北疆某規(guī)?；i場偽狂犬病野毒感染的凈化

高建鵬 ,蒲敬偉 ,武 磊 ,袁立崗 ,齊亞銀

(1.石河子大學動物科技學院,新疆石河子832000 ;2.新疆生產建設兵團農十二師畜牧獸醫(yī)工作站,新疆烏魯木齊830009 ;3.新疆克拉瑪依瑞恒畜牧開發(fā)有限公司,新疆克拉瑪依 834000)

偽狂犬病是由偽狂犬病病毒(PRV)引起的豬和多種動物的一種急性傳染性疾病,分布于世界各地。病原為皰疹病毒科、豬皰疹病毒屬的偽狂犬病病毒(PRV)。豬是本病的主要宿主和傳染源,健康豬與病豬、帶毒豬直接接觸可感染本病。妊娠母豬感染本病毒通常引起流產、木乃伊胎、死胎和產弱仔;初生仔豬則出現(xiàn)神經癥狀,感染率和死亡率可達100%[1];成年豬感染后多耐過,不發(fā)病呈隱性感染,可造成長期帶毒排毒,成為最危險的傳染源,從而嚴重影響規(guī)?；i場的經濟效益。

在流行病學方面,帶毒豬和帶毒鼠類為偽狂犬病重要傳染源,豬是本病毒的惟一自然宿主,無論是病豬、隱性感染豬或是康復豬,均為長期帶毒者。因此感染豬偽狂犬病野毒的豬將終生帶毒,并在豬場中作為傳播源不斷排毒,擴大蔓延趨勢。另外,該病毒會破壞機體免疫系統(tǒng),干擾著其他免疫抗體的產生,容易引起其他傳染病的繼發(fā)。

在該病的凈化方面,美國和其他一些主要地區(qū)是偽狂犬病流行的國家和地區(qū)[2],將gE 蛋白基因缺失疫苗和gE 蛋白-ELISA 檢測技術相結合,在豬場偽狂犬病的凈化中已經獲得了良好的效果。但在我國不同省份,偽狂犬病野毒仍然是危害養(yǎng)豬業(yè)的重要因素之一[3],防治壓力較大。

為向養(yǎng)殖戶提供一套合理的凈化方案,我們對該豬場進行一系列現(xiàn)場流行病學調查,包括飼養(yǎng)管理措施、引種、配種、疾病的免疫預防、藥物保健等。對豬場的仔豬、母豬、育肥豬和公豬進行了血清野毒抗體檢測,根據其檢測結果并綜合豬場各種情況,制定出一套合理的防治措施與凈化程序。經半年的凈化再次進行檢測,結果表明,取得了良好的凈化效果。

1 材料與試劑

1.1 豬場規(guī)模 該豬場在統(tǒng)計時存欄基礎母豬約800 頭,其中經產母豬313 頭,后備種豬285 頭,種公豬30 頭。

1.2 發(fā)病情況 2016 年5 -7 月,北疆某規(guī)?；i場妊娠母豬發(fā)生較為集中的流產現(xiàn)象,流產率達23%;哺乳仔豬出現(xiàn)腹瀉、震顫和運動失調等癥狀,且大量死亡,尤其是1 周齡仔豬,死亡率高達90%;育肥豬容易受常見病影響,治療效果差且病死率在20%以上。

1.3 血樣采集及血清分離 血清:本實驗室凈化前采集血清210 份,凈化后采集血清182 份。具體方法為使用一次性采血器在豬前腔靜脈采集血液樣品3～5 mL,室溫靜置,待血清自然析出或離心后將其移至1.5 mL 離心管內,并按照不同階段對其編號,后置于-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.4 診斷試劑 豬偽狂犬病病毒gE 蛋白ELISA抗體檢測試劑盒,生產批號:160605,由武漢科前生物制品有限責任公司提供。

2 試驗方法

2.1 試驗方法 按照偽狂犬病病毒gE 蛋白ELISA抗體檢測試劑盒使用說明書(阻斷法)進行操作。

2.2 免疫程序制定 根據抗體檢測結果,對公豬采取“檢疫+淘汰+免疫”的方法,檢疫以后將陽性公豬全部淘汰,對陰性豬進行免疫接種,避免野毒通過精液方式傳播;對母豬通過“疫苗免疫+藥物保健”的方式對豬群中的陽性母豬逐步淘汰,將豬場的損失降到最低。

2.3 免疫及保健方案 進行疫苗毒株的更換免疫,將Bartha-K61 株更換為HB98 株,對舊的免疫程序進行適當調整,同時加強豬群保健工作。進行藥物保健,在飼料中加入芪黃素0.4 kg/t,生泰藍1 kg/t,天然康0.4 kg/t。通過疫苗免疫和輔助性的藥物對豬群的保健措施,達到凈化的目的。

3 結果與分析

3.1 凈化前血清檢測結果 凈化前血清gE-ELISA檢測結果見表1。

由檢測結果可知,該豬場的PRV 野毒gE 抗體陽性血清樣品共56 份,抗體總陽性率為26.67%(56/210)。其中,妊娠母豬的抗體陽性率最高(33.33%),其次是哺乳母豬(31.15%)、哺乳仔豬(29.17%)、公豬(26.67%)、保育仔豬(25.00%)、育肥豬(16.67%)、后備母豬(13.33%)。

表1 偽狂犬病野毒凈化前gE-ELISA 抗體檢測結果

3.2 制定免疫程序 根據該豬場偽狂犬病野毒感染的實際情況以及之前舊免疫程序,我們對其偽狂犬病免疫程序進行了調整,具體程序見表2。值得注意的是,在執(zhí)行新免疫程序前,必須淘汰偽狂犬病野毒感染的陽性公豬。

