ELISA與HPLC-MS檢測玉米中黃曲霉毒素B1的比較分析

陳 琛， 王炳彥， 鐘興文， 楊旭艷， 馬 丹， 戚 敏，孫照程， 陳 瑩， 孔凡虎， 華雪妃， 章雨竹， 陶琳麗*， 張 曦*

（1.云南農(nóng)業(yè)大學(xué)動物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，云南省動物營養(yǎng)與飼料重點實驗室，云南昆明 650201；2.云南省楚雄州牟定縣新橋鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，云南牟定 675501；3.大理白族自治州動物衛(wèi)生監(jiān)督所，云南大理 671000；4.云南省獸藥飼料監(jiān)測所，云南昆明 650201）

黃曲霉毒素（AFT）是黃曲霉和寄生曲霉產(chǎn)生的次生代謝產(chǎn)物，是一組有著類似結(jié)構(gòu)的化合物總稱。黃曲霉毒素B1（AFB1）是目前已知的致癌性最強的一種化學(xué)物質(zhì)（Iarc，2010），主要作用的靶器官是肝臟，對人和動物都能造成極大的損傷。玉米作為能量飼料原料供給動物，間接被人類食用，由于玉米中黃曲霉毒素污染普遍，且以AFB1為主，成為人們最關(guān)注的農(nóng)作物之一（高秀芬等，2011）。根據(jù)飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn) （GB 13078-2017）， 玉米中AFB1限量要求不超過50 μg/kg，但據(jù)相關(guān)文獻報道，我國飼料原料霉菌毒素污染超標(biāo)比例高達一半以上（程傳民等，2014）。因此加強對玉米中AFB1的監(jiān)測是飼料安全監(jiān)管部門每年的重點工作。

目前，國內(nèi)外檢測霉菌毒素的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）法（Oplatowska-Stachowlak等，2016）、薄層色譜（TLC）法（柳其芳，2006）、毛細管電泳（CE）法（王曉琳等，2015）、氣相色譜（GC）法與氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（GC-MS）法（馬曉宇和林英庭，2018）、高效液相色譜（HPLC）法（劉柱等，2014）與高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用 （HPLCMS）法 （殷秋妙等，2018），其中，ELISA 法和HPLC-MS法是檢測飼料中AFB1最常用的方法。ELISA法是一種把酶的高效催化作用與抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)有機結(jié)合起來的檢測技術(shù)，其操作快速便捷、靈敏度高、安全性高、污染少、干擾小。HPLC-MS法可同時對多種毒素進行定性和定量檢測，易于控制，定量準(zhǔn)確度高，適用于飼料中6種黃曲霉毒素的定性、定量檢測 （殷秋妙等，2018；王瑞國等，2015）。本實驗通過ELISA法和HPLC-MS法對玉米中AFB1含量進行測定比較，討論兩者之間的差異及相關(guān)性，為今后玉米中AFB1的檢測工作提供參考。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑 玉米，從多家飼料企業(yè)送檢的玉米樣品中取樣30份，用四分法縮減取200 g，用粉碎機粉碎后過40目篩，混勻裝入自封袋中備用；甲醇、乙酸、甲酸、乙腈，均為色譜純；氯化鉀，氯化鈉、磷酸二氫鉀、十二水合磷酸氫二鈉，吐溫-20、鹽酸、氫氧化鈉，均為分析純；蒸餾水和超純水；黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)品，純度≥97.0%，濃度為 20 μg/mL；玻璃纖維濾紙，直徑11 cm，孔徑1.5 μm；黃曲霉毒素B1/玉米赤霉烯酮/T-2毒素三合一免疫親和柱，北京華安麥科生物技術(shù)有限公司；ELISA試劑盒，北京龍科方舟生物工程有限公司。

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)中間液：根據(jù)使用需要，準(zhǔn)確吸取一定量的黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)溶液，用復(fù)溶液或玉米空白基質(zhì)液稀釋，分別配成濃度為1000 ng/mL的中間液1和100 ng/mL的中間液2，現(xiàn)配現(xiàn)用。

黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)工作液：分別吸取一定量的中間液2，用復(fù)溶液或玉米空白基質(zhì)液稀釋，分別配出兩組濃度為 0.5、10、25、50 ng/mL 的標(biāo)準(zhǔn)工作液，現(xiàn)配現(xiàn)用。

1.2 儀器與設(shè)備 AL104電子天平（METTLER TOLEDO）；300 g搖擺式高速萬能粉碎機（溫嶺市林大機械有限公司）；SHA-B恒溫振蕩器（常州智博瑞儀器制造有限公司）；GENIUS 3渦旋混勻器（IKA@VORTEX）；H2050R 高速冷凍離心機（Xiangyi Centrifuge Instrumen Co.,Ltd）；N-EVAP111氮吹儀 （Organomation Associates,Jnc）；SPE-12A 12孔固相萃取裝置 （上海啟前電子科技）；TSQ QUANTIVA高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜儀（Thermo Scientific）；KHB ST-360酶標(biāo)儀（上?？迫A實驗系統(tǒng)有限公司）。

1.3 實驗方法

1.3.1 酶聯(lián)免疫法 ELISA法是一種把酶的高效催化作用與抗原抗體的特異性免疫反應(yīng)有機結(jié)合起來的檢測技術(shù)。在本實驗中，ELISA法是按照GB/T 17480-2008《飼料中黃曲霉毒素B1的測定酶聯(lián)免疫吸附法》來檢測，其基本原理是利用抗原和抗體先結(jié)合到某固相載體表面，將標(biāo)準(zhǔn)溶液或待測樣品（含待測抗原和抗體）和酶標(biāo)抗原或抗體按一定程序與結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗體反應(yīng)，形成免疫復(fù)合物，反應(yīng)終止時，免疫復(fù)合物與待測物中抗原或抗體的量成一定比例關(guān)系，經(jīng)洗滌反應(yīng)液之后，再加入酶反應(yīng)底物，底物即被固相載體上的酶催化為有色產(chǎn)物，最后用目測法或儀器法通過與AFB1標(biāo)準(zhǔn)溶液比較判斷或計算試樣中AFB1的含量（肖樺等，2006）。結(jié)合本實驗所選用的AFB1定量檢測試劑盒，檢測同樣基于抗原抗體反應(yīng)，酶標(biāo)板微孔條上預(yù)包被AFB1抗體，加入校準(zhǔn)品/樣品，AFB1-HRP（黃曲霉毒素B1酶標(biāo)記物）后，校準(zhǔn)品/樣品中殘留的AFB1同AFB1-HRP競爭微空條上預(yù)包被抗體的抗原結(jié)合位點，因此結(jié)合在微孔條上的AFB1-HRP量與校準(zhǔn)品/樣品中殘留AFB1的濃度呈負相關(guān)，經(jīng)TMB底物顯色，樣品吸光值與其殘留的AFB1的含量呈負相關(guān)，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出樣品中AFB1的含量。

前處理：稱取（5±0.1）g粉碎后過篩的玉米樣品于離心管中，加入25 mL 70%甲醇溶液，充分振蕩提取3 min，靜置后取上清液4000 r/min離心5 min，向500 μL樣品稀釋液中加入離心后的上清液500 μL，取混勻液用試劑盒進行檢測。

檢測參數(shù)設(shè)置：樣品經(jīng)酶聯(lián)免疫試劑盒反應(yīng)后，立即用酶標(biāo)儀定量，即在450/630 nm雙波長下讀取吸光度值。

