• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    楓糖尿癥患兒基因突變5例分析

    2019-05-31 05:43:52宋東坡陳曉英呂亞囡王偉青李文杰
    山東醫(yī)藥 2019年13期
    關(guān)鍵詞:雜合戊酸外顯子

    宋東坡,陳曉英,呂亞囡,王偉青,李文杰

    (青島市婦女兒童醫(yī)院,山東青島266034)

    楓糖尿癥(MSUD)是由支鏈酮酸脫氫酶復(fù)合體(BCKD)缺乏引起的一種罕見常染色體隱性遺傳病。BCKD主要由支鏈酮酸脫氫酶異聚體(E1)、二氫硫辛酰胺支鏈?;D(zhuǎn)移酶(E2)和二氫硫辛酰胺脫氫酶(E3)組成。其中E1由兩個E1α和兩個E1β亞單位組成。E1α亞單位由BCKDHA基因編碼合成,E1β亞單位由BCKDHB基因編碼合成。E2由DBT基因編碼合成,E3由DLD基因編碼合成。MSUD臨床罕見且病死率極高。本研究分析2014年8月~2017年4月收治的5例MSUD患兒的遺傳學(xué)病因,首次報道位點的致病性,同時初步討論突變類型與臨床表現(xiàn)的相關(guān)性。

    1 資料與方法

    1.1 臨床資料 患兒1(P1),男,36周+4,順產(chǎn),出生體質(zhì)量2.55 kg,出生7 d發(fā)病,表現(xiàn)為吃奶差,反應(yīng)性差;血串聯(lián)質(zhì)譜(MSMS):總亮氨酸(LEU+ILE+PRO-OH) 1 609.43 μmol/L,(LEU+ILE+PRO-OH)/PHE 32.11,纈氨酸(VAL) 28.16 μmol/L;未行尿液串聯(lián)質(zhì)譜(GC-MS)檢測;于2歲1個月死亡?;純?(P2),男,40周+3,順產(chǎn),出生體質(zhì)量3.08 kg,出生4 d發(fā)病,表現(xiàn)為嗜睡,嗆奶,反應(yīng)性差;血MSMS:LEU+ILE+PRO-OH 2 360.96 μmol/L,(LEU+ILE+PRO-OH)/PHE 104.33,VAL 351.46 μmol/L;尿GC-MS:2-羥基異戊酸35.7,2-酮-異戊酸5.5,2-酮-3-甲基戊酸14.3,2-酮-異己酸8.5;于出生21 d死亡?;純?(P3),女,36周+2,剖宮產(chǎn),出生體質(zhì)量2.85 kg,出生6 d發(fā)病,表現(xiàn)為反應(yīng)性差,吃奶差;血MSMS:LEU+ILE+PRO-OH 2 419.1 μmol/L,(LEU+ILE+PRO-OH)/PHE 49.42,VAL 688.26 μmol/L;尿GC-MS:2-羥基異戊酸159.1,2-酮-異戊酸90.1,2-酮-3-甲基戊酸196.6,2-酮-異己酸178.1;于出生22 d死亡?;純?(P4),女,41周+2,順產(chǎn),出生體質(zhì)量3.55 kg,出生7 d發(fā)病,表現(xiàn)為嗜睡,反應(yīng)性差;血MSMS:LEU+ILE+PRO-OH 3 392.14 μmol/L,(LEU+ILE+PRO-OH)/PHE 70.3,VAL 1 080.17 μmol/L;尿GC-MS:2-羥基異戊酸7.7,2-酮-異戊酸3.1,2-酮-3-甲基戊酸9.5,2-酮-異己酸34.2;患兒自確診后接受治療與隨訪,出生10個月,生長發(fā)育落后,肌張力低,豎頭不穩(wěn),尖足,眼神呆滯?;純?(P5),男,38周+2,剖宮產(chǎn),出生體質(zhì)量3.5 kg,出生7 d發(fā)病,表現(xiàn)為拒乳,反應(yīng)性差;血MSMS:LEU+ILE+PRO-OH 3 238.76 μmol/L,(LEU+ILE+PRO-OH)/PHE 60.5,VAL 549.9 μmol/L;尿GC-MS:2-羥基異戊酸19.59,2-酮-異戊酸32.4,2-酮-3-甲基戊酸5.4,2-酮-異己酸7.2;患兒自確診后接受治療和隨訪,出生10個月,生長發(fā)育基本正常,雙側(cè)下肢肌張力低,認(rèn)母,可逗笑,能與人交流。5例患兒父母表型均正常?;純焊改妇炇鹬橥鈺?,研究獲得醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)。