表2 偽狂犬病新舊免疫程序

3.3 凈化后偽狂犬病發(fā)病情況 從臨床狀況來看,各個階段的病豬總體數量大幅度減少,豬場基本無流產的妊娠母豬;排除其他因素導致的仔豬死亡,仔豬存活率在90%以上;育肥豬的生長速度明顯加快,出欄時間縮短,抵抗常見疾病的能力也大大提高。

3.4 凈化后血清檢測結果 凈化后血清gE -ELISA 檢測結果見表3。

該規(guī)?；i場執(zhí)行凈化方案半年以后,采集該場各個階段的豬血清共182 份,經過PRV 野毒gE抗體檢測,有13 份血清為抗體陽性,抗體總陽性率為7.14%(13/182)。

表3 偽狂犬病野毒凈化后gE-ELISA 抗體檢測結果

表4 偽狂犬病野毒凈化前后陽性率對比結果

將兩次檢測結果對比發(fā)現(xiàn),偽狂犬病野毒陽性率從凈化前的26.67%下降到7.14%;對各個階段的豬陽性率進行對比發(fā)現(xiàn),不同階段的豬陽性率均呈下降趨勢。由此分析可初步說明上述凈化方案對于該豬場的偽狂犬病野毒感染起到了良好的凈化效果(表4)。

4 討論

在2011 年以前,我國普遍應用疫苗預防豬偽狂犬病,控制較好,發(fā)病率較低,總體控制較好。但從2011 年起,由于各種原因,每年我國都有不同的省市大面積暴發(fā)豬偽狂犬病,鄧仕偉等[4]報道,2014年5 月,該病甚至在全國豬場大暴發(fā)。

在此次凈化后通過血清學的檢測,結果顯示,該場偽狂犬病野毒感染呈下降趨勢。近年來許多學者也對不同地區(qū)的PRV 凈化效果進行了統(tǒng)計分析,劉增再[5]等在2012 -2014 年對長沙某規(guī)?；i場偽狂犬病凈化進行分析,野毒感染率從33.6%降至4.46%;齊向濤[6]等對北疆地區(qū)3 個規(guī)?；i場偽狂犬病的凈化中表明,偽狂犬病野毒陽性率從32.8%下降到9.03%;王釗哲[7]等連續(xù)3 年對云南72 家規(guī)?；i場進行偽狂犬病凈化,感染率從24.73%下降到2.69%。與其他學者的報道相比,本次偽狂犬病凈化工作取得了較明顯的效果,順利完成了預期的凈化目標。

任何措施必須以實際情況為基礎進行制定。鐘瀾等[8]在偽狂犬病凈化中建議不能采取“一刀切”的方法,因為該方法嚴重影響豬場正常的生產;何啟蓋等[9]在豬場偽狂犬病野毒感染的調查與評估中對gE 抗體陽性率在20%～30%的豬場采取“部分清群”的措施。在本次凈化中對該豬場gE 陽性率初測后發(fā)現(xiàn)其陽性率為26.67%,因此,我們結合其他學者所做工作并根據豬場的疫苗免疫等情況,制定了針對性措施,在最大程度上減小了對豬場的影響。

事實證明,豬群進行免疫接種,是預防本病最有效的措施之一,而不同的疫苗株系的免疫效果可能有所不同。在前期調查發(fā)現(xiàn),此豬場所使用的偽狂犬病疫苗是Bartha -K61 株,但對豬群的保護效果不甚理想。因此,我們建議其使用HB98 株進行免疫,結果證明,免疫效果有了很大的改善。另外,不同豬場有不同的免疫模式,有的豬場進行“活苗+死苗”的免疫方式,此種免疫方法可使兩種在一定程度上互相彌補,既提高了安全性,又保證了免疫原性。但此方式不能完全解決臨床癥狀與潛伏感染等問題,更不能將疫苗和野毒進行區(qū)分。目前,多數豬場采用基因缺失疫苗,因此,筆者建議使用偽狂犬病基因缺失疫苗為好。

在生產中預防疾病發(fā)生工作必不可少,而提高豬群的免疫抵抗力是日常工作很重要的一部分。仇微紅[10]等在探討重要在體外抵抗偽狂犬病病毒作用時發(fā)現(xiàn),黃芪具有很強的抗吸附作用,可能是其效成分被吸收后可增強細胞免疫力,從而可以抵抗偽狂犬病病毒的入侵;仇微紅[11]等選取5 種清熱類中藥探討其體外抗偽狂犬病病毒效果時也發(fā)現(xiàn),板藍根無論在抑制病毒增殖、抗病毒吸附還是直接殺滅作用中均有較好的效果;王林青[12]等在進行金銀花、山銀花黃酮類提取物體外抗偽狂犬病病毒作用研究中發(fā)現(xiàn),此類物質對偽狂犬病病毒具有明顯的阻斷、抑制與中和作用。因此,在進行疫苗免疫的同時我們選取了生泰藍、天然康與芪黃素等中藥保健制劑,加強豬群免疫力,使豬群抵抗偽狂犬病野毒感染的能力有了明顯的提高。

當然,想要徹底凈化豬場偽狂犬病,還需要從更多的方面著手,比如堅持自繁自養(yǎng)、強化飼養(yǎng)管理,做好豬群、豬舍、人員、車輛等消毒工作,控制傳播媒介等。該場凈化半年后效果顯著,繼續(xù)堅持,相信豬群將會徹底凈化偽狂犬病,為其他豬場做好示范。