標(biāo)本經(jīng)液化濃縮后抗酸染色檢測(cè)分枝桿菌

王 勇,黃昕明,郭宇航,王曉紅

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院,黑龍江 佳木斯 154003;2.佳木斯婦幼保健院,黑龍江 佳木斯 154003)

近年來(lái) ,由于免疫缺陷患者逐年增多、臨床激素、免疫抑制劑應(yīng)用廣泛等原因使分枝桿菌條件感染病例呈明顯上升趨勢(shì)。雖然目前針對(duì)分枝桿菌病診斷的新方法層出不窮。但經(jīng)典的抗酸染色仍然是醫(yī)生診斷以結(jié)核為主的分枝桿菌病的重要依據(jù)。目前實(shí)驗(yàn)室常規(guī)采用痰涂片抗酸染色方法雖簡(jiǎn)便易行,但該方法最小檢出菌量要達(dá)到10,000條 /mL以上,陽(yáng)性檢出率較低,大大影響了分枝桿菌病的臨床病原學(xué)診斷。為提高病原學(xué)診斷陽(yáng)性率,在日常工作中我們對(duì)準(zhǔn)備進(jìn)行抗酸染色的臨床痰標(biāo)本在預(yù)處理方法上進(jìn)行了改進(jìn),取得了很好的效果,明顯提高臨床痰標(biāo)本分枝桿菌的陽(yáng)性檢出率。

1 材料和方法

1.1 材料

濃縮液 (PEG6000、 NaCl等成分 )、提取液 (EDTA、 Tris-HCl、NP40等成分)、10%次氯酸鈉購(gòu)自廣州中山大學(xué)達(dá)安生物診斷公司;抗酸染色液購(gòu)自臺(tái)灣 BASO公司;高速臺(tái)式離心機(jī)系上海安亭科學(xué)儀器公司產(chǎn)品。

1.2 方法

患者清晨漱口后咳深部痰于有蓋無(wú)菌試管內(nèi)。在無(wú)菌試管內(nèi)加入 2～ 3倍量10%次氯酸鈉,室溫放置30min,期間每10分鐘振蕩混勻,混勻數(shù)次后痰液即可充分液化。將液化后痰液加入等量 DNA濃縮液震蕩混勻13,000rmp離心 10min,棄去上清液,在沉淀中加入 DNA提取液40μL,震蕩混勻后55℃加熱10min,10000rmp離心5min。吸去上清液,取沉淀涂片,干燥后按常規(guī)方法行抗酸染色。對(duì)照組采用常規(guī)方法:即痰標(biāo)本直接涂片行抗酸染色作為方法學(xué)對(duì)照。

2 結(jié)果

來(lái)自臨床各科室痰標(biāo)本58份 ,實(shí)驗(yàn)組抗酸染色陽(yáng)性19例(19/58),占總數(shù)32.76%;對(duì)照組抗酸染色陽(yáng)性14例(14/58),占總數(shù) 24.14%;其中實(shí)驗(yàn)組 19例陽(yáng)性標(biāo)本包括對(duì)照組全部14例陽(yáng)性標(biāo)本。兩組結(jié)果具有明顯差異。

3 討論

近年來(lái)針對(duì)分枝桿菌診斷的新方法層出不窮,尤其是分子生物學(xué)方法快速敏感,但對(duì)于資源有限情況下分枝桿菌檢測(cè)仍主要依賴于傳統(tǒng)的抗酸染色檢查,尤其是結(jié)核為代表的分枝桿菌感染的“重災(zāi)區(qū)”往往是哪些貧窮、落后的農(nóng)村地區(qū),如何利用現(xiàn)有農(nóng)村醫(yī)療資源,建立快速、敏感檢測(cè)分枝桿菌感染的方法意義更為重大。原有常規(guī)抗酸染色雖簡(jiǎn)單易行,但最小檢出菌量要達(dá)到 10,000條 /mL以上,約有 24～61%的 HIV/AIDS結(jié)核患者為抗酸染色陰性肺結(jié)核。因此,提高抗酸染色陽(yáng)性檢出率異常重要。從本實(shí)驗(yàn)對(duì)原有方法改進(jìn)中,作為液化劑而使用的次氯酸鈉具有滅菌特性可以起到很好的生物安全防護(hù)作用。符合 SARS流行后國(guó)家衛(wèi)生組織對(duì)醫(yī)療機(jī)構(gòu)生物安全的要求。濃縮液的使用,可以最大限度的使標(biāo)本中抗酸桿菌濃集,提取液與痰沉淀物混勻后55℃加熱10min不會(huì)損傷分枝桿菌,但可以破壞痰中雜菌,減少雜質(zhì)對(duì)染色的干擾。這些都有利于陽(yáng)性檢出率的提高。