    1.2 基因測序 采用二代高通量測序技術(shù)。采集患兒外周血2 mL,外送金域臨床檢測中心進(jìn)行高通量測序分析。采用QIAampDNA提取試劑盒(QIAGEN公司)抽提基因組DNA,將DNA隨機(jī)打斷純化,進(jìn)行擴(kuò)增并連接接頭序列,經(jīng)過捕獲、純化及再擴(kuò)增獲得基因文庫。針對BCKDHA的9個外顯子,BCKDHB的10個外顯子,DBT的11個外顯子、DLD的14個外顯子進(jìn)行高通量測序。檢測結(jié)果用BWA算法與GenBank BCKDHA(NM-000709)、BCKDHB(NM-183050)、DBT(NM-001918)、DLD(NM-000108)參考序列比較,獲得可疑的突變位點,并進(jìn)行父母驗證證實突變來源。

    1.3 突變位點生物學(xué)信息分析 采用PolyPhen2[1]、Mutation Taster[2]及SPANR[3]軟件預(yù)測突變對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及功能的影響; SWISS-MODEL軟件建模,BCKDHA突變的模板為2bff.1.A[4],BCKDHB突變的模板為1olx.1.B[5]。PDB軟件分析氨基酸殘基的功能變化[6],參考PDB代碼為1X7Y[7]。

    2 結(jié)果

    2.1 測序及父母驗證結(jié)果 結(jié)果顯示P1的BCKDHA攜帶c.940C>T及c.992dupA復(fù)合雜合突變,且分別來自患兒父母;P2的BCKDHB攜帶c.853C>T及c.1039-3C>A復(fù)合雜合突變,且分別來自患兒父母;P3的BCKDHB攜帶c.1046G>A及c.550delT復(fù)合雜合突變,且分別來自患兒父母;P4的BCKDHB攜帶c.383G>A及c.490G>A復(fù)合雜合突變,且分別來自患兒父母;P5的BCKDHB攜帶c.410C>T雜合突變,來自患兒母親。DBT和DLD未發(fā)現(xiàn)突變。其中c.1039-3C>A突變?yōu)閮?nèi)含子突變,其余突變均發(fā)生在外顯子區(qū)域。經(jīng)過檢索SNP、ExAC及1000G數(shù)據(jù)庫c.940C>T、c.853C>T、c.410C>T被ExAC收錄,具有SNP代碼;c.1046G>A具有SNP代碼;c.383G>A、c.940C>T雖被報道但未被以上數(shù)據(jù)庫收錄;c.550delT為本研究首次發(fā)現(xiàn);c.992dupA、c.1039-3C>A為首次報道的新突變。

    2.2 計算機(jī)軟件分析結(jié)果

    2.2.1 突變位點保守性分析結(jié)果 除P2 c.1039-3C>A發(fā)生在內(nèi)含子外,其他突變均發(fā)生在高度保守的外顯子區(qū)域,見表1。PolyPhen2和Mutation taster兩種軟件得分越接近1越預(yù)示突變位點為保守位點,突變可能導(dǎo)致蛋白功能的改變而致??;SPANR適用于剪接錯誤突變的預(yù)測,當(dāng)Dpsi_Percentile得分小于3分時認(rèn)為能夠引起剪接突變而致病。另外,c.940C>T和c.853C>T突變導(dǎo)致蛋白質(zhì)編碼提前終止,截短蛋白的產(chǎn)生必然發(fā)生剪接錯誤因此Dpsi_Percentile得分偏低。

    表1 5例患兒基因突變情況及軟件預(yù)測結(jié)果

    2.2.2 建模及PBD分析結(jié)果 P1 BCKDHA基因c.940C>T導(dǎo)致蛋白質(zhì)水平p.R314*改變,編碼產(chǎn)生的截短蛋白比野生型減少132個氨基酸;c.992dupA導(dǎo)致蛋白質(zhì)水平p.Y331*改變,編碼產(chǎn)生的截短蛋白較野生型減少115個氨基酸。PBD二級結(jié)構(gòu)顯示p.R314*改變使得編碼蛋白丟失9個α螺旋,2個β鏈和2個β轉(zhuǎn)角;p.Y331*改變使得編碼蛋白丟失8個α螺旋,1個β鏈和2個β轉(zhuǎn)角。P2 BCKDHB基因c.853C>T導(dǎo)致蛋白水平p.R285*改變,編碼產(chǎn)生的截短蛋白較野生型減少108個氨基酸。二級結(jié)構(gòu)顯示蛋白丟失6個α螺旋,4個β鏈。P3 BCKDHB基因c.550delT突變導(dǎo)致p.S184Pfs*46讀碼框移位,編碼產(chǎn)生的截短蛋白較野生型減少164個氨基酸,二級結(jié)構(gòu)顯示蛋白丟失10個α螺旋、1個β轉(zhuǎn)角、11個β折疊;P3 BCKDHB基因c.1046G>A錯義突變導(dǎo)致蛋白水平p.C349Y改變。P4 BCKDHB基因c.383G>A 錯義突變導(dǎo)致蛋白質(zhì)水平p.G128E改變;c.490G>A錯義突變導(dǎo)致蛋白質(zhì)水平p.A164T改變。P5 BCKDHB基因 c.410C>T錯義突變導(dǎo)致蛋白質(zhì)水平p.A137V的改變。這幾個錯義突變可能導(dǎo)致編碼產(chǎn)生的蛋白于突變位點之后的二級結(jié)構(gòu)丟失。