1.3.2 高效液相色譜—質(zhì)譜聯(lián)用法 HPLC-MS法是按照NY/T 2071-2011《飼料中黃曲霉毒素、玉米赤霉烯酮和T-2毒素的測定 液相色譜--串聯(lián)質(zhì)譜法》進行測定，采用色譜保留時間和質(zhì)譜碎片及其離子豐度比定性，外標(biāo)法定量。但在質(zhì)譜檢測中，必然存在干擾待測物質(zhì)離子化的物質(zhì)，也就是除了待測物本身其他存在的物質(zhì)都可能間接或直接引起待測物響應(yīng)，引發(fā)待測信號抑制或增強的現(xiàn)象，由此產(chǎn)生基質(zhì)效應(yīng)。引發(fā)基質(zhì)效應(yīng)的物質(zhì)包含生物樣品中的內(nèi)源性成分和樣品前處理過程中引入的外源性成分，意味著樣品本身、樣品基質(zhì)、樣品前處理過程，色譜條件和不同離子化模式都可能對檢測結(jié)果產(chǎn)生影響，這些影響是個十分復(fù)雜的過程（Matuszewski等，2003）。因此本實驗設(shè)計兩組用于外標(biāo)定量的標(biāo)準(zhǔn)曲線，一組選用和待測樣品同源的玉米做空白基質(zhì)加標(biāo)，過程相對復(fù)雜，成本較高；另一組直接采用復(fù)溶液加標(biāo)為純標(biāo)，相對簡單省時，成本較低；樣品按照農(nóng)業(yè)農(nóng)村部標(biāo)準(zhǔn)和免疫親和柱操作步驟進行前處理，分別使用兩條標(biāo)準(zhǔn)曲線外標(biāo)計算結(jié)果，與酶聯(lián)免疫法測出的結(jié)果相比較，討論幾者之間的差異及相關(guān)性，為今后玉米中AFB1的檢測工作提供參考。

前處理：稱取（5±0.1）g粉碎后過篩的玉米樣品于離心管中，加入25 mL提取液（80%乙腈-水溶液）提取，在恒溫振蕩器（200～300 r/min）上劇烈振蕩20 min，用高速離心機（400 r/min）離心5 min，取5 mL離心后的上清液加入35 mL稀釋液稀釋，混勻，用玻璃纖維濾紙過濾至澄清，取20 mL濾液過柱。取出接近室溫的免疫親和柱，完成親和柱與固相萃取裝置的連接，在親和柱上方連接裝有20 mL濾液的注射器針筒，調(diào)節(jié)固相萃取開關(guān)，使濾液以1～2滴/s的速度流出，待液體排干后，先用10 mL洗滌液洗滌一次，再用10 mL超純水洗滌一次，流速為2～3滴/s；待液體排干后，調(diào)節(jié)裝置開關(guān)關(guān)閉，在親和柱內(nèi)加入2 mL洗脫液，靜置3 min，然后以1滴/s速度洗脫，收集洗脫液，在50℃的氮氣下吹干洗脫液，用1 mL甲酸乙腈溶液復(fù)溶，過0.22 μm有機濾膜，裝瓶上機。

檢測參數(shù)設(shè)置：色譜柱：C18柱（長度50 mm，內(nèi)徑 1.9 μm）；流動相：0.1%的甲酸溶液和 1∶1 的甲醇乙腈溶液；流速：0.3 mL/min；柱溫：33 ℃；進樣量：5 μL；質(zhì)譜檢測器。

1.4 統(tǒng)計與分析

1.4.1 ELISA法數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel軟件進行整理，根據(jù)公式計算樣品的百分吸光率，以校準(zhǔn)品的百分吸光率為縱坐標(biāo)，以AFB1校準(zhǔn)品含量（μg/kg）的對數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣品的百分吸光率帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出所對應(yīng)的樣品含量。根據(jù)選用的試劑盒說明書，結(jié)果判定為：若檢測結(jié)果小于2 ppb應(yīng)報告為小于2 ppb，若結(jié)果大于2 ppb小于50 ppb則報告實際定量結(jié)果，若檢測結(jié)果大于50 ppb即報告大于50 ppb。

式中：B為校準(zhǔn)品或樣品的平均吸光度值；B0為0 μg/mL標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值。

