氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定d-檸檬烯含量

邱小梅，熊寶林，陳 石

（云南省化工研究院，云南 昆明 650228）

作為綠色環(huán)保農(nóng)藥的有效組分和實(shí)用助劑——d-檸檬烯（d-Limonene），對(duì)鱗翅目、鞘翅目、半翅目、膜翅目等農(nóng)業(yè)害蟲(chóng)均具殺滅作用，是農(nóng)業(yè)用橙油桔油等產(chǎn)品的重要有效成分之一[1-2]。含檸檬烯的農(nóng)藥產(chǎn)品，在高品質(zhì)農(nóng)產(chǎn)品的種植生產(chǎn)中，使用程度越來(lái)越高，可大量減少有機(jī)磷及化學(xué)農(nóng)藥的使用。在2018年召開(kāi)的第九屆全國(guó)農(nóng)藥登記評(píng)審委員會(huì)第二次委員會(huì)議上，d-檸檬烯原藥及可溶液劑被評(píng)審?fù)ㄟ^(guò)為新農(nóng)藥產(chǎn)品。雖然，檸檬烯在藥品和保健品領(lǐng)域，有較為成熟的檢測(cè)方法，檢測(cè)多以GC-MS、GC和HPLC等方法進(jìn)行[3-4]，但在農(nóng)藥應(yīng)用領(lǐng)域，檸檬烯水劑的氣相色譜檢測(cè)方法尚未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本文建立和討論的氣相色譜內(nèi)標(biāo)法，可做為產(chǎn)品質(zhì)量的控制方法，在今后，亦可為相應(yīng)檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的制定，提供可靠的經(jīng)驗(yàn)和數(shù)據(jù)支持。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

儀器:Agilent6890氣相色譜儀，帶FID檢測(cè)器。

試劑:甲醇分析純，國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；乙酸丁酯，不含有干擾分析的雜質(zhì)；d-檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)品（D-limonene） 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為90.0%（巴西 CUTRALE）。

1.2 氣相色譜檢測(cè)條件

毛細(xì)管色譜柱:Agilent HP-innowax（30m×0.25mm×0.25μm）；柱溫 50℃；進(jìn)樣口溫度220℃；檢測(cè)器溫度250℃；進(jìn)樣量1.0μL；載氣為高純氮，流速1.5mL/min，分流比30∶1；空氣300mL/min；氫氣:30mL/min。

1.3 樣品檢測(cè)

1.3.1 標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

內(nèi)標(biāo)溶液的配制:乙酸丁酯1.5g，置于100mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻。

標(biāo)樣溶液的配制:稱(chēng)取d-檸檬烯標(biāo)樣0.0841g，置于25mL容量瓶中，用移液管準(zhǔn)確加入5mL內(nèi)標(biāo)溶液，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。

試樣溶液的配制:稱(chēng)取試樣0.8～1.2g，置于25mL容量瓶中，用移液管準(zhǔn)確加入5mL內(nèi)標(biāo)溶液，用甲醇稀釋到刻度，搖勻。

1.3.2 樣品檢測(cè)

在上述氣相色譜操作條件下，待儀器穩(wěn)定后，連續(xù)注入數(shù)針標(biāo)樣溶液，待相鄰兩針中待測(cè)組分與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比值的相對(duì)響應(yīng)值變化小于1.5%時(shí)進(jìn)樣檢測(cè)。色譜圖如圖1所示。由圖1看出，待檢組分與內(nèi)標(biāo)物分離度良好。

1.4 結(jié)果計(jì)算

試樣中d-檸檬烯質(zhì)量分?jǐn)?shù)w按下式計(jì)算:

圖1 d-檸檬烯與內(nèi)標(biāo)物的氣相色譜圖Figure 1 Gas Chromatogram of the D-limonene and the internal standard

式中:r1為標(biāo)樣溶液中，d-檸檬烯與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；r2為試樣溶液中，d-檸檬烯與內(nèi)標(biāo)物峰面積比的平均值；m1為d-檸檬烯標(biāo)樣的質(zhì)量，g；m2為試樣的質(zhì)量，g；w0為標(biāo)樣中d-檸檬烯的質(zhì)量分?jǐn)?shù)，%。

2 結(jié)果與討論

2.1 線(xiàn)性相關(guān)性驗(yàn)證

稱(chēng)取d-檸檬烯標(biāo)樣0.75g，置于50mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀釋到刻度，搖勻備用。用移液管分別移取1、2、5、10、20mL標(biāo)樣溶液，置于25mL容量瓶中，準(zhǔn)確加入5mL內(nèi)標(biāo)溶液，用甲醇稀釋至刻度，搖勻。

按上述氣相色譜操作條件進(jìn)行多組分析測(cè)定，以d-檸檬烯與內(nèi)標(biāo)物的質(zhì)量比為橫坐標(biāo)，d-檸檬烯與內(nèi)標(biāo)物的峰面積比為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，得線(xiàn)性方程為y=0.0161x+0.0005；其線(xiàn)性相關(guān)系數(shù)為0.9999。如圖2所示。

圖2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)Figure 2 Standard curve

2.2 方法精密度驗(yàn)證

按前述內(nèi)標(biāo)檢測(cè)方法,對(duì)同一個(gè)檸檬烯樣品進(jìn)行平行測(cè)定，精密度測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 精密度試驗(yàn)結(jié)果Tab1 Precision test results

由表1可見(jiàn)，d-檸檬烯含量的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.35%。

2.3 方法準(zhǔn)確度驗(yàn)證

以加標(biāo)回收率作為準(zhǔn)確度驗(yàn)證方法，在已知d-檸檬烯含量的樣品中分別加入不同量的d-檸檬烯標(biāo)準(zhǔn)樣品，按前述述色譜條件進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表2。由表2可見(jiàn)，d-檸檬烯的平均回收率為100.3%。

表2 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果Tab2 Accuracy test results

3 結(jié)論

氣相色譜內(nèi)標(biāo)法測(cè)定d-檸檬烯含量，以乙酸丁酯為內(nèi)標(biāo)物，具有前處理過(guò)程簡(jiǎn)便，樣品分離效果好等優(yōu)勢(shì)。相比于外標(biāo)法，此方法不受樣品進(jìn)樣量的影響，并且由于通過(guò)測(cè)量?jī)?nèi)標(biāo)物及被測(cè)組分的峰面積的相對(duì)值來(lái)進(jìn)行計(jì)算，也一定程度上消除了手動(dòng)進(jìn)樣、分流歧視、操作條件波動(dòng)等的變化所引起的誤差，檢測(cè)方法更為簡(jiǎn)便可靠。