    3 討論

    MSUD是一種罕見的隱形遺傳代謝病,總體患病率約為1∶185 000,在近親婚配率較高的阿拉伯和土耳其人群MSUD患病率較高[8~10]。我國由于MSMS開展的較晚,缺乏大數(shù)據(jù)統(tǒng)計,因此具體發(fā)病率不詳。本研究青島地區(qū)篩查24萬新生兒確診4例,門診接診外地患兒1例。MSUD的發(fā)病率雖然很低,但卻是一種嚴(yán)重威脅患者生命健康的疾病,患者由于BCKD活性完全或部分缺乏導(dǎo)致亮氨酸,異亮氨酸和纈氨酸等支鏈氨基酸在體內(nèi)蓄積,引發(fā)重度酮癥酸中毒、神經(jīng)功能損害、精神發(fā)育遲滯。2001年以前國內(nèi)外對該病遺傳學(xué)病因的研究報道認(rèn)為突變有34%發(fā)生在BCKDHA(E1α基因)基因上;29%在BCKDHB(E1β基因)基因上;24%在E2基因上;13%在E3基因上[11]。2007年德國報道的30個突變基因中,37%在BCKDHA上,46%在BCKDHB上,13%在E2基因上[12]。2013年Narayanan等[13]報道的印度南部地區(qū)發(fā)生在BCKDHA上和BCKDHB上突變均占46%,DBT基因突變占14%。由此可見BCKDHA和BCKDHB是MSUD患兒的主要突變基因,而E3基因的突變極為少見。本文報道的5例患兒中1例為BCKDHA突變導(dǎo)致,4例為BCKDHB突變導(dǎo)致,結(jié)合文獻(xiàn)報道中國發(fā)病情況[14~21],其發(fā)病基因的比例為BCKDHB占60%,BCKDHA占28%,DBT占12%,E3未見。

    本文報道的9個突變位點中c.940C>T、c.853C>T、c.1046G>A、c.383G>A、c.490G>A、c.410C>T均已報道過。c.550delT位點為本研究首次發(fā)現(xiàn);c.992dupA、c.1039-3C>A為首次報道突變。本文重點討論新突變位點對蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)與功能的影響。位于BCKDHA基因第7外顯子的c.992dupA突變導(dǎo)致蛋白質(zhì)水平p.Y331*改變,編碼產(chǎn)生的截短蛋白較野生型減少115個氨基酸。丟失的二級結(jié)構(gòu)中包含THDP輔助因子的連接位點336H[4]。由于BCKD結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定性取決于THDP輔助因子和鉀離子的存在[22],因此上述突變將明顯改變E1α以及與之相連接的E1β的空間結(jié)構(gòu)及功能。另外,由于突變導(dǎo)致編碼終止信號提前出現(xiàn)在第7外顯子上,很有可能導(dǎo)致無義介導(dǎo)的mRNA降解(NMD),導(dǎo)致相對明確的功能丟失[23]。c.1039-3位于BCKDHB基因上最后一個外顯子5′端的剪接位點受體上,突變導(dǎo)致剪接位點受體丟失,由于人類剪接規(guī)律依照GU-AG規(guī)則,當(dāng)剪接位點受體丟失可能導(dǎo)致剪接方式發(fā)生改變從而使得外顯子變長,編碼產(chǎn)生加長蛋白產(chǎn)物,也可引發(fā)NMD的發(fā)生導(dǎo)致蛋白功能丟失而致病。

