DNA倍體定量分析在宮頸上皮內(nèi)病變的準(zhǔn)確性研究

龐國(guó)蓮　王海兵　李生強(qiáng)　苗瓊

[摘要] 目的 探討DNA倍體定量分析在宮頸上皮內(nèi)病變的初步篩查中的準(zhǔn)確性。 方法 方便收集該院2017年1—12月期間同時(shí)進(jìn)行DNA倍體定量分析且發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞的和陰道鏡活檢并有明確病理診斷的宮頸上皮內(nèi)病變的病例800例，分析DNA倍體定量分析的準(zhǔn)確性，與陰道鏡活檢的組織病理診斷相比，評(píng)價(jià)DNA倍體定量檢測(cè)作為宮頸上皮內(nèi)病變的初步篩查手段的準(zhǔn)確性。 結(jié)果 異倍體細(xì)胞為1～2個(gè)有564例，其DNA倍體定量分析病例與活檢病理診斷的符合率為84.22%（475/564）;異倍體細(xì)胞≥3個(gè)的有236例，其DNA倍體定量分析病例與活檢病理診斷的符合率為90.25%（213/236）。 結(jié)論 DNA倍體定量分析有較高的準(zhǔn)確性，是宮頸上皮內(nèi)病變的初步篩查的一個(gè)重要手段。

[關(guān)鍵詞] 宮頸上皮內(nèi)病變;DNA倍體定量分析;宮頸癌

[中圖分類(lèi)號(hào)] R711.74;R737.33 ? ? ? ? ?[文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A ? ? ? ? ?[文章編號(hào)] 1674-0742（2019）02（a）-0038-03

[Abstract] Objective To investigate the accuracy of DNA ploidy analysis in the initial screening of cervical intraepithelial lesions. Methods A total of 800 cases of cervical intraepithelial lesions with abundance of ploidy and colposcopic biopsy and clear pathological diagnosis were convenient collected from January to December 2017. The accuracy of quantitative analysis was compared with the histopathological diagnosis of colposcopy biopsy to evaluate the accuracy of DNA ploidy as a primary screening method for cervical intraepithelial lesions. Results There were 564 cases of aneuploid cells in 1-2 cases. The coincidence rate of DNA ploidy analysis and biopsy pathological diagnosis was 84.22% （475/564）; 236 cases of aneuploid cells ≥3 cases and the coincidence rate between DNA ploidy quantitative analysis and biopsy pathological diagnosis was 90.25% （213/236）. Conclusion The quantitative analysis of DNA ploidy has high accuracy and is an important means for the initial screening of cervical intraepithelial lesions.

[Key words] Cervical intraepithelial lesion; Quantitative analysis of DNA ploidy; Cervical cancer

宮頸癌是女性生殖系統(tǒng)中常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，威脅著女性的身心健康。第四版宮頸癌診斷與治療指南指出，宮頸癌的發(fā)病率在女性惡性腫瘤中占第二位[1]，在西方發(fā)達(dá)國(guó)家，因?yàn)閲?guó)家的初步篩查，其發(fā)病率已在緩慢下降，而我國(guó)女性，特別是農(nóng)村女性因經(jīng)濟(jì)原因和對(duì)宮頸上皮病變疾病的預(yù)防意識(shí)不足，以及部分青少年女性的早熟和自我保護(hù)意識(shí)欠缺，發(fā)病率和死亡率還在上升[2]。宮頸癌的發(fā)病病因尚以明確[3]，因此可以通過(guò)早期篩查，早發(fā)現(xiàn)，早治療來(lái)降低發(fā)病率和死亡率，DNA倍體定量分析技術(shù)是宮頸癌及宮頸癌前病變篩查比較經(jīng)濟(jì)、簡(jiǎn)便、可靠的方法，有研究結(jié)果顯示[4]，宮頸脫落細(xì)胞的DNA倍體定量分析對(duì)檢測(cè)宮頸上皮內(nèi)病變有較高的敏感性及特異性，該文方便收集該院2017年1—12月期間同時(shí)進(jìn)行DNA倍體定量分析且發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞的和陰道鏡活檢并有明確病理診斷的宮頸上皮內(nèi)病變的病例800例，就DNA倍體定量分析在宮頸上皮內(nèi)病變的初步篩查中的準(zhǔn)確性進(jìn)行探討，與陰道鏡活檢病理診斷結(jié)果相比較，評(píng)價(jià)DNA倍體定量分析技術(shù)作為宮頸癌及宮頸癌前病變的初步篩查手段的意義。

