乙型肝炎病毒感染患者T細(xì)胞和白細(xì)胞介素-6水平的表達(dá)及臨床意義*

李艷芳，楊雪梅，袁 媛

成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院 感染科(成都 610500)

乙型肝炎病毒(HBV)感染是引發(fā)多種肝臟疾病的重要因素[1]。資料[2-3]顯示，HBV并不直接損傷肝細(xì)胞，而是經(jīng)誘發(fā)免疫反應(yīng)的路徑間接導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷。研究[4]證明，在HBV導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷過程中，T細(xì)胞為細(xì)胞免疫的重要組成，可有效清除HBV病毒，在避免機(jī)體感染HBV過程中具有重要作用。細(xì)胞因子為進(jìn)行免疫應(yīng)答、參與免疫調(diào)節(jié)的生物活性蛋白[5]。研究[6]發(fā)現(xiàn)，白細(xì)胞介素-6(IL-6)可促進(jìn)生成多種炎性介質(zhì)，導(dǎo)致肝細(xì)胞損傷，誘發(fā)HBV感染并促進(jìn)其進(jìn)展。但目前缺乏HBV感染者機(jī)體T細(xì)胞、IL-6水平改變及關(guān)系的相關(guān)研究。因此，成都醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院針對HBV感染者展開相關(guān)研究，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2014年1月至2017年6月入住我院的HBV感染者286例。納入標(biāo)準(zhǔn)：1)經(jīng)病毒檢測確診為HBV感染，且符合相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]者；2)知情同意者。排除標(biāo)準(zhǔn)：1)近12個月內(nèi)有抗病毒治療史者；2)合并其他肝炎患者；3)合并其他病毒感染者；4)近1年應(yīng)用免疫治療及免疫功能異?；颊?。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會同意。納入同期體檢健康者60例為對照組，按照感染程度分為急性組、慢性組、乙肝肝硬化組，各組基線資料比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)(表1)。

表1 各組基線資料比較

1.2 方法

1.2.1 血液標(biāo)本采集 分別采集兩組清晨空腹靜脈血8 mL，取4 mL加入抗凝試管，檢測T細(xì)胞；各取2 mL分別加入普通試管以檢測HBV-DNA、IL-6。

1.2.2 T細(xì)胞檢測 將上述血液加入三色單克隆抗體20 μL后混勻，于避光、恒溫(4 °C)下靜置10 min，以流式細(xì)胞儀檢測T細(xì)胞分布。

1.2.3 定量檢測HBV-DNA 取上述血液離心10 min，分離血清，以實(shí)時熒光定量PCR法檢測HBV感染者HBV-DNA載量。陽性：≥103copy/mL,低載量組：103～104copy/mL，中載量組：104～105copy/mL，高載量組：>105copy/mL；陰性組：<103copy/mL。

1.2.4 IL-6檢測 取上述血液離心，4 000 r/min，離心半徑6 cm，離心10 min，分離血清，血清IL-6以酶聯(lián)免疫吸附法檢測。

1.3 觀察指標(biāo)

觀察不同疾病譜HBV感染者、HBV-DNA載量不同HBV感染者的IL-6與T細(xì)胞分布，及其與HBV-DNA載量的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 23.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。定性資料以例數(shù)(%)表示，采用秩和檢驗(yàn)(等級數(shù)據(jù))或2檢驗(yàn)(常規(guī)數(shù)據(jù))。定量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，多組數(shù)據(jù)比較采用單因素方差分析，兩組比較行LSD-t檢驗(yàn)。采用Pearson相關(guān)分析HBV感染者T細(xì)胞、HBV-DNA載量與IL-6的相關(guān)性。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α除特殊說明外均設(shè)定為0.05。

2 結(jié)果

2.1 各組T細(xì)胞分布

各組CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+整體及組間比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。急性組、慢性組、乙肝肝硬化組CD3+、CD4+和CD4+/CD8+低于對照組，CD8+高于對照組(P<0.05)，感染越嚴(yán)重，CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+越低，CD8+越高，各組CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義((P<0.05)(表2)。

表2 各組感染者T細(xì)胞分布

注：與對照組比較，*P<0.05；與急性組比較，#P<0.05；與慢性組比較，△P<0.05

2.2 各組HBV-DNA載量及IL-6水平比較

各組HBV-DNA載量以及IL-6比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，疾病越嚴(yán)重HBV-DNA載量及IL-6水平越高(表3)。

2.3 不同HBV-DNA載量HBV感染者T細(xì)胞分布

低載量組、中載量組、高載量組CD3+、CD4+和CD4+/CD8+較陰性組低，CD8+較陰性組高(P<0.05)；隨HBV-DNA載量增加，CD3+、CD4+和CD4+/CD8+逐漸降低，CD8+逐漸升高，各組CD3+、CD4+、CD8+和CD4+/CD8+比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表4)。

表3 各組HBV-DNA載量及IL-6水平比較

注：與對照組比較，*P<0.05；與急性組比較，#P<0.05；與慢性組比較，△P<0.05

表4 不同HBV-DNA載量HBV感染者T細(xì)胞分布

注：與陰性組比較，*P<0.05；與低載量組比較，#P<0.05；與中載量組比較，△P<0.05

2.4 不同HBV-DNA載量HBV感染者IL-6水平比較

低載量組、中載量組、高載量組IL-6較陰性組高(P<0.05)；隨HBV-DNA載量增加，IL-6逐漸升高，各組IL-6比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)(表5)。

組別nIL-6陰性組6053.34±5.40低載量組8082.31±8.32?中載量組133190.52±21.77?#高載量組73238.11±24.28?#△F1 738.732P<0.001