    MSUD患兒臨床結(jié)局與BCKD的活性密切相關(guān)。75%的經(jīng)典型MSUD患者其BCKD的活性僅為正常人的0~2%,因此臨床損害最為嚴(yán)重。由于缺乏BCKD活性的直接數(shù)據(jù)支持,我們初步對MSUD臨床嚴(yán)重程度與基因突變類型的關(guān)系進(jìn)行了探討。目前MSUD嚴(yán)重程度與遺傳學(xué)病因的關(guān)系并不明確[24]。理論上,純合子突變更容易揭示突變與臨床表現(xiàn)的關(guān)系,但就目前的報道來看,除了近親婚配率高的人群純合突變率較高外,大多數(shù)患者為復(fù)合雜合突變。本文的5例MSUD患兒中有4例為復(fù)合雜合突變,1例為單雜合突變。該5例患兒雖然均被診斷為經(jīng)典型MSUD,但臨床表現(xiàn)嚴(yán)重程度不一。5例患兒均在出生后7 d內(nèi)發(fā)病,P1血中支鏈氨基酸以亮氨酸為主,纈氨酸升高不明顯,一直在門診接受治療;2歲1個月時由于重度酸中毒昏迷家長放棄治療而死亡。P2至P5血中總亮氨酸和纈氨酸水平均遠(yuǎn)高于正常水平。P2和P3雖經(jīng)過積極治療但是由于一直無法建立自主呼吸且長期昏迷家長放棄治療于生后20 d左右死亡。P4確診后早期進(jìn)行了規(guī)范治療但是由于家長配合性差,患兒腦部磁共振檢查顯示顱內(nèi)多發(fā)異常信號神經(jīng)系統(tǒng)不可逆受損,且生長發(fā)育落后。P5雖然初期腦部神經(jīng)系統(tǒng)存在異常信號但經(jīng)過規(guī)范治療及監(jiān)測,10個月大查體患兒雖雙側(cè)下肢肌張力低下,但俯臥位抬頭穩(wěn),會逗笑,能與人交流,認(rèn)母偶有咿呀兒語,生長發(fā)育基本正常。P1至P3臨床損害嚴(yán)重,分析其基因突變類型發(fā)現(xiàn)3例患兒均存在翻譯提前終止的突變,截短蛋白及NMD機(jī)制的發(fā)生,導(dǎo)致mRNA降解,BCKD活性完全缺失可能是臨床損害嚴(yán)重的機(jī)制。P5雖僅檢測到一個雜合突變c.410C>T,但是結(jié)合患者血串聯(lián)結(jié)果、尿GC-MS結(jié)果和臨床表現(xiàn)診斷為經(jīng)典型MSUD。Nellis等[25]曾報道攜帶c.410C>T突變的淋巴細(xì)胞BCKD無活性,根據(jù)MSUD的遺傳規(guī)律不排除該患兒存在其他致病突變。一代測序以及MLPA技術(shù)可以進(jìn)一步針對內(nèi)含子和缺失重復(fù)突變進(jìn)行檢測幫助尋找遺傳學(xué)病因。MSUD多發(fā)于新生兒,早期診斷早期干預(yù)對提高患兒生命質(zhì)量至關(guān)重要[26]。

    本研究選擇5例MSUD病例,并分析了新發(fā)現(xiàn)突變位點的致病性,明確了MSUD患兒的遺傳學(xué)病因。此5例MSUD病例突變基因的報道有利于世界MSUD基因熱點突變的統(tǒng)計,同時新位點的發(fā)現(xiàn)豐富了BCKDHA基因和BCKDHB基因的突變譜,為MSUD的診斷和治療以及產(chǎn)前診斷提供依據(jù)。

