鼻安納米乳凝膠制備及其主要成分含量測(cè)定

王 適，何 群

(1.湖南中醫(yī)藥大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南 長(zhǎng)沙 410005；2.湖南中醫(yī)藥大學(xué)，湖南 長(zhǎng)沙 410208)

鼻安納米乳即型凝膠以薄荷腦、丁香酚為主要藥效成分，具有清涼消炎的功效，可用于治療鼻炎。鼻炎是五官科常見病、多發(fā)病。目前，治療鼻炎的鼻腔制劑主要有滴鼻劑、噴霧劑、氣霧劑等[1]。液體劑型滴入鼻腔后能夠透過鼻黏膜吸收入血運(yùn)轉(zhuǎn)至全身，生物利用度較低，靶向性較差，導(dǎo)致療效降低。半固體劑型涂展性較差，分散不均勻，容易堵塞鼻腔通道。固體劑型(干粉劑)使患者打噴嚏、鼻溢和鼻塞的局部副作用明顯。

即型凝膠兼?zhèn)淙芤簞┡c凝膠劑的優(yōu)點(diǎn)，使用方便，并具有良好的組織相容性和生物黏附性，與用藥部位，特別是黏膜組織親和力強(qiáng)，滯留時(shí)間長(zhǎng)，控制釋藥性能良好。鼻用即型凝膠具有使用方便、給藥劑量準(zhǔn)確、與鼻腔黏膜粘附力強(qiáng)的優(yōu)點(diǎn)。

本文對(duì)鼻安納米乳型即型凝膠制劑的制備方法進(jìn)行研究，并對(duì)其主要成分進(jìn)行含量測(cè)定，為其工業(yè)化生產(chǎn)提供參考依據(jù)。

1 試藥與儀器

1.1 藥材與試劑

薄荷腦(純度99%，吉安市中香天然植物有限公司)；丁香酚(純度99%，吉安市中香天然植物有限公司)；肉豆蔻酸異丙酯(國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)；1,2-丙二醇(天津市恒興化學(xué)試劑制造有限公司)；薄荷腦對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)120508-201706)；丁香酚對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)110831-201603)；聚氧乙烯氫化蓖麻油(BASF公司)；泊洛沙姆407(BASF公司)；水為蒸餾水，水楊酸甲酯、硫酸鈉、無(wú)水乙醇均為分析純。

1.2 儀器

AR124CN型電子分析天平(奧豪斯儀器上海有限公司)；SP-6890型氣相色譜儀(山東魯南瑞虹儀器有限公司)。

2 方法與結(jié)果

2.1 鼻安納米乳處方優(yōu)化

2.1.1 油相的確定 肉豆蔻酸異丙酯(IPM)為納米乳常用油相，因其界面張力低、分散性好、黏滯度較小，因此較易制成納米乳。據(jù)報(bào)道[2]，采用IPM制成的納米乳穩(wěn)定性好，易于分布到活性表皮層，增加藥物的滲透性，可以作為納米乳的基礎(chǔ)油相[3]。本實(shí)驗(yàn)將薄荷腦、丁香酚溶于IPM為混合油相。

2.1.2 乳化劑與助乳化劑的確定[4-6]納米乳常用的乳化劑有聚氧乙烯氫化蓖麻油(RH-40)、蓖麻油聚氧乙烯(EL-40)、吐溫-80(Tween 80)等，常用的助乳化劑有無(wú)水乙醇、1,2-丙二醇、1,3-丁二醇等。由于前期試驗(yàn)中選用RH-40和1,2-丙二醇取得較好的乳化效果，制備的納米乳呈淡藍(lán)色、澄清透明，光照后有丁達(dá)爾現(xiàn)象，離心(3 000 r·min-1，30 min)后穩(wěn)定，故選用RH-40作為乳化劑，選用1,2-丙二醇作為助乳化劑。

2.1.3 偽三元相優(yōu)化乳化劑與助乳化劑的質(zhì)量比(Km值)[7]以RH-40∶1,2-丙二醇的比例分別為2∶1、3∶1、4∶1時(shí)繪制偽三元相圖，篩選出最佳Km，結(jié)果見圖1。可見Km值為3∶1時(shí)，納米乳區(qū)域最大，故選擇乳化劑與助乳化劑的比例為3∶1。

圖1 不同Km值偽三元相圖

2.1.4 正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)法優(yōu)化納米乳處方組成 影響納米乳制備工藝條件及成品成型性、穩(wěn)定性較大的3個(gè)因素油相、乳化劑及助乳化劑的用量,每個(gè)因素取3個(gè)水平(3種用量)。見表1。