1 ?資料與方法

1.1 ?一般資料

方便收集云南省曲靖市第一人民醫(yī)院病理科婦科送檢DNA倍體定量分析及同時(shí)進(jìn)行陰道鏡活檢且均為DNA倍體定量分析發(fā)現(xiàn)異倍體細(xì)胞的800例，年齡22～68歲，平均年齡45歲。且所有患者未曾用過(guò)任何藥物治療、避開(kāi)月經(jīng)期、不過(guò)性生活、不沖洗、無(wú)懷孕。

1.2 ?標(biāo)本的采集、DNA倍體的制片及分析

婦科醫(yī)生用陰道擴(kuò)張器擴(kuò)開(kāi)陰道，肉眼直視下將宮頸刷插入宮頸管內(nèi)在子宮頸黏膜面順時(shí)針旋轉(zhuǎn)3至5圈后脫掉刷頭，將刷頭放入婦科專(zhuān)用的細(xì)胞保存液中，擰緊細(xì)胞保存液瓶蓋并貼上帶有患者名字的標(biāo)簽送至病理科，由病理科技術(shù)員核對(duì)患者信息、接收標(biāo)本并制片，首先將樣本保存瓶在振蕩器上震蕩5～10 s混勻，用吸管吸取8 mL樣本，加入事先準(zhǔn)備好的細(xì)胞分離液的上層，1100轉(zhuǎn)離心2 min，棄上清液，后2 200 r離心5 min，棄上清液，視沉淀大小，用洗瓶向每個(gè)離心管中加入1～2 mL緩沖液，在振蕩器上震蕩混勻10～20 s，以完成細(xì)胞的沉淀及混勻，然后將沉降倉(cāng)和預(yù)處理載玻片在制片版上固定好，水平放置;用吸管轉(zhuǎn)移0.5～1 mL細(xì)胞懸液至沉降倉(cāng)中，靜置10 min來(lái)完成樣本的沉降，然后在沖洗、固定、由公司配置好的成品染液進(jìn)行伊紅染色后晾干及封片;片子制備完成后采用全自動(dòng)細(xì)胞 DNA 定量分析系統(tǒng)（麥克奧迪醫(yī)療診斷系統(tǒng)有限公司）對(duì)所有的DNA染色玻片進(jìn)行掃描，每張玻片掃描細(xì)胞核數(shù)的最低值為5 000個(gè)，最高值為12 000個(gè)，判定此玻片為合格，全自動(dòng)細(xì)胞 DNA 定量分析系統(tǒng)根據(jù)不同細(xì)胞核所具有的不同特征參數(shù)自動(dòng)完成細(xì)胞分類(lèi)和計(jì)數(shù)。

1.3 ?DNA倍體定量分析結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)及臨床建議

異倍體細(xì)胞≥3個(gè)、DNA指數(shù)（DI）>2.5 的異倍體細(xì)胞或者細(xì)胞增殖比例大于細(xì)胞總數(shù)的10%，建議陰道鏡檢查或活檢;異倍體細(xì)胞為1～2個(gè)、DNA 指數(shù)（DI）>2.5的異倍體細(xì)胞或者細(xì)胞增殖比例在5%～10% 之間，建議4～6個(gè)月復(fù)查;無(wú)異倍體細(xì)胞則可定期進(jìn)行正常篩查。

