超高效液相色譜串聯四極桿質譜測定豆芽中的4-氯苯氧乙酸

胡志國，鐘彩麗，何林才,姜學涯，苑婷婷

(深圳凱吉星農產品檢測認證有限公司，廣東 深圳 518111)

豆芽是一種四季皆可生產且物美價廉的蔬菜，富含Vc、氨基酸、膳食纖維等對人體益的成分，且脂肪與膽固醇含量很低，深受廣大消費者喜愛[1]。4-氯苯氧乙酸，做為一種植物生長調節(jié)劑，在豆芽的生產中使用十分廣泛。但由于其對人體具有一定的毒性積累作用。《國家食品藥品監(jiān)督管理總局 農業(yè)部 國家衛(wèi)生和計劃生育委員會關于豆芽生產過程中禁止使用6-芐基腺嘌呤等物質的公告(2015第11號)》已經明令禁止在豆芽生產中使用4-氯苯氧乙酸這種物質。

目前，測定豆芽中的4-氯苯氧乙酸，很多采用高效液相色譜法[2-7]。這種方法由于采用保留時間定性，有時可能存在假陽性的結果。《SN/T 3725-2013中華人民共和國出入境檢驗檢疫行業(yè)標準 出口食品中對氯苯氧乙酸殘留量的測定》[8]采用了液質聯用的方法。但該方法操作過程繁瑣，消耗有機溶劑多，越來越不能滿足檢測機構對于豆芽中4-氯苯氧乙酸的測試要求。本方法采用乙酸乙酯在酸性環(huán)境下提取，超高效液相色譜串聯質譜測定豆芽中的4-氯苯氧乙酸。該方法消耗溶劑少，操作簡單易行，比較適合大批量的檢測任務。

1 試驗部分

1.1 試劑與儀器

Thermo U3000液相色譜(塞默飛世爾科技(中國)有限公司)；AB API 5500串聯質譜儀配有電噴霧離子源(上海愛博才思分析儀器貿易有限公司)；振蕩器(逗點生物技術有限公司)；離心機(塞默飛世爾科技(中國)有限公司)；氮吹儀(美國Organomation公司)； 旋渦均質器(艾卡(廣州)儀器設備有限公司)； 有機濾膜：0.22μm； 50mL具塞聚丙烯離心管。4-氯苯氧乙酸標準物質：純度98%(上海安譜實驗科技股份有限公司)。甲醇：色譜純(J.T.Baker有限公司)； 乙酸乙酯：色譜純(J.T.Baker有限公司)；氯化鈉：分析純(天津市永大化工有限公司)；甲酸：分析純(成都金山化學試劑有限公司)；氫氧化鈉：分析純(臺山粵僑試劑塑料有限公司)。

1.2 實驗步驟

準確量取5 g粉粹好的豆芽樣品，置于50mL離心管中，加入0.02 mol/L 的氫氧化鈉溶液5 mL，2 g氯化鈉，渦旋振蕩搖勻后加入2滴甲酸溶液再加入10 mL乙酸乙酯溶液，振蕩30 min。以5000 r/min的速度離心2 min。取上清液2 mL 于45 ℃氮吹至干，用1.0mL甲醇溶解，旋渦30秒，過0.22 m有機過濾膜，上機測試。

1.3 儀器條件

1.3.1 液相色譜條件

a)色譜柱：ACQUITY UPLC?BEH C18 2.1mm×50mm×1.7 m Column

b)進樣量：1 L；

c)柱溫：35℃；

d)梯度洗脫程序見表1。

表1 梯度洗脫程序

1.3.2 質譜條件

a)離子源：電噴霧離子源；

b)掃描方式：負離子掃描；

c)檢測方式:多反應監(jiān)測(MRM)；

d) 電噴霧電壓：-4500V；

e)霧化氣壓力：50psi；

f)氣簾氣壓力：30psi；

g)輔助氣流速：50psi；

h)離子源溫度：550 ℃；

j) 定性離子對、定量離子對、采集時間、去簇電壓及碰撞能量見表2。

表2 4-氯苯氧乙酸的質譜參數

*為定量離子對

2 結果與討論

2.1 定性分析

在上述液相色譜-質譜條件下進行測定，試液中待測物質色譜峰保留時間與基質標準工作溶液保留時間偏差在±2.5%以內，各離子的相對豐度應與標準品的相對豐度一致，且樣品中各離子對的相對豐度與濃度接近的基質標準工作溶液中對應的離子對的相對豐度進行比較，偏差不超過表3的規(guī)定的范圍，可判定樣品中存在對應的待測物[8]。

表3 定性測試時相對離子豐度最大允許偏差

在此條件下，4-氯苯氧乙酸的標準溶液液相色譜串聯質多反應監(jiān)測色譜圖如圖1所示。

圖1 4-氯苯氧乙酸的標準溶液液相色譜串聯質多反應監(jiān)測色譜圖

Graphic1 4-Chlorophenoxyaceticacid

2.2 定量分析

采用基質溶液，配制1.0ng/mL,5.0ng/mL,10ng/mL,50ng/mL,100ng/mL工作標準溶液進行上機測試，得到4-氯苯氧乙酸的標準黃線方程為Y=7.73070×104X+7.22673×104，相關系數r=0.99987。

2.3 回收率

稱取6份5.00g(精確至0.01g)不含4-氯苯氧乙酸的豆芽樣品，分別加入濃度為1 g/mL的標準溶液50 L、50 L、100 L、100 L，加入濃度為10 g/mL的標準溶液50 L、50 L。此時添加的4-氯苯氧乙酸相當于0.01、0.01、0.02、0.02、0.1、0.1mg/kg的水平。按處理樣品同樣的方式進行處理，測試。得到的回收率見表4。

表4 4-氯苯氧乙酸回收率

2.4 檢出限

1.0ng/mL(相當于樣品中含量為0.001mg/kg)的4-氯苯氧乙酸的基質標準溶液在此分析條件下的信噪比為22.4，遠遠低于SN/T 3725-2013中關于檢出限為0.01mg/kg(信噪比等于3)的要求。

2.5 結論

按此方法對豆芽中的4-氯苯氧乙酸進行檢測，可以節(jié)省大量的有機溶劑(正己烷、乙酸乙酯)，節(jié)約大量的凈化時間，檢測結果也能滿足標準的對于檢出限、回收率要求。對于一些食品檢測機構檢測樣品多，檢測時間要求緊張的任務來說，此方法不失為一個比較好的選擇。