不同產(chǎn)地?zé)舯K細辛藥材中焦袂康酸的限量檢查

劉瑩瑩 肖琳婧 張艷明

【摘 要】 目的：建立測定燈盞細辛藥材中焦袂康酸限量的高效液相色譜檢查方法。方法：采用JADE-PAK ODS（250mm×4.6mm，5μm）色譜柱，乙腈-水（5∶95）為流動相，流速：1mL/min，檢測波長為270nm，柱溫30℃。結(jié)果：焦袂康酸在0.2028～4.0560mg（r=0.9999）范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系;平均加樣回收率（n=6）為99.6%， RSD為0.8%。結(jié)論：所建立的方法簡便可行，結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可用于燈盞細辛中焦袂康酸的限量檢查。

【關(guān)鍵詞】 不同產(chǎn)地;燈盞細辛;HPLC;焦袂康酸;限量檢查

【中圖分類號】R927 【文獻標(biāo)志碼】 A【文章編號】1007-8517（2019）3-0034-03

Abstract：Objective To establish a method for Limited inspection of Pyromeconic acid in Erigeron breviscapus with RP-HPLC. Methods The mobile phase was consisted of Acetonitrile-water （5∶95）， The flow rate was 1.0mL/min， the detective wavelength was 270nm and the column temperature was 30℃. Results The linear range of the method was 0.2028～4.0560mg， the average recovery was 99.6%， RSD was 0.8%. Conclusion The established method is simple and feasible， and the result is accurate and reliable. It can be used for the limited inspection of Pyromeconic acid in Erigeron breviscapus.

Keywords： Different Origins; Erigeron breviscapus; HPLC; Pyromeconic Acid; Limited Inspection

燈盞細辛（燈盞花）為菊科植物短葶飛蓬Erigeron breviscapus （Vant.） Hand.-Mazz.的干燥全草。燈盞細辛具有活血通絡(luò)止痛、祛風(fēng)散寒的作用、用于中風(fēng)偏癱、胸痹心痛、風(fēng)濕痹痛、頭痛、牙痛[1]。燈盞細辛（燈盞花）中的焦袂康酸具有降壓、鎮(zhèn)靜的作用[2]，還具有顯著增加腦血管流量，改善腦血循環(huán)，降低腦血管阻力，提高血腦屏障的通透性，增加心肌營養(yǎng)回流的作用，同時具備提高機體巨噬細胞免疫功能和較強的抑制內(nèi)凝血等作用[3]。但焦袂康酸具有肝毒性[4-5]，長期服用可能會對患者肝臟有較大的損傷。為了保證本藥材臨床用藥的安全性，本研究建立了用高效液相法測定燈盞細辛中焦袂康酸的限量檢查方法。為焦袂康酸的限量檢查提供了更為準(zhǔn)確可靠的方法。

1 儀器與試藥

Waters 2695 液相色譜儀，Waters 2996（PDA）檢測器;萬分之一Sartorius BS224S型電子分析天平（Sartorius公司，美國）;十萬分之一 DENVER TB-215D型電子分析天平（DENVER公司，美國）;AS7240A超聲清洗儀（天津奧特賽斯儀器有限公司）。焦袂康酸（上海源葉生物科技有限公司，批號：B20618，≥98%）。實驗用水為超純水，乙腈為色譜純，其余試劑為分析純。19批燈盞花藥材均收集于云南省和四川省，經(jīng)云南中醫(yī)學(xué)院中藥學(xué)院中藥資源教研室李國棟副教授鑒定為燈盞花Erigeron breviscapus （Vant.） Hand-Mazz.見表1。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液 取焦袂康酸對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1mL含0.2028mg的溶液。

2.1.2 供試品溶液 取本品0.5g，精密稱定，置50mL容量瓶中，加入甲醇40mL，超聲處理（300W，25kHz）20min，冷卻至室溫，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.2 色譜條件 色譜柱為JADE-PAK ODS（250mm×4.6mm，5μm），乙腈―水（5∶95）為流動相，流速1.0mL/min，檢測波長為270nm，進樣量10μL。在上述色譜條件下，取對照品溶液、供試品溶液、進樣測定。結(jié)果如圖1所示。

2.3 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取焦袂康酸對照品溶液1、2、4、6、8、10、20μL，按上述色譜條件，測定焦袂康酸峰面積。分別以焦袂康酸進樣量為橫坐標(biāo)（X），以峰面積積分值A(chǔ)為縱坐標(biāo)（Y），進行線性回歸，得線性方程為：Y=57802X-2721.3（r=0.9999），表明焦袂康酸在0.2028～4.0560mg范圍內(nèi)呈現(xiàn)良好的線性。

2.4 精密度試驗 精密吸取對照品溶液10μL，連續(xù)進樣5次，記錄峰面積。RSD為0.2%，結(jié)果表明儀器精密度良好。

2.5 重復(fù)性試驗 取S1樣品，按“2.1.2”項下方法制備6份供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件進行含量測定，結(jié)果焦袂康酸的含量為20.1320mg/g;RSD分別為1.2%，說明測量方法的重復(fù)性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗 按“2.1.2”項下方法制備一份供試溶液，精密吸取10μL，分別于0、4、8、12和24h各測定1次，結(jié)果5次測定所得的峰面積值的RSD為0.3%。結(jié)果表明，室溫條件下，供試品溶液中的焦袂康酸在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 加樣回收試驗 分別精密稱取6份已知含量的樣品S1每份約0.25g，精密稱定。 精密加入1mL濃度為4.998mg/mL焦袂康酸對照品溶液，按“2.1.2”項下的方法制備供試溶液，進樣分析，計算焦袂康酸平均回收率（n=6）為99.60%，RSD為0.8%。表明試驗方法準(zhǔn)確度好。結(jié)果見表2。

2.8 樣品中焦袂康酸含量測定 分別稱取19批燈盞花藥材，按“2.1.2”項下方法制備供試品溶液，按“2.2”項下色譜條件測定，以外標(biāo)法計算含量，結(jié)果見表3。

3 討論

本實驗通過對提取方法，提取溶劑，提取時間，檢測波長分別進行了考察及參照相關(guān)文獻資料中的有焦袂康酸的含量測定方法[7-9]后進行改進，最后確定了以乙腈-水（5∶95）為流動相，檢測波長為270nm，流速1mL/min，樣品超聲處理（功率300W，頻率25kHz）20min對樣品中焦袂康酸的含量進行測定， 試驗結(jié)果表明，樣品分離效果好。經(jīng)方法學(xué)考察，本含量測定方法結(jié)果較好，方法可行。

在《中國藥典》2015年版一部中僅有燈盞生脈膠囊中對焦袂康酸進行了檢查，但僅為化學(xué)反應(yīng)，不能進行定量且專屬性較差，故本研究采用高效液相色譜法進行焦袂康酸的限量檢查。結(jié)果表明采用高效液相色譜法進行限量檢查更為準(zhǔn)確且靈敏度高。

文獻報道中[5-6]焦袂康酸被用作小鼠慢性肝炎病理研究的工具藥，在該實驗中小鼠每日攝入量為18.6mg。目前暫時缺少該成分對人體產(chǎn)生傷害的最低限量的報道，其具體限量要求還需要進一步藥理和臨床研究后再要求。

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（收稿日期：2018-12-14 編輯：劉 斌）