不同加工方法對女貞子中特女貞苷含量的影響

劉喜玲，趙淑敏，劉紅莉，曹望第

（陜西省商洛市藥品檢驗所，陜西 商洛 726000）

女貞子為木犀科植物女貞Ligustrum lucidumAit．的干燥成熟果實，具有滋補肝腎、明目烏發(fā)之功效，用于治療肝腎陰虛、眩暈耳鳴、腰膝酸軟、須發(fā)早白、目暗不明、內(nèi)熱消渴、骨蒸潮熱[1]。早期發(fā)現(xiàn)的主要活性成分為以脂溶性的齊墩果酸、熊果酸等為代表的五環(huán)三萜類化合物[2-3]。近年來，陸續(xù)分離得到了水溶性的紅景天苷和裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物，包括女貞酸、女貞苷、新女貞苷、特女貞苷和女貞苦苷等，具有較強的生理活性。對于女貞子的質(zhì)量分析，早期以測定齊墩果酸和熊果酸的含量為主，近年來對紅景天苷和裂環(huán)環(huán)烯醚萜苷類化合物進(jìn)行了定量分析[4-5]。特女貞苷可抗炎抗菌，降血糖，調(diào)血脂，抗衰老，對高糖刺激的腎小球系膜細(xì)胞凋亡具有保護(hù)作用[6]。以往在中藥材的生產(chǎn)和產(chǎn)地加工過程中，往往只注重中藥材的產(chǎn)量、效益和藥材的外形質(zhì)量，而對藥材有效成分的積累動態(tài)和藥材的內(nèi)在品質(zhì)重視不夠[7-9]。本研究中采用高效液相色譜法測定女貞子的特征性成分特女貞苷的含量[10-15]，建立最佳加工方法。現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1．1 儀器

LC-20A型高效液相色譜儀（日本島津公司）；FA1104型電子天平（上海精密科學(xué)儀器有限公司）；FW-200D型高速萬能粉碎機(jī)（天津鑫博得儀器有限公司）；加熱回流裝置（實驗室自行組裝）；1HP-10-H型試驗用超純水機(jī)（重慶力德高端水處理設(shè)備研發(fā)有限公司）。

1．2 試藥

特女貞苷對照品（中國食品藥品檢定研究院，供含量測定用，含量為96．4%，批號為111926-201203）；甲醇（色譜純，Sigma-Aldrich公司，批號為34851-4L）；乙醇（分析純，500 mL，天津市天力化學(xué)試劑有限公司）；水為自制純化水；試驗所用女貞子藥材于2016年冬采集于商洛市商州區(qū)，經(jīng)陜西省商洛市藥品檢驗所曹望第主任藥師鑒定為木犀科植物L(fēng)igustrumlucidumAit．。

2 方法與結(jié)果

2．1 樣品加工方法

將成熟的女貞子除去枝葉，混勻，即得樣品。

烘干法：將采摘的女貞子在105℃下直接烘干；陰干法：將采摘的女貞子在室溫下放置2個月左右自然陰干；曬干法：將采摘的女貞子在室外陽光下晾曬15 d左右；蒸后曬干法：將采摘的女貞子蒸不同時間后，經(jīng)過曬干處理；燙后曬干法：用沸水將采摘的女貞子燙不同時間后，經(jīng)過曬干處理。

取不同加工方法處理好的樣品，經(jīng)超微粉碎（過3號篩），制成9種樣品，粉末2 g，精密稱定，按2015年版《中國藥典（四部）》通則0832第二法水分測定法（烘干法）測定水分。詳見表1。

表1 女貞子不同加工法加工的試驗樣品的水分含量（n=2）

2．2 特女貞苷含量測定

2．2．1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗[1]

色譜柱：Kromasil C18柱（250 mm×4．6 mm，5μm）；檢測波長：224 nm；流動相：甲醇-水（40∶60，V∶V）；流速：1．0 mL／min；柱溫：35℃。理論板數(shù)按特女貞苷峰計應(yīng)不低于4 000，在此色譜條件下，特女貞苷與其他組分峰均達(dá)到基線分離。詳見圖1。

