胃必康顆粒的水提醇沉工藝研究

康亞平

（江蘇省如東縣中醫(yī)院藥劑科，江蘇 如東 226400）

胃必康顆粒為本院的醫(yī)院制劑，由陳皮、蒲公英、延胡索、制香附等中藥組成，具疏肝和胃、理氣止痛之功效，用于急慢性胃炎、消化不良和消化性潰瘍。本實(shí)驗(yàn)根據(jù)主要有效成分的理化性質(zhì)，臨床用藥基礎(chǔ)，以橙皮苷量和干膏得率［1-2］為綜合指標(biāo)，優(yōu)選水提、醇沉最佳制備工藝，為制定制劑標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。

1 材料與方法

1.1 儀器 液相色譜儀：LC-20AD，日本島津；電子分析天平：AUX220，日本島津；醫(yī)用超聲波清洗器：KQ-1000E，昆山超聲儀器公司；電熱鼓風(fēng)干燥箱：HN101-1A，南通滬南科學(xué)儀器有限公司；數(shù)顯型恒溫水浴鍋：XMTF3000，鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司。

1.2 試劑 橙皮苷對(duì)照品：批號(hào)110721-201115，購自中國藥品生物制品檢定所；甲醇、醋酸：色譜純，水：超純水，乙醇：分析純。廣陳皮、甘松、蒲公英等飲片由華潤南通醫(yī)藥有限公司配送，按照《中國藥典》2015年版一部鑒定均符合規(guī)定。

1.3 方法

1.3.1 橙皮苷含量測定

1.3.1.1 色譜條件 色譜柱：Amethyst C18-H柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）； 流動(dòng)相：甲醇 -0.6%醋酸溶液（33∶67）；檢測波長283 nm；柱溫30℃；流速：1.0 mL·min-1；進(jìn)樣量 5 μL［3］。

1.3.1.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取橙皮苷對(duì)照品15.08 mg，置于棕色容量瓶中，加甲醇溶解稀釋后使每1 mL含橙皮苷603.2 μg的溶液。

1.3.1.3 供試液、陰性供試液的制備 精密吸取提取液1 mL，置于10 mL棕色容量瓶中，加甲醇，超聲20 min，放冷后用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，濾液另器保存，備用。陰性供試液同法制得。

1.3.1.4 系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn) 取橙皮苷對(duì)照品溶液、供試液和陰性供試液各5 μL，分別注入高效液相色譜儀中，按“1.3.1.1”條件測定。供試液同對(duì)照品溶液在相應(yīng)的位置有吸收，陰性供試液未見干擾。橙皮苷峰分離度＞1.5。

1.3.1.5 線性關(guān)系考察 取“1.3.1.2”對(duì)照品溶液，加甲醇，稀釋至 301.6、150.8、75.4、37.7、18.85、9.425 μg·mL-1。按“1.3.1.1”色譜條件進(jìn)樣，橙皮苷的回歸方程y=1790.2x+18.45，r=0.9999。橙皮苷進(jìn)樣量在 0.0471～3.016 μg時(shí)，與峰面積建立了良好的線性關(guān)系。

1.3.1.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取橙皮苷對(duì)照品溶液，按照色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，測定峰面積RSD值為0.83%，表明儀器精密度良好。

1.3.1.7 重復(fù)性試驗(yàn) 精密吸取1 mL同一樣品，共6份，按“1.3.1.3”制備供試液，以橙皮苷量計(jì)算，RSD為1.21% （n=6）。

1.3.1.8 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取供試液，注入高效液相色譜儀中按“1.3.1.1”色譜條件，在0，2，4，6，8，12 h時(shí)分別進(jìn)樣，記錄峰面積RSD為1.15%（n=6）。表明供試液12 h內(nèi)穩(wěn)定。

1.3.1.9 回收率試驗(yàn) 取6份已知含量的同一樣品，加入橙皮苷對(duì)照品，同“1.3.1.3”方法制備供試液，測定，計(jì)算橙皮苷含量，平均回收率97.56%，峰面積RSD值為1.31%，表明此方法可行的。

2 水提工藝的研究

2.1 因素水平的確定 根據(jù)文獻(xiàn)和預(yù)試驗(yàn)，影響水提的主要因素：提取時(shí)間（A）；提取次數(shù)（B）；加水量（C）為因素［4］。用L9（34）進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平見表1。

