取5 g試樣于具塞錐形瓶中，加入50mL提取液，具塞置入搖床中，室溫下恒溫避光振蕩45min（振蕩速度為110r/min）。提取液在3500r/min下離心10min，上清液經(jīng)濾紙過濾，濾液作為SPE小柱凈化使用?；罨玫腟PE小柱分別用2mL淋洗液1、淋洗液2和淋洗液3淋洗，然后將小柱吹干。最后用2 mL洗脫液洗脫。洗脫液過0.22μm有機相濾膜，濾液上機測定。

2.2 改良方法 稱取2 g試樣于具塞錐形瓶中，加入20 mL提取液，具塞置入搖床中，室溫下恒溫避光振蕩45min（振蕩速度為110r/min）。提取液在5000r/min下離心6min，上清液作為SPE小柱凈化使用。其余步驟同上。

2.3 液相色譜條件 柱溫25℃，進樣體積10μL，檢測波長260nm，梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

3 結果

用標準法和改良方法在空白樣品中分別添加不同濃度（10、50、100 mg/kg）喹乙醇進行回收率實驗，每個添加濃度進行5次重復測定，求相對標準偏差。分別按2.1和2.2步驟進行實驗，結果見表2和表3。從表2和表3可以看出，添加量在10、50、100 mg/kg時，改良方法的回收率在95%～110%之間，重復性好，相對標準偏差均小于1%。

表2 標準方法添加回收實驗結果（n=5）

表3 改良方法添加回收實驗結果（n=5）

4 結果比較

改良方法的回收率為95%～110%，精密度（RSD）＜1%，符合國家標準要求（RSD＜10%）。與國家標準HPLC法相比，改良的方法不采用濾紙過濾，節(jié)省約25 min的處理時間。綜合比較認為，改良法具有速度快、成本低、靈敏度高、精密度好等特點，尤其適用于大批量配合、濃縮飼料樣品中的喹乙醇檢測。

本試驗結果表明，檢測配合飼料、濃縮飼料中喹乙醇的含量時，可以通過提高離心機轉速，適當縮短離心時間來替代濾紙過濾這一步驟，在不影響樣品的回收率和重復性的前提下，可以減少實驗步驟，節(jié)省實驗時間，增加樣品前處理批次，提高工作效率。

5 效益分析

在檢測限相同的條件下，改良法對樣品前處理的時間可降為70～80 min，國家標準方法對樣品前處理的時間約為100 min。按照一年做400批次樣品算，樣品前處理批次可以擴大1～1.5倍，降低了檢測成本，為加大監(jiān)管力度和保障畜產(chǎn)品質(zhì)量安全帶來了極大的社會效益和經(jīng)濟效益。