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    雞傳染性法氏囊病活疫苗(NF8株)生產(chǎn)工藝的參數(shù)優(yōu)化

    2019-07-08 05:19滕穎葛俊偉
    現(xiàn)代畜牧科技 2019年5期

    滕穎 葛俊偉

    摘要:雞傳染性法氏囊?。↖BD)是由傳染性法氏囊病病毒引起的、主要侵害幼齡雞的一種急性、高度接觸性傳染病。用于防治IBD的疫苗有活疫苗、滅活疫苗和其他疫苗。我國(guó)已經(jīng)批準(zhǔn)新獸藥注冊(cè)和進(jìn)口注冊(cè)的IBD活疫苗很多,包括低毒力株活疫苗、中等毒力株活疫苗和中等偏強(qiáng)毒力株活疫苗。中等毒力株活疫苗NF8株既具有一定毒力,可突破一定水平的母源抗體,又不引起法氏囊不可逆的損傷。在制苗用毒液的制備工藝環(huán)節(jié)中,由于毒種不同的稀釋倍數(shù)、雞胚不同的培養(yǎng)時(shí)間,對(duì)雞胚死亡的高峰時(shí)間、收獲單產(chǎn)結(jié)果都不同。為了得到更穩(wěn)定的產(chǎn)品質(zhì)量,適應(yīng)大規(guī)模生產(chǎn)還需要進(jìn)一步優(yōu)化疫苗的生產(chǎn)工藝參數(shù)。

    關(guān)鍵詞:雞;傳染性法氏囊病活疫苗(NF8株);雞胚接種日齡;毒種稀釋倍數(shù);培養(yǎng)時(shí)間

    中圖分類(lèi)號(hào):S852.5 ? ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼:B

    文章編號(hào):2095-9737(2019)05-0011-01

    1 材料

    毒種:雞傳染性法氏囊病病毒(NF8株),批號(hào)201802,由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司提供,符合毒種標(biāo)準(zhǔn)要求。

    雞胚:選用哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司SPF雞場(chǎng)提供的SPF種蛋,分別孵化成10~11日齡的雞胚。

    0.85%生理鹽水:由哈藥集團(tuán)生物疫苗有限公司配制、滅菌。

    2 方法

    2.1 接毒量?jī)?yōu)化

    將雞傳染性法氏囊病病毒(NF8株)毒種用生理鹽水作50倍、100倍和500倍稀釋?zhuān)謩e經(jīng)尿囊腔接種10~11日齡SPF雞胚150枚,接毒量為0.1 mL/枚,并設(shè)10枚10~11日齡SPF雞胚作為空白對(duì)照,置37℃繼續(xù)培養(yǎng)。雞胚接種后,將24 h前死亡的雞胚棄去,后每6 h撿胚1次,死胚取出氣室向上,置2~8℃冷卻12 h后,用碘酊消毒氣室部位,然后無(wú)菌收取胎兒。在收取胎兒前對(duì)每枚雞胚進(jìn)行檢查,凡胎兒腐敗、胚液渾濁及有任何可疑污染者棄去;各組收取的胎兒放于不同滅菌的容器內(nèi),測(cè)定病毒含量和單胚收獲量。

    2.2 收毒時(shí)間優(yōu)化

    將雞傳染性法氏囊病病毒(NF8株)毒種作100倍稀釋?zhuān)謩e經(jīng)尿囊腔接種10~11日齡SPF雞胚150枚,每胚0.1 mL,并設(shè)10枚10~11日齡SPF雞胚作為空白對(duì)照,置36℃繼續(xù)培養(yǎng),雞胚接種后,將24 h前死亡的雞胚棄去,后每6 h撿胚1次,培養(yǎng)至96 h。取出死亡雞胚氣室向上,置2~8℃冷卻12 h后,用碘酊消毒氣室部位,然后無(wú)菌收取胎兒。在收取胎兒前對(duì)每枚雞胚進(jìn)行檢查,凡胎兒腐敗、胚液渾濁及有任何可疑污染者棄去;各組收取的胎兒放于不同滅菌的容器內(nèi),測(cè)定病毒含量和單胚收獲量。

    3 結(jié)果與分析

    3.1 病毒稀釋度優(yōu)化結(jié)果

    將雞傳染性法氏囊病病毒(NF8株)毒種用生理鹽水作50倍、100倍和500倍稀釋?zhuān)謩e經(jīng)尿囊腔接種10~11日齡SPF雞胚50枚,從結(jié)果可見(jiàn),當(dāng)稀釋倍數(shù)為50倍及100倍時(shí),單產(chǎn)和病毒含量均相對(duì)較高,結(jié)果見(jiàn)表1??紤]到大規(guī)模生產(chǎn)的成本因素,選擇100倍稀釋為最佳病毒稀釋度。

    3.2 收毒時(shí)間優(yōu)化結(jié)果

    將雞傳染性法氏囊病病毒(NF8株)毒種以100倍稀釋?zhuān)謩e經(jīng)尿囊腔接種10~11日齡SPF雞胚180枚。從結(jié)果可見(jiàn),48 h和72 h收獲的原液病毒含量(ELD50)均相對(duì)較高,96 h病毒含量有所下降。在胚液的收獲量上,48 h獲的量明顯小于72 h和96 h獲的胚液量,結(jié)果見(jiàn)表2。從大規(guī)模生產(chǎn)的成本出發(fā),選擇72 h獲為最佳收毒時(shí)間。

    4 討論

    本次雞傳染性法氏囊病活疫苗(NF8株)生產(chǎn)工藝的參數(shù)優(yōu)化試驗(yàn),意在尋找雞傳染性法氏囊病在雞胚繁殖過(guò)程中,在確保半成品病毒含量達(dá)到規(guī)程標(biāo)準(zhǔn)要求的前提下提高收率,通過(guò)選擇不同原液收獲時(shí)間及毒種稀釋倍數(shù)的試驗(yàn)比較,將雞傳染性法氏囊病活疫苗(NF8株)做100倍稀釋接種10日齡雞胚,雞胚死亡高峰向后推遲,收獲單產(chǎn)提高。

    在該生產(chǎn)工藝條件下,收獲的病毒原液的病毒含量及單胚收獲量均可達(dá)到規(guī)程指標(biāo)要求。

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