CD15抗原、CD44v6蛋白及MMP-3在乳腺癌中的表達及相關(guān)性分析

戚利坤，劉長春，王巍

（青海省腫瘤醫(yī)院 腫瘤外科，青海 西寧 810007）

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤，嚴重威脅生命健康和生活質(zhì)量。乳腺癌相關(guān)基因及蛋白可分為：①與侵襲和轉(zhuǎn)移相關(guān)因子；②增殖與凋亡相關(guān)標志物；③原癌基因和抑癌基因；④激素受體；⑤特異性蛋白。CD15 抗原是一種具有中性金屬內(nèi)肽酶活性的細胞表面酶，具有降解基底膜及基質(zhì)的作用，表達于間質(zhì)細胞時參與多種腫瘤細胞的侵襲、轉(zhuǎn)移。基質(zhì)金屬蛋白酶3（matrix metalloproteinase 3,MMP-3）又稱基質(zhì)分解素，是基質(zhì)金屬蛋白酶家族中功能最活躍的成員之一，不僅與腫瘤生長有關(guān)，還可破壞周圍正常組織的基質(zhì)結(jié)構(gòu)，便于腫瘤細胞增殖，導致周圍纖維結(jié)締組織結(jié)構(gòu)松弛，使腫瘤細胞發(fā)生侵襲、轉(zhuǎn)移。CD44 是一種跨膜糖蛋白，CD44v6 是最早發(fā)現(xiàn)的CD44 變異體，因此CD15、CD44v6 及MMP-3 在乳腺癌中具有特異性表達。本文旨在觀察CD15、CD44v6 及MMP-3 在乳腺癌組織及乳腺癌旁組織中的相關(guān)性表達，為臨床治療乳腺癌提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年7月—2016年7月青海省腫瘤醫(yī)院收治的乳腺癌患者80 例，采集患者的乳腺組織石蠟標本。患者年齡26～83 歲，中位年齡52 歲；絕經(jīng)47 例，未絕經(jīng)33 例；浸潤性導管癌59 例，其他類別癌21 例；伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移62 例，不伴腋窩淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移18 例；按組織學分級Ⅰ級37 例，Ⅱ級23 例、Ⅲ級20 例；患者均無其他腫瘤病史，且術(shù)前均未進行化療。取患者同樣數(shù)量的癌旁正常組織作為對照?；颊邔ρ芯績?nèi)容知悉并簽署知情同意書，研究方案經(jīng)本院倫理學委員會批準。

1.2 試劑

鼠抗人CD15 單克隆抗體、鼠抗人CD44v6 單克隆抗體、鼠抗人MMP-3 單克隆抗體及鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶法（streptavidin-perosidase,SP）相關(guān)檢測試劑盒均購自美國MAXIM 公司。

1.3 方法

所有組織標本經(jīng)4%中性甲醛固定，石蠟包埋，采用免疫組織化學SP 法，具體操作過程嚴格按照說明書進行。其中陽性對照為已知陽性切片，陰性對照用磷酸鹽緩沖液代替一抗。

1.4 結(jié)果判定

CD15 抗原和CD44v6 蛋白在細胞膜、細胞質(zhì)及腺腔邊緣著棕黃色；MMP-3 為細胞核著棕黃色。均為同一名檢驗醫(yī)師在相同的操作條件下采用盲法檢測完成。每份病理切片計數(shù)1000 個腫瘤細胞，無陽性染色細胞為陰性（-）；陽性細胞率≤25%為弱陽性（+）；陽性細胞數(shù)在＞25%～＜50%為陽性（++）；陽性細胞數(shù)≥50%為強陽性（+++）。細胞的總陽性率= 弱陽性率+陽性率+強陽性率。

1.5 統(tǒng)計學方法

數(shù)據(jù)分析采用SPSS 17.0 統(tǒng)計學軟件，計數(shù)資料以率（%）表示，比較用χ2檢驗，相關(guān)分析用Spearman 法，P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 乳腺癌組織及癌旁組織中CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 的比較

患者乳腺癌組織中CD15 總陽性率為76.25%（61/80）、癌旁組織中CD15總陽性率為8.75%（7/80），兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=74.578，P=0.000），乳腺癌癌組織高于癌旁組織?；颊呷橄侔┙M織中CD44v6 總陽性率為73.75%（59/80）、癌旁組織中總陽性率為11.25%（9/80），兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=63.939，P=0.000），乳腺癌癌組織高于癌旁組織?；颊呷橄侔┙M織中MMP-3 總陽性率為78.75%（63/80）、癌旁組織中總陽性率為7.50%（6/80），兩者比較，差異有統(tǒng)計學意義（χ2=82.790，P=0.000），乳腺癌癌組織高于癌旁組織。見圖1。

2.2 CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 在不同臨床特征乳腺癌組織中總陽性率的比較

不同歲數(shù)患者CD15、CD44v6 及MMP-3 總陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。是否絕經(jīng)患者CD15、CD44v6 及MMP-3 陽性率比較，差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。是否淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者CD15、CD44v6、MMP-3 陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者陽性率較高。不同組織分級患者的CD15、CD44v6 及MMP-3 陽性率比較，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），Ⅱ、Ⅲ級陽性率高于Ⅰ級。見表1。

圖1 乳腺組織CD15、CD44v6、MMP-3 陽性表達 （×400）

表1 不同臨床特征乳腺癌組織中CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 陽性率的比較 例（%）