    猜你喜歡
    雜合戊酸外顯子
    外顯子跳躍模式中組蛋白修飾的組合模式分析
    柴胡桂枝湯聯(lián)合戊酸雌二醇片治療更年期綜合征的臨床觀察
    甘藍(lán)型油菜隱性上位互作核不育系統(tǒng)不育系材料選育中常見的育性分離及基因型判斷
    種子(2021年3期)2021-04-12 01:42:22
    外顯子組測序助力產(chǎn)前診斷胎兒骨骼發(fā)育不良
    外顯子組測序助力產(chǎn)前診斷胎兒骨骼發(fā)育不良
    從翻譯到文化雜合——“譯創(chuàng)”理論的虛涵數(shù)意
    丙戊酸鎂合并艾司西酞普蘭治療抑郁癥對照研究
    基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)
    人類組成型和可變外顯子的密碼子偏性及聚類分析
    戊酸雌二醇在重度宮腔粘連分離術(shù)后的應(yīng)用
    国产精品综合久久久久久久免费| 美女大奶头视频| 天堂√8在线中文| 欧美成人性av电影在线观看| 偷拍熟女少妇极品色| 亚洲激情在线av| 精品久久久久久,| 午夜免费成人在线视频| 日韩欧美 国产精品| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 成人国产一区最新在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 村上凉子中文字幕在线| 欧美+亚洲+日韩+国产| 成人三级黄色视频| 亚洲国产精品999在线| 美女大奶头视频| 他把我摸到了高潮在线观看| 久久这里只有精品中国| 午夜福利欧美成人| 91av网一区二区| 国产精品影院久久| 亚洲精品成人久久久久久| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 亚洲专区国产一区二区| 一区二区三区国产精品乱码| 午夜激情欧美在线| 成人无遮挡网站| 黄色视频,在线免费观看| 极品教师在线免费播放| 欧美色欧美亚洲另类二区| 真人做人爱边吃奶动态| 免费看a级黄色片| 免费高清视频大片| 欧美乱妇无乱码| 日本黄色片子视频| 久久伊人香网站| 精品熟女少妇八av免费久了| 在线观看午夜福利视频| 超碰av人人做人人爽久久 | 少妇人妻一区二区三区视频| 好男人电影高清在线观看| 久久久久久九九精品二区国产| www.999成人在线观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 一区二区三区国产精品乱码| 国产精品98久久久久久宅男小说| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 一区二区三区激情视频| 全区人妻精品视频| 伊人久久精品亚洲午夜| 一个人看的www免费观看视频| 欧美激情久久久久久爽电影| 亚洲精品一卡2卡三卡4卡5卡| 欧美日韩精品网址| 国产极品精品免费视频能看的| 久久国产乱子伦精品免费另类| 99精品欧美一区二区三区四区| 免费观看人在逋| 久久久久久久精品吃奶| 亚洲av成人av| 免费高清视频大片| 18禁在线播放成人免费| 久久精品91无色码中文字幕| 国产 一区 欧美 日韩| 日韩中文字幕欧美一区二区| 哪里可以看免费的av片| 好男人在线观看高清免费视频| 一级毛片女人18水好多| 波多野结衣高清无吗| 美女黄网站色视频| 综合色av麻豆| 97超视频在线观看视频| 亚洲,欧美精品.| 九色成人免费人妻av| 免费大片18禁| 中亚洲国语对白在线视频| 国产毛片a区久久久久| 丁香六月欧美| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久久免费精品人妻一区二区| 午夜福利欧美成人| 禁无遮挡网站| 久久久久久久久中文| 日韩欧美国产一区二区入口| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 18禁黄网站禁片午夜丰满| 欧美日韩亚洲国产一区二区在线观看| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 国产成人aa在线观看| 国产视频一区二区在线看| 欧美在线黄色| 男人的好看免费观看在线视频| 国产色爽女视频免费观看| 国产极品精品免费视频能看的| 波多野结衣高清作品| 日韩亚洲欧美综合| 国产成人av激情在线播放| 少妇熟女aⅴ在线视频| 91在线观看av| 啦啦啦观看免费观看视频高清| 免费一级毛片在线播放高清视频| 香蕉久久夜色| 国内精品美女久久久久久| 久久香蕉国产精品| 精品99又大又爽又粗少妇毛片 | 中文字幕高清在线视频| 国产精品影院久久| 久久久久久国产a免费观看| 国模一区二区三区四区视频| 69人妻影院| 久久久久久久午夜电影| 国产精品自产拍在线观看55亚洲| 久久久久九九精品影院| www.www免费av| 国产精华一区二区三区| 1024手机看黄色片| 黄色片一级片一级黄色片| 精品无人区乱码1区二区| 在线看三级毛片| 国产av一区在线观看免费| 美女被艹到高潮喷水动态| 国产成+人综合+亚洲专区| 成人国产综合亚洲| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 