L9(34)正交設(shè)計(jì)試驗(yàn)安排及等級(jí)一致性檢驗(yàn)結(jié)果見表2。

表1 因素水平設(shè)計(jì) (g)

表2 鼻安納米乳處方篩選正交設(shè)計(jì)安排及結(jié)果分析

觀察納米乳外觀色澤性狀、離心穩(wěn)定性(3 000 rpm，30 min)，于25 ℃條件下快速攪拌乳化考察成乳時(shí)間，觀察澄明度，并對(duì)以上4項(xiàng)指標(biāo)系憑感官感覺打分，由20人參加評(píng)價(jià)，由好至差按等級(jí)排列，排成1～9個(gè)等級(jí)，20人平均分見表2。

2.1.5 鼻安納米乳制備 稱取處方量丁香酚、薄荷腦置于燒杯中，加入IPM充分溶解成7.5 g的混合油相，在攪拌狀態(tài)下加入RH-40 18 g、1,2-丙二醇6 g，25 ℃恒溫磁力攪拌狀態(tài)中緩慢滴入常溫蒸餾水。開始時(shí)體系黏度較小，隨著蒸餾水量的增加，體系變黏稠，繼續(xù)滴加并不斷攪拌，至體系澄明，即得鼻安納米乳。

2.2 鼻安納米乳凝膠制備

2.2.1 即型凝膠劑基質(zhì)篩選[8-9]由于該制劑為鼻腔給藥，故應(yīng)選用能與鼻液混合分散良好的水溶性基質(zhì)。泊洛沙姆(Poloxamer)為最常用的水溶性聚合物，其中泊洛沙姆407具有低溫時(shí)為液體、溫度升高時(shí)轉(zhuǎn)變成凝膠的反向熱膠凝特性。以泊洛沙姆407為基質(zhì)制成的溫度敏感凝膠以涂抹形式給藥，與鼻腔接觸后立刻轉(zhuǎn)變成凝膠，能夠延長(zhǎng)藥物在鼻腔膜滯留時(shí)間，提高藥物生物利用度。故鼻安納米乳凝膠以泊洛沙姆407為基質(zhì)。

2.2.2 鼻安納米乳凝膠基質(zhì)制備 采用冷法配制，稱取35 g泊洛沙姆407于4 ℃下加入100 mL冰水?dāng)嚢璺稚⒑螅o置溶解制備成泊洛沙姆凝膠基質(zhì)，凝膠基質(zhì)于冰箱中冷藏保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2.3 鼻安納米乳即型凝膠制備 將“2.1.5”項(xiàng)下制備的鼻安納米乳于4 ℃下加入冷藏保存的泊洛沙姆407凝膠基質(zhì)攪拌均勻，即制備得薄荷腦、丁香酚濃度標(biāo)示量分別為0.789 mg·mL-1和0.195 mg·mL-1的鼻安納米乳即型凝膠。

2.3 鼻安納米乳即型凝膠含量測(cè)定

2.3.1 GC色譜條件[10]色譜柱：DB-WAX；柱溫程序升溫，140 ℃保留15 min，再以15 ℃·min-1升至230 ℃；以氫火焰離子化器為檢測(cè)器，溫度250 ℃；柱流量：1 mL·min-1；進(jìn)樣口溫度：200 ℃；載氣為氮?dú)?，進(jìn)樣量為1 μL；尾吹30.0 mL·min-1。

2.3.2 內(nèi)標(biāo)液制備 稱取水楊酸甲酯約0.2 g，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇定容，制成濃度為 2.268 mg·mL-1的內(nèi)標(biāo)溶液。

2.3.3 對(duì)照品溶液制備 稱取薄荷腦對(duì)照品約0.1 g，精密稱定，置100 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇定容，制成1.04 mg·mL-1的薄荷腦對(duì)照品溶液。同法取丁香酚對(duì)照品約0.025 g，精密稱定，置于100 mL容量瓶中，加無(wú)水乙醇定容，制成0.256 mg·mL-1的丁香酚對(duì)照品溶液。

2.3.4 混合對(duì)照品溶液制備 精密移取薄荷腦對(duì)照品溶液及丁香酚對(duì)照品溶液各1 mL，置于10 mL容量瓶中，加入上述內(nèi)標(biāo)液1 mL，加無(wú)水乙醇定容。

2.3.5 供試品溶液制備 精密量取鼻安納米乳即型凝膠10 mL，置于50 mL圓底燒瓶中，加入0.25 g·mL-1硫酸鈉10 mL，連接揮發(fā)油提取器和回流冷凝管，加熱回流1 h，放冷后回收油層，漏斗過濾后置于50 mL容量瓶中，精密加入內(nèi)標(biāo)液5mL，加無(wú)水乙醇定容[11]。

