離子色譜法測定楓糖漿中果葡糖漿

黃志強 梁世君 張倩瑤 董柳青

（浙江省蜂產(chǎn)品中心桐廬縣檢驗檢測中心，浙江桐廬 311500）

楓糖漿是加拿大著名特產(chǎn)，是由加拿大糖楓樹樹汁提煉而成的一種糖漿。楓糖漿主要成分為蔗糖，還含有豐富的蘋果酸、植物蛋白、礦物質(zhì)等物質(zhì)，其熱量低于蔗糖、果糖、玉米糖等糖類，所含的鈣、鎂和有機(jī)酸成分高于其他糖類，對由于營養(yǎng)不均衡引起的虛弱體質(zhì)具有一定滋補作用。同時，對養(yǎng)顏美容和減肥都有功效。楓糖漿產(chǎn)量較低，造價較高，所以市場上出現(xiàn)了許多楓糖漿仿制品。楓糖漿仿制品通常以玉米糖漿（即玉米淀粉先經(jīng)酸水解成葡萄糖，再經(jīng)酶法轉(zhuǎn)化成果葡糖漿，其味道和蜂蜜相似）為原料，加入一種香味接近于糖楓樹樹汁的“葫蘆巴內(nèi)酯”香精制成。所以檢測楓糖漿中果葡糖漿對楓糖漿是否摻假的鑒別具有現(xiàn)實意義。目前檢測果葡糖漿的方法主要有離子色譜法、穩(wěn)定類碳同位素法、薄層色譜法、高效液相色譜一四極桿/靜電場軌道阱高分辨率質(zhì)譜法等。其中同位素儀、高效液相色譜質(zhì)譜儀價格昂貴，不適用于基層實驗室；薄層色譜法操作復(fù)雜，耗時長；離子色譜法操作相對簡單、經(jīng)濟(jì)、快速，適用于基層實驗室。

本研究采用離子色譜法，用凝膠柱凈化去除果糖、葡萄糖，將寡糖富集后直接經(jīng)離子色譜-電化學(xué)檢測器檢測，是一種快速檢測楓糖漿中果葡糖漿的方法。

1 材料與方法

1.1 儀器與設(shè)備

ICS5000 離子色譜儀，配電化學(xué)檢測器，美國戴安公司；CarboPacPA200 離子色譜柱（3 mm×250 mm）、CarboPacPA200 保護(hù)柱（3 mm×50 mm），美國戴安公司；聚丙酰胺凝膠微球，粒徑45 μm～90 μm，分級分離 的相對分 子質(zhì)量范 圍100～1 800，德國普蘭德公司。

1.2 材料與試劑

楓糖塊、楓糖漿，購于淘寶、國外代購和機(jī)場免稅店。

水，18.2 MΩ/cm 的高純水；氫氧化鈉，優(yōu)級純，天津市祥瑞鑫化工科技有限公司；無水乙酸鈉，分析純，濟(jì)南蕭試化工有限公司。

1.3 試驗方法

1.3.1 試劑配制

麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液：分別精確稱取10.0 mg 麥芽糖、麥芽三糖、麥芽四糖、麥芽五糖、麥芽六糖、麥芽七糖的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，用純水溶解完全并定容至10 mL，配制成濃度為1.0 mg/mL 的儲備液，存于棕色瓶中，4 ℃條件下保存。

麥芽糖混合標(biāo)準(zhǔn)使用液：分別吸取0.10 mL 麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液，0.20 mL 麥芽三糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液，0.30 mL 麥芽四糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液，0.40 mL 麥芽五糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液，0.50 mL 麥芽六糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液，1.00 mL麥芽七糖標(biāo)準(zhǔn)儲備液，用純水定容至10 mL。保存在4 ℃條件下不超過15 d。

1.3.2 樣品前處理

凝膠層析柱：將聚丙酰胺凝膠加水煮沸15 min，冷卻至室溫裝入15 mm×300 mm 空柱管中并壓實，裝入的聚丙酰胺凝膠高度為100 mm，上端保持10 mm 以上的水層，避免凝膠柱干涸。

稱取固體楓糖漿塊樣品2.0 g 或楓糖漿5.0 g，用純水完全溶解并定容至50.0 mL，然后用孔徑0.22 μm 水性濾膜過濾備用。將準(zhǔn)備好的聚丙酰胺凝膠層析柱中的水放至凝膠表面，關(guān)閉下端流速閥，取2.0 mL 備用濾液，沿管壁慢慢加至層析柱中，打開流速閥，使液體流出，待液面至凝膠填料上表面時，加3.0 mL 純水沖洗管壁，繼續(xù)待液面至凝膠填料上表面時，再加入5.0 mL 純水沖洗凝膠柱，繼續(xù)待液面至凝膠填料上表面時，關(guān)閉流速閥，棄去3 次共10.0 mL 流出液。準(zhǔn)確加入2.0 mL純水，打開流速閥，用干凈的5 mL 塑料離心管，收集2.0 mL 流出液，混勻后作為待測樣品溶液，24 h 內(nèi)進(jìn)行測定。處理好樣品的凝膠柱用50 mL純水清洗，待液體流出后即可處理下一個樣品。