亚洲精品亚洲一区二区| 3wmmmm亚洲av在线观看| 丰满的人妻完整版| 99在线人妻在线中文字幕| 久久久精品欧美日韩精品| 69av精品久久久久久| av视频在线观看入口| 最近最新免费中文字幕在线| 国产淫片久久久久久久久 | 欧美av亚洲av综合av国产av| 美女黄网站色视频| 国产免费av片在线观看野外av| 哪里可以看免费的av片| 99久久精品热视频| 国产91精品成人一区二区三区| 成人永久免费在线观看视频| 熟妇人妻久久中文字幕3abv| 亚洲欧美日韩东京热| 搞女人的毛片| 精品电影一区二区在线| 亚洲人成网站在线播放欧美日韩| 日本免费一区二区三区高清不卡| 亚洲真实伦在线观看| 男人舔女人下体高潮全视频| 91在线精品国自产拍蜜月 | 日本 av在线| 亚洲av第一区精品v没综合| 最近在线观看免费完整版| 欧美成人性av电影在线观看| 午夜激情福利司机影院| 亚洲av成人精品一区久久| 亚洲av五月六月丁香网| 91久久精品电影网| av国产免费在线观看| 亚洲狠狠婷婷综合久久图片| 俺也久久电影网| 国产v大片淫在线免费观看| 午夜视频国产福利| 在线观看66精品国产| 精品久久久久久,| 深爱激情五月婷婷| 女警被强在线播放| 欧美一级a爱片免费观看看| 成人国产综合亚洲| 嫩草影视91久久| 色噜噜av男人的天堂激情| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 嫩草影院入口| 99在线视频只有这里精品首页| 91麻豆av在线| 在线观看舔阴道视频| 天天一区二区日本电影三级| 女人高潮潮喷娇喘18禁视频| 欧美性猛交黑人性爽| 欧美一级毛片孕妇| 熟女电影av网| 色吧在线观看| 久久久久国内视频| 91麻豆av在线| 亚洲第一电影网av| 日日夜夜操网爽| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 一个人看的www免费观看视频| 动漫黄色视频在线观看| 亚洲自拍偷在线| 亚洲内射少妇av| 天美传媒精品一区二区| 国产av不卡久久| 成人特级av手机在线观看| 少妇丰满av| 国产精品久久久久久精品电影| 少妇的丰满在线观看| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 老师上课跳d突然被开到最大视频 久久午夜综合久久蜜桃 | 国产精品久久久久久人妻精品电影| 亚洲国产色片| 亚洲第一欧美日韩一区二区三区| 午夜精品一区二区三区免费看| 精品福利观看| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 2021天堂中文幕一二区在线观| 丁香欧美五月| 国产三级黄色录像| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 久久人妻av系列| 欧美一级毛片孕妇| 啦啦啦韩国在线观看视频| 老汉色∧v一级毛片| 国产一区在线观看成人免费| 国产一区二区三区在线臀色熟女| 精品免费久久久久久久清纯| 99精品久久久久人妻精品| 在线播放国产精品三级| 欧美精品啪啪一区二区三区| 久久精品人妻少妇| 久久香蕉国产精品| 天天躁日日操中文字幕| www国产在线视频色| 欧美乱色亚洲激情| 国产亚洲欧美在线一区二区| 观看免费一级毛片| 热99在线观看视频| 成人无遮挡网站| 日本免费a在线| 性色av乱码一区二区三区2| 操出白浆在线播放| 真人做人爱边吃奶动态| 91在线精品国自产拍蜜月 | 99久久99久久久精品蜜桃| 又紧又爽又黄一区二区| 欧美bdsm另类| 天堂动漫精品| 男插女下体视频免费在线播放| 在线播放国产精品三级| 成人永久免费在线观看视频| 欧美又色又爽又黄视频| 国产一区二区激情短视频| 久久久色成人| 熟女少妇亚洲综合色aaa.| 亚洲成av人片在线播放无| 精品国产亚洲在线| 一区福利在线观看| 欧美在线一区亚洲| 国产精品亚洲av一区麻豆| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 久久精品人妻少妇| 国产精品久久久人人做人人爽| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲人与动物交配视频| 观看免费一级毛片| 日本成人三级电影网站| 搡老岳熟女国产| 女生性感内裤真人,穿戴方法视频| 亚洲精品影视一区二区三区av| 熟女人妻精品中文字幕| 内地一区二区视频在线| 日韩国内少妇激情av| 波多野结衣高清无吗| 中文字幕熟女人妻在线| 熟女人妻精品中文字幕| 久久久久久久久中文| 全区人妻精品视频| 国产高清激情床上av| 免费人成视频x8x8入口观看| 欧美成人免费av一区二区三区| 人人妻人人看人人澡| 久久久久久人人人人人| 国产一区二区激情短视频| 欧美乱妇无乱码| 国产激情偷乱视频一区二区| 每晚都被弄得嗷嗷叫到高潮| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 久久亚洲真实| 亚洲人成伊人成综合网2020| 99久久99久久久精品蜜桃| 无遮挡黄片免费观看| 黄色视频,在线免费观看| 国产亚洲av嫩草精品影院| 观看免费一级毛片| 成人特级黄色片久久久久久久| 精品国产三级普通话版| 99国产精品一区二区蜜桃av| svipshipincom国产片| 婷婷精品国产亚洲av| 欧美黑人欧美精品刺激| www.www免费av| 日本在线视频免费播放| 国产亚洲精品久久久久久毛片| 久久亚洲精品不卡| 丝袜美腿在线中文| 亚洲av不卡在线观看| 激情在线观看视频在线高清| 色噜噜av男人的天堂激情| 超碰av人人做人人爽久久 | 欧美日韩一级在线毛片| 高潮久久久久久久久久久不卡| 又紧又爽又黄一区二区| 亚洲,欧美精品.