1.4 ?陰道鏡活檢標(biāo)本的制片及組織病理診斷

陰道鏡醫(yī)生在陰道鏡下病變處進(jìn)行4個(gè)點(diǎn)的標(biāo)本采集、95%的酒精或10%的中性福爾馬林固定后送至病理科，由病理科工作人員取材、脫水、包埋、切片、染色及封片。然后由兩名副主任醫(yī)師做病理診斷。宮頸組織病理診斷分為慢性宮頸炎、CINI級(jí)（異型細(xì)胞局限于上皮的下1/3）、CINII級(jí)（異型細(xì)胞累及上皮層的下1/3至2/3）、CINIII級(jí)（增生的異型細(xì)胞超過(guò)全層的2/3但還未累及上皮全層）、原位癌（異型增生的細(xì)胞累及子宮頸黏膜上皮全層，但病變局限于上皮層內(nèi)，未突破基膜）和浸潤(rùn)癌。

1.5 ?統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，以陰道鏡活檢組織的病理診斷為標(biāo)準(zhǔn)，計(jì)算DNA倍體定量分析的病例與陰道鏡組織活檢病理診斷的符合率。

2 ?結(jié)果DNA倍體定量分析的準(zhǔn)確性

異倍體細(xì)胞為1～2 個(gè)有564例，其中活檢病理診斷為慢性宮頸炎的為89例，CINI級(jí)的為376例，CINII級(jí)的為56例，CINIII級(jí)的為43例，發(fā)現(xiàn)宮頸上皮病變的總數(shù)為475例，其DNA倍體定量分析病例與活檢病理診斷的符合率為84.22%（475/564）;異倍體細(xì)胞≥3 個(gè)的有236例，其中活檢病理診斷為慢性宮頸炎的有8例，CINI級(jí)的有72例，CINII級(jí)的有70例，CINIII級(jí)或原位癌的有63例，發(fā)現(xiàn)宮頸上皮病變的總數(shù)為213例，其DNA倍體定量分析病例與活檢病理診斷的符合率為90.25%（213/236）。

3 ?討論

目前早期篩查方法有巴氏涂片法，此方法敏感性及特異性較低，容易漏診和誤診;液基細(xì)胞學(xué)檢查方法因其取材和制片方法的改進(jìn)，可以降低漏診率和誤診率，即對(duì)宮頸癌及癌前病變的篩查提高了準(zhǔn)確率;HPV檢測(cè)篩查，主要通過(guò)分子生物學(xué)技術(shù)完成，HPV感染分中-低危險(xiǎn)性（導(dǎo)致低級(jí)別宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變）和高危險(xiǎn)型（導(dǎo)致高級(jí)別宮頸鱗狀上皮內(nèi)病變、宮頸原位癌及浸潤(rùn)癌）;DNA倍體定量分析技術(shù)以通過(guò)測(cè)量細(xì)胞核內(nèi)DNA含量的變化，在大體形態(tài)改變尚不明顯前既可檢測(cè)出病變細(xì)胞，對(duì)宮頸癌及癌前病變做出早期診斷;癌癥屬于染色體疾病，致癌物質(zhì)和錯(cuò)誤的有絲分裂可以產(chǎn)生異倍體而引發(fā)腫瘤的發(fā)生，異倍體引起數(shù)以千計(jì)的基因和他們編碼的蛋白失衡，腫瘤病理學(xué)研究顯示[5]，細(xì)胞癌變時(shí)，其細(xì)胞核內(nèi)的DNA結(jié)構(gòu)和含量均會(huì)發(fā)生改變，DNA含量增多或出現(xiàn)DNA倍體異常細(xì)胞。而有研究顯示[6]宮頸癌是感染疾病，是可預(yù)防的疾病，是目前世界上唯一的在早期發(fā)現(xiàn)可以治愈的癌癥，大多浸潤(rùn)性宮頸癌均有染色體異常改變，DNA異倍體的出現(xiàn)是染色體異常的表現(xiàn)，同時(shí)也是一種細(xì)胞癌變的特征指標(biāo)，在CINⅡ、CINⅢ、CIS（原位癌）和浸潤(rùn)癌病例中分別有59%、84%和87%有異倍體細(xì)胞出現(xiàn);DNA 是細(xì)胞生長(zhǎng)、分化、繁殖的基礎(chǔ)。每一個(gè)體細(xì)胞具有46條染色體，可配成 23 對(duì)，稱為二倍體，在生理狀態(tài)下，人體絕大多數(shù)的細(xì)胞處于靜止期，DNA含量固定不變，其DNA指數(shù)為1（DI=1），當(dāng)細(xì)胞發(fā)生癌變時(shí)，細(xì)胞生長(zhǎng)繁殖、染色體復(fù)制、加倍導(dǎo)致基因發(fā)生丟失、重組、融合、擴(kuò)增等變化，使得細(xì)胞核內(nèi)DNA 結(jié)構(gòu)和含量也發(fā)生改變?yōu)榉钦扼w細(xì)胞。在癌變過(guò)程中，先有DNA結(jié)構(gòu)和含量改變，后有細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變，當(dāng)DI≥2.5時(shí)，提示細(xì)胞惡變的可能。因此，通過(guò)分析細(xì)胞核內(nèi)DNA含量的變化，測(cè)定被檢測(cè)細(xì)胞 DNA 水平，發(fā)現(xiàn)異常DNA 水平細(xì)胞，判斷細(xì)胞的生理狀態(tài)和病理改變，在形態(tài)改變不明顯前既可檢測(cè)出那些病變細(xì)胞，實(shí)現(xiàn)癌及癌前病變的早期診斷，而且DNA倍體定量分析對(duì)宮頸上皮內(nèi)病變檢查具有簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)、可靠和減少漏診率的優(yōu)點(diǎn)，較常規(guī)細(xì)胞學(xué)方法在宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)及診斷方面更有優(yōu)勢(shì)，有研究表明[7]，宮頸癌的I期治愈率≥90%，0期治愈率為100%，然而，從異倍體早期發(fā)展成惡性腫瘤是一個(gè)漫長(zhǎng)的過(guò)程，因此早期篩查顯得尤為重要，宮頸癌的早期篩查與早期治療是治愈宮頸癌的主要手段，而DNA定量分析技術(shù)是宮頸癌早期篩查的重要手段。