2.3.6 陰性對(duì)照品溶液制備 按照鼻安納米乳即型凝膠制備方法分別制備不含丁香酚和薄荷腦的陰性樣品，按照供試品溶液制備方法制備陰性樣品溶液。

2.3.7 線性關(guān)系考察 精密吸取薄荷腦、丁香酚對(duì)照品溶液0.5、1、2、2.5、4、5 mL，置于10 mL容量瓶中，并分別加入內(nèi)標(biāo)液2 mL，加無(wú)水乙醇稀釋至刻度，各取1 μL進(jìn)樣。以薄荷腦與內(nèi)標(biāo)物峰面積比為縱坐標(biāo)、薄荷腦質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=1.845 3X+0.034 3，r2=0.999 9，表明薄荷腦在0.052～0.52 mg·mL-1濃度范圍內(nèi)與其峰面積積分線性關(guān)系良好。同理，以丁香酚與內(nèi)標(biāo)物峰面積比為縱坐標(biāo)，丁香酚質(zhì)量濃度為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=1.645 2X-0.158 2，r2=0.999 8，表明丁香酚在0.012 8～0.128 mg·mL-1濃度范圍內(nèi)與其峰面積積分線性關(guān)系良好。

2.3.8 專屬性試驗(yàn) 分別精密量取薄荷腦、丁香酚混合對(duì)照品溶液，供試品溶液，陰性溶液各1 μL，分別注入氣相色譜儀，記錄色譜，見圖2。根據(jù)圖譜可知，供試品與對(duì)照品峰在相應(yīng)位置均有色譜峰，陰性樣品無(wú)干擾，說(shuō)明此法測(cè)定鼻安納米乳即型凝膠中的薄荷腦和丁香酚含量符合定量分析要求。

2.3.9 精密度試驗(yàn) 分別取薄荷腦、丁香酚對(duì)照品溶液1 μL，重復(fù)進(jìn)樣6次，測(cè)得薄荷腦和丁香酚的峰面積與內(nèi)標(biāo)峰面積之比的RSD分別為3.451%和2.847%。

2.3.10 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批號(hào)鼻安納米乳即型凝膠6份按供試品溶液的制備方法制備溶液，測(cè)定含量。6份樣品的平均含量RSD分別為薄荷腦3.65%、4.13%。

a.薄荷腦；b.丁香酚；c.水楊酸甲酯(內(nèi)標(biāo))

2.3.11 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，分別于放置0、6、12、24、36、48 h進(jìn)樣測(cè)定含量，薄荷腦平均含量RSD為2.67%，丁香酚平均含量RSD為3.45%，表明48 h內(nèi)薄荷腦和丁香酚穩(wěn)定性良好。

2.3.12 回收率試驗(yàn) 精密移取同一批號(hào)鼻安納米乳即型凝膠10 mL，共6份，分別加入濃度為1.04 mg·mL-1薄荷腦對(duì)照品溶液5 mL、濃度為0.256 mg·mL-1丁香酚對(duì)照品溶液10 mL，按供試品溶液制備方法制備供試品，按照“2.3.1”項(xiàng)下方法進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果薄荷腦加樣回收率平均值為98.5%，RSD=2.561%(n=6)，丁香酚加樣回收率平均值為97.7%，RSD=3.694%(n=6)，表明本方法符合定量分析要求。

2.3.13 樣品含量測(cè)定 取3批鼻安納米乳即型凝膠樣品，按照“2.3.5”項(xiàng)下方法制備供試品，按氣相色譜條件測(cè)定含量(標(biāo)示含量%)，3批樣品平均含量分別為99.7%、99.2%、98.9%。

3 討論

薄荷腦、丁香酚是有效成分，可作為評(píng)價(jià)鼻安納米乳即型凝膠的質(zhì)量檢測(cè)指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)曾采用納米乳超聲破乳法，由于檢測(cè)成分易揮發(fā)，回收率結(jié)果不理想，故采用硫酸鈉法破乳。凝膠基質(zhì)泊洛沙姆407具有高度溫敏性，必須考慮不同溫度條件下的差異性，包括季節(jié)性和地域性，溫度的變化會(huì)使藥物在儲(chǔ)存過程中的狀態(tài)存在較大差異。

到目前為止尚未查閱到鼻炎制劑中有類似本研究中納米乳型即型凝膠的相關(guān)報(bào)道，本納米乳型即型凝膠劑型為國(guó)內(nèi)首創(chuàng)。