圖1 高效液相色譜圖

2．2．2 溶液制備

對照品溶液：取特女貞苷對照品8．5 mg，精密稱定，置50 mL容量瓶中，加入甲醇溶解，并制成每1 mL含0．17 mg的溶液，即得。

供試品溶液：取2．1項下不同加工方法處理好的樣品0．5 g粉碎（過3號篩），精密稱定，置具塞錐形瓶中精密加入稀乙醇50 mL，稱定質(zhì)量，加熱回流1 h，放冷，再稱定質(zhì)量，用稀乙醇補足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2．2．3 方法學(xué)考察

線性關(guān)系考察：精密量取特女貞苷對照品溶液，分別取0．5，1．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0，20．0μL，以進(jìn)樣量（X）為橫坐標(biāo)、峰面積（Y）為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程Y=808．74X-31．272，r=0．999 8（n=8）。結(jié)果表明，特女貞苷進(jìn)樣量在0．085～3．400μg范圍內(nèi)與峰面積線性關(guān)系良好。

精密度試驗：精密量取特女貞苷對照品溶液10μL，按擬訂色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次，測定峰面積。結(jié)果的RSD為0．32%（n=6），表明儀器精密度良好。

穩(wěn)定性試驗：取同一供試品溶液，按擬訂色譜條件分別于0，2，4，8，12 h時測定。結(jié)果的RSD為1．31%（n=6），表明供試品溶液在12 h內(nèi)穩(wěn)定性良好。

重復(fù)性試驗：取同一處理方法的樣品6份，按2．3．2項下方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL測定。結(jié)果的RSD為0．75%（n=6），表明方法重復(fù)性良好。

加樣回收試驗：精密稱定已知含量的樣品6份（質(zhì)量濃度為85．28μg／mL），各0．25 g，精密量取質(zhì)量濃度為0．85 g／L的特女貞苷對照品溶液5 mL，分別加入上述6份樣品中，按擬訂色譜條件進(jìn)樣10μL，測定含量，以干燥品計算回收率。結(jié)果見表2。

表2 特女貞苷加樣回收試驗結(jié)果（n=6）

2．2．4 樣品含量測定

按2．1項下樣品處理方法，處理9種不同樣品后，按2．3．2項下方法制備供試品溶液，按擬訂色譜條件分別進(jìn)樣2次，每次10μL，測定峰面積，按照干燥品計算含量。結(jié)果加工方法1～9的特女貞苷含量分別為0．90%，1．23%，0．94%，1．51%，1．77%，1．59%，1．65%，1．84%，1．85%。

3 討論

本研究為探究性試驗，通過考察不同的加工方法對女貞子中特女貞苷含量的影響，對2015年版《中國藥典（一部）》中規(guī)定的女貞子加工方法（稍蒸或置沸水中略燙后干燥，或直接干燥）進(jìn)行比較，結(jié)果表明，不同加工方法對女貞子中特女貞苷含量有顯著影響。

比較不同加工方法對女貞子中特女貞苷含量的測定結(jié)果，特女貞苷的含量依次為燙后干燥法＞蒸后干燥法＞陰干法＞曬干法＞烘干法；蒸10 min比蒸5 min和蒸20 min后干燥的女貞子中特女貞苷含量高；置沸水中燙5 min和燙10 min比燙2 min后干燥的女貞子中特女貞苷含量高，隨著燙的時間的延長，燙5 min和燙10 min處理后，女貞子中特女貞苷的含量增長不大，因而宜采用燙后干燥的方法進(jìn)行產(chǎn)地加工。因此，最佳產(chǎn)地加工方法是將女貞子置沸水中燙5 min后曬干處理。

特女貞苷是女貞子中的專屬成分，其藥理活性明確，可作為女貞子藥材質(zhì)量檢驗的指標(biāo)性成分。本研究中建立的女貞子的不同加工處理方法對女貞子中特女貞苷的含量提高起到了很好的指導(dǎo)意義，對于女貞子藥材的質(zhì)量提升具有一定參考價值。