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    滋陰養(yǎng)血安神方對(duì)PCPA誘導(dǎo)的失眠小鼠Glu及GABA含量的影響※

    2019-05-14 09:23:38孫延娜張立德
    關(guān)鍵詞:下丘腦滋陰安神

    孫延娜 喬 鐵 張立德

    (遼寧中醫(yī)藥大學(xué)繼續(xù)教育學(xué)院,遼寧 沈陽(yáng) 110847)

    現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究表明,睡眠與中樞神經(jīng)介質(zhì)有關(guān),氨基酸類(lèi)遞質(zhì)為神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)廣泛分布的一類(lèi)遞質(zhì),包括興奮類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)谷氨酸(glutamic acid,Glu)、天門(mén)冬氨酸(aminosuccinic acid,Asp) 及抑制性神經(jīng)遞質(zhì)甘氨酸(glycine,Gly)、γ-氨基丁酸 (γ-aminobutyric acid,γ-GABA)、?;撬?(taurine,Tau) 等[1-3]。目前對(duì)鎮(zhèn)靜藥的研究最多的是血清素-羥色胺和GABA能系統(tǒng)。γ-氨基丁酸是一種抑制性神經(jīng)遞質(zhì),谷氨酸是中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)主要的興奮性神經(jīng)遞質(zhì),GABA能通路對(duì)于睡眠的影響目前研究比較多,包括Glu及GABA含量及Glu/GABA值,GABA受體及GABA的合成、代謝以及轉(zhuǎn)運(yùn)等。本文從以酸棗仁、五味子、刺五加、龍眼肉、遠(yuǎn)志、茯苓等為主要原料的滋陰養(yǎng)血安神方對(duì)PCPA誘導(dǎo)的睡眠剝奪小鼠GABA能通路進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究,探討該中藥方治療失眠的可能機(jī)制,現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

    1 實(shí)驗(yàn)材料

    1.1 藥物及制備 對(duì)氯苯丙氨酸(para-chlorophenylalanine,PCPA,Alfa Aesar公司,批號(hào):ZO1B007);滋陰養(yǎng)血安神方:酸棗仁25 g,五味子5 g,刺五加25 g,龍眼肉25 g,遠(yuǎn)志15 g,茯苓25 g(購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥房,批號(hào)分別為:1711203,1706211,111575,1712261,1802091,1711031) 組成,兌換為小鼠給藥劑量,并摸索劑量設(shè)低、中、高劑量組。常規(guī)方法煎煮制成藥物按1.82 g/mL,3.64 g/mL,7.28 g/mL低、中、高三種濃度,分裝后4℃?zhèn)溆?,灌胃時(shí)每只每日給藥0.8 mL/20 g體重;地西泮(山東信誼制藥有限公司,國(guó)藥準(zhǔn)字H37023039);小鼠GABA酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒(生工生物工程(上海) 股份有限公司,貨號(hào)D720127);小鼠a-Glu酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒 (生工生物工程(上海)股份有限公司,貨號(hào)D720330)。

    1.2 儀器 多功能酶標(biāo)儀(奧地利MD公司,SpectraMax I3);雪花制冰機(jī)(上?;蕛x器,F(xiàn)MB50);基礎(chǔ)電源(美國(guó)伯樂(lè)公司,1645050);基礎(chǔ)電泳儀電源(威泰克有限公司,ELITE 300PLUS E5W0541);高速冷凍離心機(jī)(德國(guó)eppendorf 5415C);分析天平(德國(guó)Sartorius BL310/BL21S);移液器(康寧) (美國(guó)corning 4070 4073 4075)。

    1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 雄性KM小鼠18~22 g購(gòu)于遼寧中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心(遼寧長(zhǎng)生生物技術(shù)有限公司提供),SPF級(jí),許可證號(hào):SCXK(遼)2015-0001,所有試驗(yàn)動(dòng)物相關(guān)的操作均符合國(guó)際健康指南。

    1.4 實(shí)驗(yàn)方法 KM小鼠48只,購(gòu)買(mǎi)動(dòng)物后適應(yīng)性飼養(yǎng)一周,保持12小時(shí)晝夜交替,自由飲水及飲食。隨機(jī)選出8只作為正常對(duì)照組,以蒸餾水按1 mL/100 kg灌胃,連續(xù)9 d。其余腹腔注射對(duì)氯苯丙氨酸(PCPA)方法復(fù)制失眠小鼠模型,每天上午腹腔注射PCPA300 mg/kg[4]制作實(shí)驗(yàn)性失眠小鼠模型,連續(xù)2 d。其中PCPA用略堿性生理鹽水(PH:7~8),按1 mL/100 g配置成混懸液。模型組第3天以生理鹽水按1 mL/100 g灌胃,連續(xù)7 d。地西泮對(duì)照組給予地西泮水溶液灌胃2 mg/kg[5-6],滋陰養(yǎng)血安神方低劑量組(1.82 g/mL·d)、滋陰養(yǎng)血安神方中劑量組(3.64 g/mL·d)、滋陰養(yǎng)血安神方高劑量組(7.28 g/mL·d) 每天1次,連續(xù)給藥7 d。7 d后,麻醉小鼠迅速冰上取下丘腦,冰浴下沖分勻漿,離心,取上清液,參照ELISA試劑盒說(shuō)明書(shū)處理后,在酶標(biāo)儀450 nm處,檢測(cè)小鼠下丘腦組織Glu、GABA含量。

