銀黃解毒膠囊的制備工藝及薄層色譜鑒別研究

謝嘉馳，羅純清，王 興

(湘潭市中醫(yī)醫(yī)院，湖南 湘潭 411100)

急性咽炎屬于中醫(yī)學(xué)“急喉痹”范疇，常由外邪侵襲或肺胃熱盛，上犯咽喉而致病，以咽喉疼痛、充血、腫脹為主要表現(xiàn)，發(fā)病率高[1-2]。銀黃解毒膠囊系我院名老中醫(yī)經(jīng)驗(yàn)方，臨床療效顯著，由山銀花、黃連、黃芩、大黃、連翹等8味中藥組成，具有清熱解毒、消腫活血的功效，主治急性咽炎。為擴(kuò)大其應(yīng)用范圍，經(jīng)過系統(tǒng)研究，擬將其研發(fā)為便于服用且穩(wěn)定性高的膠囊制劑，為廣大急性咽炎患者提供安全有效的治療藥物。本研究以浸膏得率為考察指標(biāo)，采取正交試驗(yàn)法[3-6]對(duì)水提工藝條件進(jìn)行優(yōu)選；以潤濕劑選擇、輔料種類篩選、堆密度測定、膠囊型號(hào)、顆粒的吸濕性曲線和CRH為指標(biāo)[7-10]進(jìn)行成型工藝考察，為其藥效和臨床研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與儀器

1.1 藥材

山銀花、黃連、黃芩、大黃、連翹等8味藥中藥均購自湖南海川醫(yī)藥有限公司，經(jīng)湘潭市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部鐘喜光副主任中藥師鑒定，均符合2015版《中國藥典》規(guī)定。黃連對(duì)照藥材(批號(hào)：110905-201119)、黃芩對(duì)照藥材(批號(hào)：110925-201125)、芍藥苷對(duì)照品(批號(hào)：110736-201136)、牡丹皮對(duì)照藥材(批號(hào)：111490-201111)均由中國食品藥品檢定研究院提供。

1.2 儀器與試劑

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(湖北省黃石市恒豐醫(yī)療器械有限公司) ；CP214 型電子天平(美國 Ohaus公司) ；ZF-2型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠)；微晶纖維素(上海恒信化學(xué)試劑有限公司)；糊精(上海伯奧生物科技有限公司)；淀粉(青島海洋化工分廠)；硅膠G和硅膠GF254(蘇州科同生物醫(yī)藥科技有限公司) ；試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 提取工藝研究

2.1.1 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì) 以浸膏得率為考察指標(biāo)，采用正交試驗(yàn)L9(34)優(yōu)選提取加水量、浸泡時(shí)間、煎煮時(shí)間三個(gè)指標(biāo)。試驗(yàn)設(shè)計(jì)見表1。

表1 提取工藝正交試驗(yàn)因素水平設(shè)計(jì)

2.1.2 正交試驗(yàn)結(jié)果及分析 按處方配比稱取藥材共70 g，加入規(guī)定量的水，浸泡至規(guī)定時(shí)間后，進(jìn)行煎煮，過濾，合并濾液，濃縮至稠膏狀，計(jì)算浸膏得率。

表2 提取工藝L9(34)正交試驗(yàn)結(jié)果

表3 浸膏得率方差分析

注：F0.01(2,2)=99.0，F(xiàn)0.05(2,2)=19.0。

以浸膏得率為考查指標(biāo)，表2中極差R值大小顯示，各因素作用主次順序?yàn)镃>A>B。方差分析結(jié)果表明：C因素具有非常顯著性差異，B因素具有顯著性差異，C因素?zé)o顯著性差異。從K值可以看出，A因素以A2為優(yōu)，B因素以B2為優(yōu)，C因素以C1為優(yōu)，因此優(yōu)選的水提工藝為A2B2C1，即提取兩次，分別加8倍和6倍量水，浸泡0.5 h，煎煮2 h和1.5 h。