1.4.2 HPLC-MS法數(shù)據(jù)處理 所有數(shù)據(jù)采用Microsoft Excel軟件進行整理，基質(zhì)加標(biāo)組標(biāo)準(zhǔn)曲線用玉米基質(zhì)液 （空白玉米經(jīng)前處理復(fù)溶所得）稀釋AFB1標(biāo)準(zhǔn)品配制上機標(biāo)準(zhǔn)點，以上機標(biāo)準(zhǔn)點濃度為橫坐標(biāo)，上機測出的峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，根據(jù)樣品上機后的相對離子豐度比是否在最大允許偏差范圍內(nèi)，定性判定樣品中是否存在AFB1，如不存在，則判定為未檢出，如存在，則將該峰的峰面積帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線計算得出樣品上機濃度（ng/mL），根據(jù)前處理的稀釋過程，計算玉米中AFB1的含量；純標(biāo)組標(biāo)準(zhǔn)曲線用復(fù)溶液直接稀釋AFB1標(biāo)準(zhǔn)品配制上機標(biāo)準(zhǔn)點，其余處理同基質(zhì)加標(biāo)組。樣品中黃曲霉毒素B1的含量（Xi）以質(zhì)量分數(shù)表示（μg/kg），用下列公式計算：

式中：Ci為樣品上機濃度，ng/mL；V1為提取液體積，mL；V2為待稀釋濾液加稀釋液之后的體積，mL；V3為復(fù)溶體積，mL；V4為待稀釋的濾液體積，mL；V5為待上樣檢測的濾液體積，mL；m 為樣品質(zhì)量，g。

2 結(jié)果與分析

2.1 HPLC-MS兩組標(biāo)準(zhǔn)曲線的結(jié)果 如圖1所示，當(dāng)AFB1上機濃度為30.89 ng/mL，即樣品含量為61.78 μg/kg時，兩條曲線峰面積相等。當(dāng)AFB1上機濃度＜30.89 ng/mL， 即樣品含量＜61.78 μg/kg時，在同一上機濃度下，純標(biāo)組的峰面積＞基質(zhì)加標(biāo)組的峰面積；當(dāng)上機濃度＞30.89 ng/mL，即樣品含量＞61.78 μg/kg時，純標(biāo)組的峰面積＜基質(zhì)加標(biāo)組的峰面積。

圖1 玉米黃曲霉毒素B1標(biāo)準(zhǔn)曲線

2.2 玉米中黃曲霉毒素B1含量的測定結(jié)果 由表1可以看出，使用ELISA和HPLC-MS檢測同一份樣品，1～12號樣品的AFB1含量均低于酶聯(lián)檢出限（＜2 μg/kg），使用 HPLC-MS 同樣未檢出（＜1 μg/kg）。 13 號玉米使用 HPLC-MS 未檢出 AFB1，ELISA檢出含量為2.2 μg/kg，十分接近酶聯(lián)檢出限（2 μg/kg）。而14～17號玉米檢測結(jié)果具有相同特征，用ELISA檢測都低于酶聯(lián)檢出限（＜2 μg/kg），14、16、17號玉米用HPLC-MS檢測，在純標(biāo)組曲線上得到的結(jié)果均低于液質(zhì)聯(lián)用檢出限（＜1 μg/kg），但都能出峰，且樣品中AFB1保留時間與標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時間的偏差不超過標(biāo)準(zhǔn)溶液保留時間的2.5%，定性離子豐度比與濃度接近的標(biāo)準(zhǔn)溶液中對應(yīng)的定性離子豐度比偏差亦在允許范圍內(nèi)，可定性判斷出峰物質(zhì)為AFB1，但兩組曲線下的HPLC-MS檢測結(jié)果又具有差異，在純標(biāo)組標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的結(jié)果基本小于2 μg/kg，與酶聯(lián)檢出結(jié)果十分符合，而在基質(zhì)液加標(biāo)組標(biāo)準(zhǔn)曲線上得到的結(jié)果為4.87～5.72 μg/kg，高于酶聯(lián)檢測結(jié)果的4～13倍。18、19號玉米用ELISA檢出的結(jié)果高于酶聯(lián)檢出限1 μg/kg左右，但兩組曲線下的HPLCMS檢測結(jié)果特征與14～17號玉米結(jié)果類似。20～25號玉米的檢測結(jié)果雖有差異，但總體特征相符，具體表現(xiàn)為用ELISA檢測出的AFB1含量與HPLC-MS（純標(biāo)組）檢測結(jié)果的偏差很小，平均偏差 為 0.93 μg/kg， 最 小 偏 差 為 0.42 μg/kg； 用HPLC-MS（玉米基質(zhì)液加標(biāo)組）檢出的AFB1含量平均高于用ELISA或HPLC-MS（純標(biāo)組）檢出結(jié)果的2.2倍。26號和27號玉米在兩種HPLC-MS檢測曲線下的結(jié)果比較接近，偏差為1～3 μg/kg，高于用ELISA檢出結(jié)果的2～2.5倍。28～30號玉米樣品不論使用ELISA還是HPLC-MS檢出的結(jié)果都高于曲線范圍，且都超過飼料衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)中AFB1的限量要求，均為AFB1超標(biāo)樣品。