2.3 CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 與臨床病理指標的相關(guān)性

乳腺癌組織中CD15 抗原與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況呈正相關(guān)（rs=0.487，P=0.000），與組織學分級呈正相關(guān)（rs=0.561，P=0.000），與患者的年齡無相關(guān)性（rs=0.187，P=0.189），與絕經(jīng)無相關(guān)性（rs=0.207，P=0.134）。CD44v6 蛋白與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況呈正相關(guān)（rs=0.417，P=0.000），與組織學分級呈正相關(guān)（rs=0.508，P=0.000），與患者的年齡無相關(guān)性（rs=0.203，P=0.135），與絕經(jīng)無相關(guān)性（rs=0.156，P=0.231）。MMP-3 與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況呈正相關(guān)（rs=0.412，P=0.000），與組織學分級呈正相關(guān)（rs=0.524，P=0.000），與患者的年齡無相關(guān)性（rs=0.203，P=0.114），與絕經(jīng)無相關(guān)性（rs=0.179，P=0.264）。

2.4 乳腺癌組織中CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 表達的相關(guān)性

2.4.1 CD15 抗原與CD44v6 蛋白表達的相關(guān)性 在61 例CD15 抗原陽性表達患者中，CD44v6 蛋白總陽性率為91.80%（56/61），陰性率為8.20%（5/61）；在19 例CD15 抗原陰性表達患者中，CD44v6 蛋白總陽性率為3.28%（2/19），陰性率為96.72%（17/19）。乳腺癌組織中CD15 與CD44v6呈正相關(guān)（rs=0.453，P=0.005）。

2.4.2 CD15 抗原與MMP-3 在表達的相關(guān)性 在61 例CD15 抗原陽性表達患者中，MMP-3 總陽性率為96.72%（59/61）5，陰性率為3.28%（2/61）；在19 例CD15 抗原陰性表達患者中，MMP-3 蛋白總陽性率為8.20%（5/19），陰性率為73.68%（14/19），乳腺癌組織中CD15 與MMP-3 呈正相關(guān)（rs=0.778，P=0.001）

2.4.3 CD44v6 蛋白與MMP-3 在乳腺癌組織中的表達的相關(guān)性 在59 例CD44v6 蛋白陽性表達患者中，MMP-3 總陽性率為94.92%（56/59），陰性率為5.08%（3/59）；在21 例CD44v6 蛋白陰性表達患者中MMP-3 總陽性率為10.17%（7/22），陰性率為71.42%（15/22），CD44v6 與MMP-3 在乳腺癌組織中呈正相關(guān)（rs=0.675，P=0.001）。

3 討論

乳腺癌惡性腫瘤的浸潤與轉(zhuǎn)移是個多步驟且復雜的過程，涉及到腫瘤細胞與細胞間質(zhì)及腫瘤細胞之間錯綜復雜的關(guān)系。而黏附分子及其配體在惡性腫瘤的浸潤、轉(zhuǎn)移過程發(fā)揮著重要作用[1-2]。目前黏附分子可分為5 類，其中CD15 屬于選擇素家族中重要的成員，又被稱為粒細胞相關(guān)抗原，是上皮細胞更新分裂以及分化的重要標志物。CD15 不同程度的廣泛表達于不同組織的上皮細胞中，當發(fā)生惡性腫瘤時，組織結(jié)構(gòu)紊亂，正常組織中具有極性分布的CD15 隨之發(fā)生明顯的異質(zhì)變化，在正常乳腺組織中CD15 則呈弱陽性表達，而在乳腺癌組織中則呈異常高表達[3-4]。 CD15 通常以混合形式存在于腺腔緣、細胞膜或者細胞漿，但其陽性物質(zhì)主要分布在細胞漿內(nèi)。ZHANG等[5]研究發(fā)現(xiàn)CD15 可做為腦瘤診斷鑒別的重要指標。JEEP[6]和NIU 等[7]對結(jié)腸癌中CD15 表達的研究亦支持上述結(jié)論。

CD44 分子又被稱為Hermes 抗原，是一種廣泛分布于細胞表面的跨膜蛋白，主要增強腫瘤細胞的黏附性和運動能力，影響腫瘤細胞的發(fā)生、發(fā)展，以及浸潤、轉(zhuǎn)移，近年來越來越受到人們的重視。CD44v6 是目前研究較多的變異體之一，其參與到激活淋巴細胞、信號傳導及促進細胞間黏附等生物學過程[8]。國內(nèi)外新近研究均顯示CD44v6 參與乳腺癌細胞的遷徙與移動，加速病情的惡化[9-11]?；|(zhì)金屬蛋白酶家族的成員幾乎能降解所有細胞外基質(zhì)成分[12]。而其中MMP-3 主要在基因轉(zhuǎn)錄水平、酶原激活條及MMP 抑制劑的調(diào)節(jié)起活性作用[13-14]。在正常的乳腺組織中，MMP-3 的表達處于低水平，但受外界刺激或內(nèi)環(huán)境改變后可引起其表達水平的變化。LOH 等[15]研究發(fā)現(xiàn)大鼠乳腺癌組織中MMP-3 表達量顯著增加，給予蒙藥乳腺-1號治療后，MMP-3 表達量顯著下降。

在本研究中乳腺癌患者的CD15 抗原、CD44v6蛋白及MMP-3 在腫瘤組織中的表達高于癌旁組織，表明檢測CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 水平能反映乳腺癌病情的輕重程度，但與患者的年齡或者是否絕經(jīng)無關(guān)；也有研究表明乳腺癌的發(fā)病率與是否生育、第一次生育年齡、生育次數(shù)及生育間隔都有密切的聯(lián)系，后期研究可以從這些方面加以考慮[16-17]。從研究中還發(fā)現(xiàn)CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 在乳腺癌組織中的表達呈正相關(guān)。

綜上所述，CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3在乳腺癌組織中的表達具有一定的相關(guān)性，臨床上聯(lián)合檢測CD15 抗原、CD44v6 蛋白及MMP-3 的表達水平，對鑒別診斷乳腺腫瘤良惡性病變程度具有重要參考價值。