2.2 成型工藝研究

2.2.1 輔料種類篩選 參照文獻(xiàn)并結(jié)合實(shí)際情況，選用淀粉、糊精、微精纖維素為輔料，研究輔料與浸膏粉混合后對(duì)成型率、吸濕性和流動(dòng)性影響，優(yōu)選最佳適宜輔料。

(1)成型率測定。取干膏粉318 g 3份，采用等量遞增法分別加入淀粉、糊精、微晶纖維31.8 g，混勻，制粒，成型率依次為94%、92%、91%。結(jié)果表明，不同輔料制得的顆粒收得率差異小，所以選擇淀粉作為輔料。

(2)吸濕百分率測定。將稱量瓶烘干至恒重，冷卻后再稱重，加入干燥至恒重的淀粉、糊精、微晶纖維混合顆粒，將已恒重的稱量瓶底部放入厚約2 mm的顆粒，稱重后置于含有NaCl過飽和溶液的干燥器內(nèi)(稱量瓶蓋打開)于25 ℃保存，定時(shí)稱量，按下式計(jì)算各時(shí)間吸濕百分率，吸濕率(%)=(吸濕后顆粒重量-吸濕前顆粒重量)/吸濕前顆粒重量×100%。結(jié)果見表4。

表4 顆粒吸濕百分率 (%)

(3)流動(dòng)性考察。采用固定漏斗法，根據(jù)休止角計(jì)算公式(tgα=H/R)，求得α值。重復(fù)測定3次，結(jié)果依次為32.7°、34.5°、35.1°，平均休止角為 34.1°，均≤35°。休止角越小，表明顆粒的流動(dòng)性越好，越能滿足生產(chǎn)要求。

2.2.2 潤濕劑選擇 考察不同濃度及用量的乙醇對(duì)浸膏粉黏附性的影響。取干膏粉63.6 g共3份，加淀粉6.36 g，按照制?！栖洸摹稍铩２襟E處理，計(jì)算顆粒得率。結(jié)果見表5。

表5 不同濃度及用量乙醇的制粒結(jié)果

通過觀察軟材性狀、過篩情況，發(fā)現(xiàn)以采用95%乙醇作為潤濕劑最為適宜，其用量為浸膏粉總量的20%～23%。

2.2.3 堆密度測定和膠囊型號(hào)選擇 根據(jù)堆密度試驗(yàn)及試裝法，測定3批膠囊內(nèi)容物的平均堆密度為0.52 g/mL，內(nèi)容物重量應(yīng)為0.35 g±10%。對(duì)同批膠囊內(nèi)容物(按一劑處方量約350 g，取3份)，選擇不同型號(hào)膠囊殼進(jìn)行試驗(yàn)，00號(hào)膠囊容積(mL±10%)為0.79 mL，0號(hào)膠囊容積(mL±10%)為0.67 mL，1號(hào)膠囊容積(mL±10%)為0.50 mL。結(jié)果見表6，可以看出，選擇0號(hào)膠囊灌裝最為適宜。

表6 膠囊型號(hào)選擇結(jié)果

2.2.4 臨界相對(duì)濕度測定 (1)吸濕率測定。在已恒重的稱量瓶底部放入厚約2 mm的顆粒，精密稱量后置于表7所列的分別盛有7種不同濃度硫酸或不同鹽的過飽和溶液干燥器內(nèi)，稱量瓶蓋打開，于25 ℃恒溫培養(yǎng)箱中放置7天，即達(dá)平衡，再精密稱重，計(jì)算吸濕百分率。結(jié)果見表7。

表7 不同濃度硫酸或不同鹽過飽和溶液的相對(duì)濕度

(2)吸濕曲線繪制。以表7中的吸濕率為縱坐標(biāo)，相對(duì)濕度(RH %)為橫坐標(biāo)作圖，見圖1?？芍擃w粒的CRH為67%。故灌裝車間環(huán)境溫度應(yīng)控制在25 ℃，濕度控制在67%以下。