| 国产亚洲av嫩草精品影院| 白带黄色成豆腐渣| 成人国产综合亚洲| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美黄色片欧美黄色片| 欧美成人a在线观看| 久久草成人影院| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 国产主播在线观看一区二区| 男人和女人高潮做爰伦理| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 老司机在亚洲福利影院| 黄片小视频在线播放| 成年人黄色毛片网站| 免费人成在线观看视频色| 亚洲成人久久性| 国产一区二区在线av高清观看| 一个人看的www免费观看视频| 动漫黄色视频在线观看| 久久99热这里只有精品18| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 国产成人啪精品午夜网站| av天堂中文字幕网| 久久精品夜夜夜夜夜久久蜜豆| 给我免费播放毛片高清在线观看| 窝窝影院91人妻| 在线视频色国产色| 久久亚洲真实| 国产av一区在线观看免费| 国产探花极品一区二区| 人人妻,人人澡人人爽秒播| 18禁在线播放成人免费| 欧美中文日本在线观看视频| 午夜两性在线视频| 99在线人妻在线中文字幕| 熟女人妻精品中文字幕| 日本熟妇午夜| 国产伦精品一区二区三区视频9 | 99在线视频只有这里精品首页| 欧美一级a爱片免费观看看| 91久久精品电影网| 哪里可以看免费的av片| 51国产日韩欧美| 国产熟女xx| 草草在线视频免费看| 亚洲精华国产精华精| 国产高清三级在线| 99久久久亚洲精品蜜臀av| 亚洲无线在线观看| 亚洲成av人片免费观看| 国产激情偷乱视频一区二区| 国产乱人视频| 亚洲精品国产精品久久久不卡| 一进一出抽搐动态| 亚洲国产日韩欧美精品在线观看 | 高清日韩中文字幕在线| 一夜夜www| 最新在线观看一区二区三区| 香蕉久久夜色| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 偷拍熟女少妇极品色| 日韩欧美在线二视频| 亚洲真实伦在线观看| 老司机午夜十八禁免费视频| 日韩精品青青久久久久久| 最后的刺客免费高清国语| 搡老熟女国产l中国老女人| 亚洲av免费在线观看| 国产成人欧美在线观看| 精品不卡国产一区二区三区| 久久精品综合一区二区三区| 欧美中文日本在线观看视频| 精品福利观看| 日韩 欧美 亚洲 中文字幕| 中亚洲国语对白在线视频| 99精品在免费线老司机午夜| 中文字幕人成人乱码亚洲影| 精品久久久久久久末码| 丁香六月欧美| 午夜福利欧美成人| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 欧美bdsm另类| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲18禁久久av| 国产探花在线观看一区二区| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 中文字幕av在线有码专区| 精品久久久久久久毛片微露脸| 色综合婷婷激情| 深爱激情五月婷婷| 激情在线观看视频在线高清| 18禁裸乳无遮挡免费网站照片| 一区二区三区激情视频| 日日干狠狠操夜夜爽| 日日夜夜操网爽| 18禁黄网站禁片免费观看直播| 久久九九热精品免费| 淫妇啪啪啪对白视频| 国产午夜精品久久久久久一区二区三区 | 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 亚洲精品在线美女| 国产一区二区在线av高清观看| 欧美中文综合在线视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 性欧美人与动物交配| 搡老岳熟女国产| 法律面前人人平等表现在哪些方面| 国产精品久久久久久精品电影| xxx96com| 亚洲激情在线av| 亚洲国产中文字幕在线视频| 亚洲美女黄片视频| 欧美色视频一区免费| 在线观看舔阴道视频| 久久精品国产亚洲av香蕉五月| 亚洲人成电影免费在线| 亚洲欧美日韩东京热| 天堂动漫精品| 99久国产av精品| 日韩人妻高清精品专区| 国产精品久久视频播放| 国产伦精品一区二区三区四那| www.