表1玉米中AFB1檢測結(jié)果對比表 μg/kg

總體來說，30份樣品用ELISA檢測或HPLC-MS檢測都能判定玉米中AFB1含量是否超標(biāo)，且判定結(jié)果一致，但具體檢出量存在差異。樣品中AFB1含量低于ELISA檢出限的，基本也低于HPLC-MS檢出限；低于HPLC-MS檢出限但能出峰，且峰定性判定為AFB1的，AFB1測定結(jié)果ELISA≈HPLC-MS（純標(biāo)組）。當(dāng)樣品中AFB1含量為2～6 μg/kg時，測定結(jié)果 HPLCMS（純標(biāo)組）＜ELISA＜HPLC-MS（玉米基質(zhì)液加標(biāo)組），且HPLC-MS（玉米基質(zhì)液加標(biāo)組）測定值約為ELISA和HPLC-MS（純標(biāo)組）的2～13倍；當(dāng)樣品中 AFB1含量＞11 μg/kg時，測定結(jié)果ELISA＜HPLC-MS（純標(biāo)組）≈HPLC-MS（玉米基質(zhì)液加標(biāo)組）。當(dāng)樣品中AFB1含量用ELISA檢測高于限量要求的，用HPLC-MS檢測也同樣超出限量要求，且HPLC-MS（純標(biāo)組）的測定結(jié)果均最大。

3 討論

本實驗中30份玉米樣品，用ELISA檢測AFB1的檢出率為 40%，HPLC-MS的檢出率為57%，兩種方法檢測AFB1超標(biāo)率均為10%，相較謝文梅等（2017）測得2017年1～6月全國各地玉米AFB1檢出率88.89%，此次檢測的玉米樣品受AFB1污染較輕，只有個別玉米含量超標(biāo)，與黃俊恒和黃廣明 （2018）2017年檢出華中地區(qū)玉米樣品AFB1超標(biāo)率10.5%相吻合，說明近年來玉米相較其他谷物受黃曲霉毒素B1污染趨勢有所下降，但仍然屬于易被污染范疇（謝文梅等，2017）。當(dāng)AFB1測定結(jié)果在限量要求內(nèi)時（＜50 μg/kg），用 ELISA檢測的結(jié)果均小于HPLC-MS（玉米基質(zhì)液加標(biāo)組）測定結(jié)果，HPLC-MS（純標(biāo)組）測定結(jié)果也均小于HPLC-MS（玉米基質(zhì)液加標(biāo)組）測定結(jié)果；當(dāng)HPLC-MS測定值在AFB1限量要求范圍內(nèi)時（＜50 μg/kg），在同一上機濃度下，基質(zhì)加標(biāo)組的峰面積均小于純標(biāo)組的峰面積，因此基質(zhì)的存在可能導(dǎo)致離子減弱效應(yīng)，引起較低的響應(yīng)信號，表現(xiàn)為峰面積較小 （徐炎炎等，2017）。所以在本實驗中，當(dāng)玉米中AFB1含量未超過61.78 μg/kg時，可對比得出玉米基質(zhì)對AFB1出峰面積的影響為基質(zhì)減弱效應(yīng)，但在基質(zhì)加標(biāo)曲線上外標(biāo)定量得出的樣品含量平均高于純標(biāo)曲線的3.6 μg/kg左右，這可能由于基質(zhì)玉米本底含有少量的待測物所致；反之，當(dāng)玉米中AFB1含量超過61.78 μg/kg時，則表現(xiàn)為基質(zhì)增強效應(yīng)。