圖1 吸濕平衡曲線

2.2.5 中試工藝驗(yàn)證 取采用上述工藝制得的樣品3批(20151110、20151111、20151112)，按照2015版《中國藥典》附錄膠囊劑項(xiàng)下要求對(duì)其水分、裝量差異、崩解時(shí)限進(jìn)行檢查，見表8。結(jié)果表明，3 批中試產(chǎn)品均符合2015版《中國藥典》附錄膠囊劑項(xiàng)下要求，工藝可行，質(zhì)量可控。

表8 工藝驗(yàn)證結(jié)果

2.3 工藝質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

(1)黃連薄層鑒別。按參考文獻(xiàn)[11]方法制備黃連供試品溶液、對(duì)照溶液及陰性溶液，分別吸取上述溶液各3 μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，采用冰醋酸-水-正丁醇(1∶2∶7)于槽中展開后，晾干，于紫外光燈(365 nm)下觀察。結(jié)果表明，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照液無干擾(見圖2)。

(2)黃芩薄層鑒別。按參考文獻(xiàn)[11]方法制備黃芩供試品溶液、對(duì)照溶液及陰性溶液，分別吸取上述溶液各5 μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，采用甲酸-水-丁酮-乙酸乙酯(1∶1∶3∶5)于展開槽中展開后，晾干，噴以1%三氯化鐵溶液顯色，于紫外光燈(365 nm)下觀察。結(jié)果表明，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照液無干擾(見圖3)。

(3)赤芍薄層鑒別。按參考文獻(xiàn)[11]方法制備赤芍供試品溶液、對(duì)照溶液及陰性溶液，分別吸取上述溶液各5 μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，采用甲酸-乙酸乙酯-甲醇-二氯甲烷(0.2∶5∶10∶40)于展開槽中展開后，晾干，噴以5%香草醛硫酸溶液顯色，于紫外光燈(365 nm)下觀察。結(jié)果表明，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照液無干擾(見圖4)。

(4)牡丹皮薄層鑒別：按參考文獻(xiàn)[11]方法制備牡丹皮供試品溶液、對(duì)照藥材溶液及陰性樣品溶液，分別吸取上述溶液各10 μL，點(diǎn)于硅膠G薄層板上，采用冰醋酸-乙酸乙酯-環(huán)己烷(0.1∶1∶4)于展開槽中展開后，晾干，噴以2%香草醛硫酸乙醇溶液顯色，于紫外光燈(365 nm)下觀察。結(jié)果表明，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照液無干擾(見圖5)。

圖2 黃連TLC

圖3 黃芩TLC

圖4 赤芍TLC

圖5 牡丹皮TLC

3 討論

制備銀黃解毒膠囊的工藝條件確定為加水浸泡0.5 h，提取兩次，加水量分別為8倍和6倍，煎煮時(shí)間分別為2 h和1.5 h。以淀粉為輔料，95%乙醇作為潤濕劑進(jìn)行濕法制粒，60～80 ℃低溫干燥，CRH控制在67%以下，選擇0號(hào)膠囊型號(hào)灌裝即得。中試工藝驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)證明該工藝科學(xué)合理。

該實(shí)驗(yàn)中不同濃度的乙醇及用量影響顆粒制粒和膠囊灌裝準(zhǔn)確度。三種輔料對(duì)顆粒成型率影響小，而淀粉成本最低，且三者輔料抗吸濕性也無較大差別，考慮到經(jīng)濟(jì)效益與成本，選擇淀粉為最佳輔料。

銀黃解毒膠囊是中藥復(fù)方制劑，采用薄層色譜鑒別黃連、黃芩、赤芍、牡丹皮斑點(diǎn)清晰，專屬性和重現(xiàn)性好，陰性對(duì)照無干擾，可作為制定其質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)。其有效成分含量測定及臨床藥效學(xué)研究有待進(jìn)一步探討。