CD44v4在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系

李俊 李春英

摘要：目的? 探討CD44v4在浸潤(rùn)性乳腺導(dǎo)管癌中的表達(dá)及其與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系。方法? 選取2011年1月～2018年3月我院收治的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌185例設(shè)為觀察組，另選取同期收治的乳腺良性疾病患者60例設(shè)為對(duì)照組，采用免疫組化法檢測(cè)兩組CD44v4的表達(dá)情況，并比較觀察組CD44v4表達(dá)及臨床病理因素情況。結(jié)果? 觀察組CD44v4陽(yáng)性表達(dá)率為60.54%，高于對(duì)照組的5.00%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。CD44v4表達(dá)在不同年齡、絕經(jīng)前后月經(jīng)狀況、原發(fā)瘤大小間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;不同TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD44v4表達(dá)比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論? CD44v4蛋白在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中為高表達(dá)，檢測(cè)其表達(dá)可作為判斷腫瘤預(yù)后的新指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：浸潤(rùn)性乳腺癌;CD44v4;浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移

中圖分類號(hào)：R737.9? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.11.025

文章編號(hào)：1006-1959（2019）11-0095-03

Abstract：Objective? To investigate the expression of CD44v4 in breast invasive ductal carcinoma and its relationship with invasion and metastasis.Methods? A total of 185 patients breast invasive ductal carcinoma as observation group， and 60 patients with benign breast diseasea as control group， were admitted to our hospital from January 2011 to March 2018. The immunohistochemical method was used to detect the expression of CD44v4 between two groups， and the correlation between the CD44v4 expression and clinicopathologic factors of observation group was analyzed.Results? The positive rate of CD44v4 expression was 60.54%，which was higher than that 5.00% of control group， the difference was statistically significant （P<0.05）. There was no statistically significant among different age， pre- and postmenopausal， different size of primary tumors with CD44v4 expression in observation group（P>0.05）; there was statistically significant between CD44v4 expression and patients in different TNM stage， histological grade and lymph node metastasis（P<0.05）.Conclusion? CD44v4 is highly expressed in breast invasive ductal carcinoma patients， and it can be used as a new marker to judge the prognosis of breast cancer.

Key words：Breast invasive ductal carcinoma;CD44v4;Invasion and metastasis

乳腺癌（breast cancer）是我國(guó)女性常見惡性腫瘤，上世紀(jì)90年代以來(lái)，中國(guó)乳腺癌發(fā)病率的增長(zhǎng)速度是全球的2倍[1]。乳腺癌死亡的主要原因是腫瘤轉(zhuǎn)移[2]。CD44v4是細(xì)胞黏附分子CD44家族中的一種變異體，目前發(fā)現(xiàn)在胃癌，膀胱癌等腫瘤中有表達(dá)，且與腫瘤的浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移存在相關(guān)性[3-5]，但其在乳腺癌中的研究則較少報(bào)道。本研究主要探討CD44v4在浸潤(rùn)性乳腺癌組織中的表達(dá)及其與浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移的關(guān)系，現(xiàn)報(bào)道如下。

1資料與方法

1.1一般資料? 選取2011年1月～2018年3月柳州市柳鐵中心醫(yī)院收治的經(jīng)病理確診的乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者185例設(shè)為觀察組，均為女性，年齡29～73歲，中位年齡53歲。另選取同期乳腺良性疾病患者60例設(shè)為對(duì)照組，均為女性，年齡21～68歲，中位年齡43歲。兩組年齡比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），可比較。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。

1.2方法? 兩組均采用免疫組化法[6]檢測(cè)CD44v4的表達(dá)情況。石蠟切片常規(guī)脫蠟水化后，用磷酸鹽緩沖液（phosphate buffered solution，PBS）沖洗，3次×3 min，然后進(jìn)行組織修復(fù)。每張切片加1滴或50 μl的3%H2O2，室溫下孵育10 min，以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶的活性，PBS沖洗，3次×3 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl的一抗（CD44v4），4℃過(guò)夜，PBS沖洗，3次×5 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl放大劑（試劑A），室溫下孵育10 min，PBS沖洗，3次×3 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl多聚酶結(jié)合物（試劑B），室溫下孵育10 min，PBS沖洗，3次×3 min。除去PBS液，每張切片加1滴或50 μl新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察3～5 min。自來(lái)水沖洗，蘇木素復(fù)染，用0.1% HCl分化，自來(lái)水沖洗，PBS返藍(lán)。DAB顯色，切片經(jīng)梯度酒精脫水干燥（二甲苯透明），中性樹膠封固。用PBS代替一抗作為陰性對(duì)照，用正常乳腺導(dǎo)管上皮組織做陽(yáng)性對(duì)照。CD44v4單克隆抗體購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)有限公司。