在本實驗中，玉米AFB1含量在限量范圍內(nèi)時，ELISA陽性判定結(jié)果與HPLC-MS（純標(biāo)組）基本一致，假陽性為0，因此即當(dāng)檢測樣品數(shù)量眾多，涉及范圍或地域廣時，可用ELISA進行初篩，節(jié)約時間和成本，再用HPLC-MS對陽性樣品和超標(biāo)樣品進行復(fù)檢，或者用HPLC-MS對不同樣品含量分布范圍內(nèi)的樣品進行抽檢，驗證ELISA測定結(jié)果；但ELISA作為一種快速篩選手段，行標(biāo)或者國標(biāo)很少，因此給判定結(jié)果帶來不確定性，往往在檢測過程中易出現(xiàn)假陽性，若要降低假陽性，除了可適當(dāng)增大稀釋倍數(shù)以外，使用其他檢測手段復(fù)檢也必不可少（賈衛(wèi)昌和朱寅，2015；何方洋等，2015）。使用HPLC-MS法定性定量檢測玉米AFB1更加準(zhǔn)確，把色譜的高分離度、高靈敏性和質(zhì)譜檢測器的高選擇性、高靈敏性相結(jié)合（張明等，2018），可對ELISA檢測結(jié)果進行驗證和復(fù)檢。當(dāng)ELISA測定結(jié)果＜2 μg/kg時，HPLC-MS可選用純標(biāo)曲線進行驗證；當(dāng) ELISA測定結(jié)果為 2～6 μg/kg時，HPLC-MS選用純標(biāo)曲線得出的結(jié)果十分接近ELISA，選用基質(zhì)液加標(biāo)曲線得出的結(jié)果是前兩者的2～13倍；當(dāng)ELISA測定結(jié)果＞11 μg/kg時，HPLC-MS選用純標(biāo)曲線或基質(zhì)液加標(biāo)曲線都可以，兩者都是ELISA測定結(jié)果的1～2倍。在樣品中AFB1含量＜61.78 μg/kg時，若考慮待測樣品量多，節(jié)約成本，縮短前處理時間等因素，運用HPLC-MS法可實際選用配制純標(biāo)曲線，定量得出的結(jié)果加上3.6 μg/kg即可大致相關(guān)為基質(zhì)加標(biāo)曲線得出的樣品含量。

目前，ELISA法和HPLC-MS法都是檢測樣品中AFB1含量的常用方法。ELISA法基于抗原抗體特異性反應(yīng)，操作簡便快速，特異性強，與HPLCMS法相比，簡化了樣品前處理和上機過程，非常適用于玉米樣品中黃曲霉毒素B1的大量初篩。HPLC-MS法采用免疫親和柱純化，同樣基于抗原抗體的特異性結(jié)合，雖檢測靈敏度高，準(zhǔn)確性好，但前處理較為復(fù)雜，檢測時間較長，經(jīng)濟成本較高，親和柱有可能出現(xiàn)洗脫不完全的情況，且黃曲霉毒素質(zhì)量極輕，復(fù)溶后使用氮氣吹干時容易把毒素吹飛，操作者對氮氣吹干程度的把控也存在差異，因此HPLC-MS法適用于對ELISA的驗證和復(fù)檢。

4 結(jié)論

本研究利用酶聯(lián)免疫（ELISA）法和高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（HPLC-MS）法測定玉米樣品中AFB1含量，得到兩種方法在檢測玉米中AFB1含量為0～50 μg/kg和大于 50 μg/kg之間的相關(guān)性，ELISA對AFB1的檢出判定和HPLC-MS基本一致。當(dāng)配制HPLC-MS標(biāo)準(zhǔn)曲線時，可根據(jù)情況選用純標(biāo)曲線或基質(zhì)液加標(biāo)曲線外標(biāo)定量。在實際工作中，如果掌握了兩種方法之間的差異性和相關(guān)性，就可互補兩者之間的檢測判定，提升檢測效率和準(zhǔn)確率，同時為準(zhǔn)確定量玉米中黃曲霉毒素B1含量提供數(shù)據(jù)參考。