該研究結(jié)果顯示，在異倍體細(xì)胞為1～2 個(gè)的564例中，其DNA倍體定量分析結(jié)果與活檢病理診斷結(jié)果的符合率為84.22%（475/564）;在異倍體細(xì)胞≥3 個(gè)的236例中，其DNA倍體定量分析結(jié)果與活檢病理診斷結(jié)果的符合率為90.25%（213/236），此結(jié)果說(shuō)明DNA倍體定量分析結(jié)果與活檢病理結(jié)果有較高的符合率，其準(zhǔn)確性比較可靠，可以作為宮頸上皮內(nèi)病變的早期較可靠的篩查方法;該研究結(jié)果比某些文獻(xiàn)報(bào)道的結(jié)果[8]：DNA倍體定量分析結(jié)果與活檢病理診斷結(jié)果的符合率為61.91%要高，此差異可能與標(biāo)本收集的數(shù)量、不同婦科醫(yī)生的取材標(biāo)本量、不同病理技術(shù)人員的制片及DNA倍體定量分析系統(tǒng)參數(shù)的設(shè)置參數(shù)的多少有關(guān)。

綜上所述，DNA倍體定量分析系統(tǒng)具有準(zhǔn)確率高、敏感性強(qiáng)、重復(fù)性好、簡(jiǎn)便經(jīng)濟(jì)、出結(jié)果快及減少漏診及誤診率的優(yōu)點(diǎn)，其是一種很好的宮頸癌前病變及早期宮頸癌篩查方法，可作為大規(guī)模應(yīng)用的一種新方法，結(jié)合陰道鏡檢查和病理活檢診斷，可以對(duì)宮頸癌前病變及宮頸癌做出早期診斷，能有效的指導(dǎo)宮頸癌的臨床治療，對(duì)宮頸癌判斷預(yù)后提供幫助，同時(shí)對(duì)降低宮頸癌的死亡率具有很大的意義。

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（收稿日期：2018-11-07）