    2 結(jié)果

    2.1 滋陰養(yǎng)血安神方對(duì)PCPA誘導(dǎo)失眠小鼠下丘腦Glu、GABA含量、Glu/GABA比值的影響 利用ELISA法檢測(cè)滋陰養(yǎng)血安神方對(duì)失眠小鼠下丘腦Glu、GABA含量、Glu/GABA比值的影響,如表1,圖1~2所示:與空白組相比,模型組Glu含量升高(P<0.05),滋陰養(yǎng)血安神方低、中劑量組與空白組沒(méi)有顯著性差異,滋陰養(yǎng)血安神方高劑量組及地西泮組Glu含量降低(P<0.05)。與模型組相比,滋陰養(yǎng)血安神方低、中、高劑量組及地西泮組均顯著降低了Glu含量(P<0.05);與空白組相比,模型組GABA含量明顯升高(P<0.05),滋陰養(yǎng)血安神方低、中、高劑量組及地西泮組均顯著升高了GABA含量(P<0.05)。與模型組相比,滋陰養(yǎng)血安神方低、中劑量組與模型組比較沒(méi)有顯著性差異,滋陰養(yǎng)血安神方高劑量組及地西泮組均顯著升高了GABA含量(P<0.05);與空白組相比,模型組Glu/GABA比值沒(méi)有顯著性差異,滋陰養(yǎng)血安神方低、中、高劑量組及地西泮組均顯著降低了Glu/GABA比值(P<0.05)。與模型組相比,滋陰養(yǎng)血安神方低、中劑量組顯著性降低了Glu/GABA比值(P<0.05),滋陰養(yǎng)血安神方高劑量組及地西泮組均顯著性降低了 Glu/GABA比值 (P<0.01)。

    表1 各組小鼠下丘腦Glu、GABA含量、Glu/GABA比值比較(,n=8)

    表1 各組小鼠下丘腦Glu、GABA含量、Glu/GABA比值比較(,n=8)

    組別 鼠數(shù) 劑量 Glu(μmol/g)空白組模型組滋陰養(yǎng)血安神方組(g/kg)地西泮組(mg/kg)8 8 8 8 8 8 73.0 146.0 292.0 1.5 28.49±0.63 29.46±0.45*28.47±0.51#28.68±0.36#27.34±0.54*#27.59±0.41*#GABA(μmol/g)Glu/GABA 13.57±0.59 14.03±0.63*15.72±0.25*16.39±0.36*16.56±0.54*#17.24±0.39*2.10±0.12 2.08±0.35 1.81±0.39*#1.75±0.27*#1.65±0.16*##1.60±0.21*##

    圖1 各組小鼠下丘腦GABA,Glu含量比較

    圖2 各組小鼠下丘腦Glu/GABA比值比較

    3 討論

    失眠與中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮性氨基酸遞質(zhì)及抑制性氨基酸遞質(zhì)的含量及失衡是相關(guān)的,腦干GABA能神經(jīng)元可能控制快速眼動(dòng)(REM)睡眠,食欲素 (Hcrt)神經(jīng)系統(tǒng)可能是治療失眠的合適治療靶點(diǎn)[7]。目前,很多藥物通過(guò)影響GABA能通路影響睡眠。Jo K等[8]進(jìn)行蓮蓬子提取物(NNE)促進(jìn)果蠅睡眠的研究,結(jié)果蓮子水提取物促進(jìn)了睡眠。這種NNE介導(dǎo)的睡眠促進(jìn)效應(yīng)與GABAA/GABAB的上調(diào)有關(guān)。Woo JH等[9]研究發(fā)現(xiàn)紫花前胡醇當(dāng)歸酯能延長(zhǎng)戊巴比妥誘導(dǎo)的失眠大鼠睡眠總時(shí)間,并增加了GAD65/67和GABA-A受體表達(dá),通過(guò)GABA-A能系統(tǒng)起作用進(jìn)而治療失眠。臨床經(jīng)驗(yàn)方滋陰養(yǎng)血安神方治療失眠,以酸棗仁、五味子、刺五加、龍眼肉、遠(yuǎn)志、茯苓等為主要原料的配方。酸棗仁皂苷A可以調(diào)節(jié)GABA受體的mRNA表達(dá),通過(guò)影響腸黏膜炎癥細(xì)胞因子影響腦中神經(jīng)細(xì)胞之間網(wǎng)絡(luò)而對(duì)失眠起鎮(zhèn)定催眠作用,這種機(jī)制與褪黑素類(lèi)似[10]。

    本實(shí)驗(yàn)中,滋陰養(yǎng)血安神方降低了失眠模型組小鼠下丘腦Glu含量,升高了GABA含量,降低了Glu/GABA比值,滋陰養(yǎng)血安神方可能通過(guò)對(duì)下丘腦Glu、GABA含量、Glu/GABA比值影響失眠小鼠睡眠。滋陰養(yǎng)血安神方能通過(guò)GABA能系統(tǒng)通路影響失眠小鼠睡眠。

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