注：與陰性組比較，*P<0.05；與低載量組比較，#P<0.05；與中載量組比較，△P<0.05

2.5 HBV感染者T細(xì)胞、HBV-DNA載量與IL-6的相關(guān)性

經(jīng)Pearson相關(guān)分析，HBV感染者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、HBV-DNA載量與IL-6呈正相關(guān)(r=0.483、0.552、0.631、0.587，P=0.008、<0.001、<0.001、<0.001)，IL-6與CD8+呈負(fù)相關(guān)(r=-0.493，P=0.007)。

3 討論

HBV為雙鏈DNA病毒，對人體肝臟有親和性[8]。當(dāng)機(jī)體感染HBV后會啟動免疫應(yīng)答，以清除進(jìn)入體內(nèi)的HBV[9]。研究[10]表明，肝細(xì)胞與機(jī)體免疫細(xì)胞、病毒的相互作用是導(dǎo)致乙型肝炎預(yù)后不同的關(guān)鍵。目前，尚不明確HBV導(dǎo)致免疫功能改變的機(jī)制。通常研究[11]認(rèn)為，抗HBV過程中，細(xì)胞免疫和體液免疫均發(fā)揮重要作用，其中，細(xì)胞免疫較體液免疫清除HBV的能力更強(qiáng)。在免疫應(yīng)答過程中，不同種類的T細(xì)胞相互作用，共同發(fā)揮清除病毒的作用[12]。IL-6由上皮細(xì)胞和淋巴細(xì)胞生成并分泌，參與免疫反應(yīng)[13]。近年來研究[14]發(fā)現(xiàn)，IL-6可以通過激活多種信號通路促進(jìn)細(xì)胞釋放炎癥介質(zhì)，并產(chǎn)生級聯(lián)放大效應(yīng)，導(dǎo)致肝功能受損，促進(jìn)HBV感染。IL-6可經(jīng)復(fù)合物p-STAT3-HNF-3和HBV Enh1共同作用路徑促進(jìn)HBV再激活[15]。IL-6也可提高部分信號通道活性，激活HBV增強(qiáng)子1，干預(yù)表達(dá)HBX及HBV復(fù)制[16]。IL-6具有細(xì)胞毒性，可導(dǎo)致免疫損傷，致使T細(xì)胞等免疫因子失衡，促進(jìn)HBV感染[17]。

本研究中，急性組、慢性組、乙肝肝硬化組CD3+、CD4+以及CD4+/CD8+較對照組低，CD8+較對照組高，與顧利江等[18]報道一致，表明不同類型的HBV感染者均會出現(xiàn)CD3+、CD4+和CD4+/CD8+異常降低，CD8+異常升高。其中，CD4+細(xì)胞又被稱為輔助T細(xì)胞，主要起到識別抗原的作用[19]。CD8+被稱為細(xì)胞毒性T細(xì)胞，起到殺傷病毒的作用[20]。CD3+被認(rèn)為在T細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起到重要作用[21]。推測機(jī)體在感染HBV后，各種T細(xì)胞相互作用，共同發(fā)揮殺傷病毒的作用。同時HBV可影響T細(xì)胞生成，致使CD4+/CD8+降低，導(dǎo)致細(xì)胞免疫應(yīng)答紊亂。因此，T細(xì)胞盡管能夠識別HBV，但因HBV可抑制T細(xì)胞功能，故其殺傷HBV的效率較低[22]。本研究中，疾病越嚴(yán)重患者，T細(xì)胞紊亂程度越嚴(yán)重，說明HBV感染者免疫狀態(tài)可以影響疾病的進(jìn)展和預(yù)后。同時，隨疾病進(jìn)展，HBV-DNA載量及IL-6的水平逐漸升高，且HBV-DNA載量越高，IL-6水平越高。這說明乙型肝炎的進(jìn)展可能與肝細(xì)胞、免疫細(xì)胞、病毒間的相互作用存在一定關(guān)系。隨疾病進(jìn)展，HBV大量生成，產(chǎn)生免疫應(yīng)答，刺激IL-6水平逐漸升高[23]。從不同HBV-DNA載量HBV感染者IL-6、T細(xì)胞水平比較來看，低、中、高載量組CD3+、CD4+和CD4+/CD8+低于陰性組，CD8+、IL-6明顯高于陰性組，隨HBV-DNA載量增加，CD8+、IL-6升高，CD3+、CD4+和CD4+/CD8+降低。提示HBV感染者T細(xì)胞分布、IL-6水平和HBV-DNA載量有密切關(guān)系。

研究[24]認(rèn)為，IL-6可通過激活JAKS和STAT信號通路起到增強(qiáng)HBV活性的作用。Lin等[25]研究發(fā)現(xiàn)，機(jī)體感染HBV后可以激活單核、巨噬細(xì)胞，產(chǎn)生大量IL-6，有助于HBV感染和持續(xù)應(yīng)答，促進(jìn)HBV-DNA復(fù)制。本研究表明，IL-6可經(jīng)干預(yù)T細(xì)胞分布，推動HBV感染者乙型肝炎的進(jìn)展。IL-6與HBV-DNA復(fù)制情況密切相關(guān)，HBV感染后可以產(chǎn)生大量的IL-6，促進(jìn)HBV-DNA復(fù)制。

綜上所述，HBV感染者存在IL-6、T細(xì)胞水平異常改變，表現(xiàn)為CD3+、CD4+和CD4+/CD8+降低，CD8+、IL-6升高。T細(xì)胞及IL-6水平與疾病類型和HBV-DNA載量關(guān)系密切，說明乙型肝炎的進(jìn)展可能與肝細(xì)胞、免疫細(xì)胞、病毒間的相互作用有關(guān)。T細(xì)胞及IL-6水平的改變是影響乙型肝炎預(yù)后的重要因素之一。