表1 因素水平表

2.2 水提干膏得率 精密吸取1 mL提取液，置水浴鍋上蒸干，再放置烘箱中，恒溫105℃3 h，干燥器中冷卻30 min，稱重。

2.3 水提正交試驗(yàn)結(jié)果取100 g處方量飲片，根據(jù)L9（34）試驗(yàn)，測定橙皮苷含量和干膏率。主要指標(biāo)為橙皮苷量，權(quán)重系數(shù)0.7；次要指標(biāo)為干膏得率，權(quán)重系數(shù)0.3。綜合評(píng)分=（橙皮苷量/最大的橙皮苷量）×100×0.7+（干膏得率/最大干膏的得率）×100×0.3，以綜合評(píng)分為篩選指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果見表 2～3。

表2 正交試驗(yàn)結(jié)果表

表3 方差分析表

從表 2～3可以看出，因素B對(duì)結(jié)果有顯著的影響，而因素A、C均沒有顯著的影響，三個(gè)因素影響次序：B＞A＞C。各因素不同水平的影響次序?yàn)?A2＞A3＞A1，B3＞B2＞B1，C3＞C2＞C1，因此最佳提取工藝為 A2B3C3，即飲片加水12倍，加熱煎煮3次，每次1 h。

2.4 驗(yàn)證試驗(yàn) 取100 g處方量飲片，共3份，按優(yōu)選水提工藝提取。見表4。

表4 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明優(yōu)選的工藝穩(wěn)定、可行。

2.5 醇沉工藝的研究

2.5.1 因素水平的確定 根據(jù)預(yù)試，以醇沉的主要影響因素：醇沉的濃度（A）、濃縮液的相對(duì)密度（B）、醇沉的時(shí)間（C）作為因素［5］。用L9（34）進(jìn)行試驗(yàn)，因素水平見表5。

表5 因素水平表

2.5.2 正交試驗(yàn)結(jié)果 取100g處方量飲片，按優(yōu)選的水提工藝制備水提液。按L9（34）正交表試驗(yàn)，并計(jì)算綜合評(píng)分，以此為篩選指標(biāo)。試驗(yàn)結(jié)果見表6～7。

表6 正交試驗(yàn)結(jié)果表

表7 方差分析表

由表6～7可以看出，因素A、B、C均對(duì)結(jié)果沒有顯著影響。各因素影響次序B＞C＞A；各因素不同水平的影響次序?yàn)?A1＞A2＞A3，B1＞B2＞B3，C3＞C1＞C2，最佳醇沉工藝A1B1C3，即水提液濃縮至相對(duì)密度1.10（60℃），醇沉濃度60%，放置48 h。

2.5.3 驗(yàn)證試驗(yàn) 取100 g處方量飲片，共3份，按優(yōu)選的工藝試驗(yàn)。見表8。

表8 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

結(jié)果表明所優(yōu)選的醇沉工藝穩(wěn)定且可行。

3 討論

（1）為保持原方的療效和服用方便，用水提醇沉工藝提取胃必康顆粒。用L9（34）正交試驗(yàn)，研究對(duì)象為橙皮苷量和干膏得率，作為優(yōu)選工藝綜合評(píng)分指標(biāo)。（2）中藥水提液由于含蛋白質(zhì)、淀粉、多糖等雜質(zhì)較多。目前常用的去除雜質(zhì)方法有：乙醇沉淀法、吸附澄清方法、板框壓濾法、離心法等［6-10］實(shí)際大生產(chǎn)中，因藥液量較大，用高速離心法除雜，能耗大。用吸附澄清方法去除膠體不穩(wěn)定成分，如蛋白質(zhì)、淀粉等，但不影響氨基酸、維生素、多糖等，且此法工序多，而致成本高。乙醇沉淀法為中藥口服制劑精制常用方法，利用有效成分溶于乙醇，而雜質(zhì)不溶于乙醇，沉淀出來的方法［11］除雜效果較好。（3）流動(dòng)相的選擇：參考《藥典》［3］以甲醇-醋酸-水（35∶4∶61）為流動(dòng)相，橙皮苷分離不好，以甲醇-0.6% 醋酸溶液（33∶67）為流動(dòng)相時(shí)，分離較好。

4 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明飲片加水12倍，加熱煎煮提取3次，每次1 h；水提濃縮液相對(duì)密度為1.10（60℃），用乙醇沉淀，乙醇濃度為60%，并將其靜置48 h是穩(wěn)定合理可行的，適合作為本制劑的標(biāo)準(zhǔn)操作規(guī)程。