1.3結(jié)果判斷? CD44v4以包膜著色為主，可有少量胞漿著色，結(jié)果判定根據(jù)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量和染色深度綜合判斷，陽(yáng)性結(jié)果呈棕黃色顆粒[7]。從每例標(biāo)本的石蠟切片中隨機(jī)取5張切片進(jìn)行免疫組織化學(xué)染色。每個(gè)標(biāo)本在顯微鏡下隨機(jī)選取不重疊的10個(gè)高倍視野的陽(yáng)性細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，每張切片由2人觀測(cè)。按陽(yáng)性細(xì)胞占總細(xì)胞數(shù)的百分比評(píng)分：0分為陰性，陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)≤5%;1分為陽(yáng)性，細(xì)胞數(shù)5%～25%;2分為陽(yáng)性，細(xì)胞數(shù)25%～75%;3分為陽(yáng)性，細(xì)胞>75%。按著色強(qiáng)度評(píng)分：0分為無(wú)著色，1分為淺黃色，2分為黃色，3分為棕黃色，取兩項(xiàng)評(píng)分的乘積作為總積分，≤1分為陰性，>1分為陽(yáng)性。

1.4觀察指標(biāo)? 比較兩組CD44v4表達(dá)率，以及觀察組乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者CD44v4表達(dá)與臨床病理。

1.5統(tǒng)計(jì)學(xué)方法? 采用SPSS 16.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)量資料以（x±s）表示，采用t檢驗(yàn);計(jì)數(shù)資料以[n（%）]表示，采用？字2檢驗(yàn)。以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1兩組CD44v4表達(dá)率比較? 觀察組CD44v4陽(yáng)性表達(dá)率為60.54%（112/185），高于對(duì)照組的5.00%（3/60），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（？字2=43.05，P<0.05），見圖1。

2.2觀察組CD44v4表達(dá)與臨床病理參數(shù)比較? 觀察組185例乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中，CD44v4陽(yáng)性表達(dá)112例（60.54%），陰性表達(dá)73例（39.46%）。CD44v4表達(dá)在不同年齡、絕經(jīng)前后月經(jīng)狀況、原發(fā)瘤大小間比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;不同TNM分期、組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的CD44v4表達(dá)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

3討論

CD44v4是細(xì)胞粘附因子CD44變異體的一員，參與細(xì)胞-細(xì)胞、細(xì)胞-胞外基質(zhì)之間的特異性黏附，在食管癌、胃癌、肝癌、頭頸部腫瘤等腫瘤細(xì)胞中均有陽(yáng)性表達(dá)，是參與腫瘤生長(zhǎng)，分化和血道淋巴道轉(zhuǎn)移的重要因子[5，8-10]，其在乳腺癌的復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移中也發(fā)揮著重要作用[11]。有研究證實(shí)，腫瘤浸潤(rùn)轉(zhuǎn)移過(guò)程中的一個(gè)關(guān)鍵步驟就是脫落的腫瘤細(xì)胞穿過(guò)血管內(nèi)皮進(jìn)而遷移，在這個(gè)過(guò)程中，內(nèi)皮細(xì)胞E-選擇素起著舉足輕重的作用[12]，CD44v4則是介導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞跨內(nèi)皮轉(zhuǎn)移的一個(gè)主要的E-選擇素配體[13]。乳腺癌脫落細(xì)胞上的選擇素配體CD44v4與血管內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)的E選擇素結(jié)合，介導(dǎo)粘附過(guò)程[11]。但CD44v4的陽(yáng)性表達(dá)與乳腺癌腫瘤的大小、分級(jí)及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等臨床病理參數(shù)的相關(guān)性目前尚不明確。

本研究結(jié)果顯示，觀察組CD44v4陽(yáng)性表達(dá)率為60.54%（112/185），高于對(duì)照組的5.00%（3/60），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明乳腺癌組織中CD44v4濃度高于臨近的非癌組織，在乳腺癌組織中有陽(yáng)性高表達(dá)。CD44v4表達(dá)在不同年齡、絕經(jīng)前后月經(jīng)狀況、原發(fā)瘤大小比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;CD44v4表達(dá)在不同TNM分期、不同組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者中比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），說(shuō)明TNM分期、病理組織學(xué)分級(jí)、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移參與乳腺癌的惡性進(jìn)展，增強(qiáng)了乳腺癌腫瘤細(xì)胞的侵襲性。因此，通過(guò)研究CD44v4在乳腺癌發(fā)生發(fā)展中的作用，對(duì)判斷腫瘤的生物學(xué)特性和預(yù)后均具有重要意義。

綜上所述，CD44v4蛋白在乳腺浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌患者中為高表達(dá)，檢測(cè)其表達(dá)可作為判斷腫瘤預(yù)后的新指標(biāo)。

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收稿日期：2019-3-12;修回日期：2019-3-22

編輯/杜帆