1.3.3 離子色譜條件

柱溫：30 ℃；淋洗液：A 為200 mmol/L 氫氧化鈉，200 mmol/L 無水乙酸鈉；B 為100%純水；洗脫條件：流速0.40 mL/min，等度洗脫（15%A+85%B）；檢測器：檢測池溫度30 ℃，檢測器用Au 工作電極和Ag-AgCl 參比電極，脈沖安培檢測；進(jìn)樣量：20 μL。

1.3.4 樣品測定

依次將麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)混合使用液、純楓糖漿陰性對照品、含5%果葡糖漿的楓糖漿陽性對照品的寡糖收集液注入離子色譜儀中，觀察離子色譜圖。

1.3.5 結(jié)果判定

對純楓糖漿陰性對照樣品和摻入5%果葡糖漿陽性對照樣品的寡糖譜圖進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)陰性對照和陽性對照之間的圖譜差異，并以此作為純楓糖漿中摻入果葡糖漿的判定標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的選擇

流動相流速、柱溫、檢測器溫度、洗脫程序參考國家標(biāo)準(zhǔn)GB/T 21533—2008 《蜂蜜中淀粉糖漿的測定》 中離子色譜法和梁世君等在流速0.40 mL/min，柱溫30 ℃、檢測器溫度30 ℃，等度洗脫(15%A+85%B)條件下測定麥芽糖標(biāo)準(zhǔn)混合液，分離效果好。因此，本文采用等度洗脫（15%A+85%B），得到的分離圖譜見圖1，以此圖譜作為樣品試驗的參照譜圖。

圖1 麥芽糖混標(biāo)圖譜

2.2 待測楓糖漿樣品的色譜分析

將純楓糖漿樣品陰性對照品、可能摻入糖漿的楓糖漿待測樣品以及摻入果葡糖漿的陽性對照品，按上述條件等度洗脫（15%A+85%B）檢測，對試驗的多種純楓糖漿樣品進(jìn)行色譜分析，純楓糖漿未檢出五糖以上寡糖。摻入果葡糖漿的楓糖漿樣品，在麥芽五糖和麥芽六糖中間和麥芽六糖值麥芽七糖中間呈現(xiàn)2 個典型的“指紋峰”P1 和P2，根據(jù)這2 個峰的出現(xiàn)即可判斷楓糖漿中摻入了果葡糖漿。

圖2 麥芽糖混標(biāo)、陽性對照、陰性對照圖譜

圖3 楓糖漿和楓糖塊樣品圖譜

2.3 待測樣品溶液有效期

將經(jīng)凝膠柱凈化處理后的楓糖漿陽性對照樣品待測溶液放入4 ℃冰箱冷藏24 h、48 h 后再分別進(jìn)行離子色譜分析，24 h 后色譜圖中P1 和P2 峰峰高和處理后既進(jìn)樣的峰高基本一致，48 h 后色譜圖中P1 和P2 峰峰高明顯降低。因此，待測樣品溶液需在24 h 內(nèi)完成離子色譜分析。

2.4 方法的檢測范圍

在楓糖漿陰性對照樣品中摻入1%果葡糖漿按照上述條件進(jìn)行色譜分析，色譜圖中依然明顯可見P1 和P2 峰?？紤]到摻入1%果葡糖漿實際意義不大，將1%果葡糖漿作為檢出限比較合適。用純果葡糖漿按上述條件進(jìn)行色譜分析，出現(xiàn)平頭峰，最終待測溶液稀釋50 倍后，可以呈現(xiàn)明顯P1 和P2 峰。所以當(dāng)待測樣品溶液色譜分析出現(xiàn)響應(yīng)值高，峰分離不好的情況下，必須經(jīng)稀釋才可以繼續(xù)分析。

2.4 實際樣品檢測

分別從國外超市、國外代購、機(jī)場免稅店直接購買和電商渠道購買楓糖漿樣品（該樣品均聲稱100%楓糖漿），總共購買代表性樣品20 批次，其中10 批楓糖漿塊，10 批液態(tài)楓糖漿。檢測結(jié)果見表1。

表1 樣品檢測結(jié)果

從表1 結(jié)果可以看出，楓糖漿果葡糖漿摻假的風(fēng)險比較小，而10 批次楓糖漿塊均檢測出果葡糖漿摻假指標(biāo)物，檢出率100%，有較大的果葡糖漿摻假風(fēng)險。因此，利用該法檢測楓糖漿中果葡糖漿具有很大的現(xiàn)實意義。

3 小 結(jié)

本法采用離子色譜法檢測楓糖漿中果葡糖漿，用凝膠柱凈化去除果糖、葡萄糖，采用流速0.40 mL/min，柱溫30 ℃，檢測器溫度30 ℃，等度洗脫對糖類進(jìn)行分離，對實際楓糖漿樣品進(jìn)行檢測，10 批次楓糖漿塊果葡糖漿檢出率為100%。該方法快速、方便，適用于楓糖漿中果葡糖漿的檢測。