色视频.com| 一本精品99久久精品77| 老汉色av国产亚洲站长工具| 午夜视频国产福利| 搡老妇女老女人老熟妇| 免费av不卡在线播放| 十八禁人妻一区二区| 久久精品亚洲精品国产色婷小说| 天堂√8在线中文| 精品久久久久久成人av| 午夜福利在线观看免费完整高清在 | 亚洲无线观看免费| 91麻豆精品激情在线观看国产| 亚洲av成人av| 中出人妻视频一区二区| 我的老师免费观看完整版| 亚洲欧美一区二区三区黑人| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 草草在线视频免费看| 国产成人aa在线观看| 老熟妇乱子伦视频在线观看| 亚洲国产欧美人成| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 精品久久久久久久久久免费视频| 嫩草影院精品99| 亚洲av成人精品一区久久| 在线观看一区二区三区| 十八禁人妻一区二区| 在线播放无遮挡| 国产精品久久久久久精品电影| 亚洲人与动物交配视频| 日本黄色视频三级网站网址| 18禁美女被吸乳视频| a级一级毛片免费在线观看| 国产高清激情床上av| 老司机福利观看| 日本五十路高清| 国产精品嫩草影院av在线观看 | 免费看美女性在线毛片视频| 欧美精品啪啪一区二区三区| 国产精品女同一区二区软件 | 久久久久久人人人人人| 欧美成人一区二区免费高清观看| 真人做人爱边吃奶动态| 3wmmmm亚洲av在线观看| 黄片大片在线免费观看| 欧美高清成人免费视频www| 一二三四社区在线视频社区8| 91麻豆av在线| 精品一区二区三区视频在线观看免费| 操出白浆在线播放| 亚洲国产精品sss在线观看| 亚洲avbb在线观看| 亚洲av免费在线观看| 国产欧美日韩精品一区二区| 久久久国产精品麻豆| 人妻丰满熟妇av一区二区三区| 亚洲美女视频黄频| 首页视频小说图片口味搜索| 精品不卡国产一区二区三区| 欧美性猛交黑人性爽| 日本三级黄在线观看| 欧美日本亚洲视频在线播放| 青草久久国产| 一本综合久久免费| 久久久成人免费电影| 日韩有码中文字幕| 精品福利观看| 国产成人影院久久av| 不卡一级毛片| 成年免费大片在线观看| 国产主播在线观看一区二区| av黄色大香蕉| 久久99热这里只有精品18| 精品午夜福利视频在线观看一区| 悠悠久久av| 中国美女看黄片| 搡老熟女国产l中国老女人| 久久久久久久久久黄片| 老司机午夜福利在线观看视频| 国产高潮美女av| 成人无遮挡网站| 亚洲最大成人中文| 亚洲av日韩精品久久久久久密| 国产在视频线在精品| 美女大奶头视频| 一卡2卡三卡四卡精品乱码亚洲| 国产精品一及| 成人一区二区视频在线观看| 久久精品国产清高在天天线| 欧美中文日本在线观看视频| 亚洲 欧美 日韩 在线 免费| 搡老妇女老女人老熟妇| 脱女人内裤的视频| 国产91精品成人一区二区三区| 亚洲av不卡在线观看| 欧美一区二区精品小视频在线| 超碰av人人做人人爽久久 | 欧美大码av| 久久精品国产清高在天天线| 国产aⅴ精品一区二区三区波| 国产黄a三级三级三级人| 欧美乱色亚洲激情| 免费观看人在逋| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 露出奶头的视频| 男女那种视频在线观看| 精品国产美女av久久久久小说| 国产单亲对白刺激| 久久精品人妻少妇| 麻豆成人午夜福利视频| 身体一侧抽搐| 在线观看午夜福利视频| 国产精品99久久99久久久不卡| 搡老妇女老女人老熟妇| 亚洲国产欧美网| 亚洲内射少妇av| 日日摸夜夜添夜夜添小说| 90打野战视频偷拍视频| 波多野结衣巨乳人妻| 天堂√8在线中文| 国产探花在线观看一区二区| 精品乱码久久久久久99久播| 久久草成人影院| 热99在线观看视频| 欧美中文综合在线视频| 久久亚洲精品不卡| www.熟女人妻精品国产| 日韩欧美三级三区| 午夜视频国产福利| 日本免费a在线| 白带黄色成豆腐渣| 国产精品久久视频播放| 欧美最新免费一区二区三区 | 中文字幕av成人在线电影| 99热6这里只有精品| 欧美三级亚洲精品| 欧美色视频一区免费| 国产一区二区三区视频了| 99精品久久久久人妻精品| 日韩欧美国产一区二区入口| 黄色片一级片一级黄色片| 此物有八面人人有两片| 日本黄色片子视频| 黄片小视频在线播放| 国产探花极品一区二区| 成人性生交大片免费视频hd| 午夜福利在线在线| 欧美极品一区二区三区四区| 高清日韩中文字幕在线| 最近最新中文字幕大全电影3| 18禁国产床啪视频网站| 欧美一级a爱片免费观看看| 美女高潮喷水抽搐中文字幕| 国产在线精品亚洲第一网站| 国产av不卡久久| 午夜久久久久精精品| 国产蜜桃级精品一区二区三区| 精品久久久久久成人av| 国产精品一及| 日韩大尺度精品在线看网址| 琪琪午夜伦伦电影理论片6080| 少妇的逼水好多| 国产精品精品国产色婷婷| 波野结衣二区三区在线 | 欧美区成人在线视频| 亚洲精品456在线播放app | 亚洲av美国av| 国产精品一区二区三区四区免费观看 | 精品久久久久久久人妻蜜臀av| 天天添夜夜摸| 久久久久国产精品人妻aⅴ院| 99riav亚洲国产免费| 老汉色∧v一级毛片| 麻豆成人午夜福利视频| 久久久久亚洲av毛片大全| xxxwww97欧美| 少妇人妻一区二区三区视频| 高清在线国产一区| 国产欧美日韩一区二区三| 免费观看精品视频网站| 床上黄色一级片| 岛国视频午夜一区免费看| 真实男女啪啪啪动态图| 色综合站精品国产| 免费看光身美女| 欧美成人一区二区免费高清观看|