女寶膠囊氣相特征圖譜

郭美玲，王藝純，孫丹，張紅梅

1.吉林省藥品檢驗(yàn)所，吉林 長春 130033；2.中國人民解放軍空軍航空大學(xué)，吉林 長春 130000；3.吉林大學(xué)第一醫(yī)院二部 藥學(xué)部，吉林 長春 130000

女寶膠囊是由人參、川芎、紅花、桃仁等45味中藥材制成的中藥成方制劑。具有調(diào)經(jīng)止血、溫宮止帶、逐瘀生新的功效；用于治療月經(jīng)不調(diào)、行經(jīng)腰腹疼痛、四肢無力、帶下、產(chǎn)后腹痛等癥[1]。全國共有43家生產(chǎn)企業(yè)、43個(gè)批準(zhǔn)文號(hào)。女寶膠囊的現(xiàn)行國家藥品標(biāo)準(zhǔn)收載于《中華人民共和國衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第五冊(cè)，標(biāo)準(zhǔn)號(hào)為WS3-B-0888-91，該標(biāo)準(zhǔn)中只收載性狀和檢查項(xiàng)，檢驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)極低、檢驗(yàn)指標(biāo)控制不全，遠(yuǎn)不能滿足中藥現(xiàn)代化質(zhì)量控制的要求。目前也有對(duì)女寶膠囊中丹皮酚、丹參酮ⅡA[2]、芍藥苷[3]、延胡索乙素[4]等成分進(jìn)行含量檢測(cè)以及薄層色譜[6]研究的報(bào)道。尚未見對(duì)女寶膠囊中揮發(fā)油類成分的研究。為了對(duì)女寶膠囊質(zhì)量進(jìn)行整體、綜合性控制，參照相關(guān)文獻(xiàn)[3-8]，建立了處方中6味揮發(fā)油類含量高的植物藥材的特征圖譜，并對(duì)特征峰進(jìn)行指認(rèn)。

關(guān)于女寶膠囊品種的研究性文獻(xiàn)較少，其中鑒別主要采用薄層色譜法(TLC)，而含量測(cè)定項(xiàng)主要采用高效液相色譜法(HPLC)。為對(duì)女寶膠囊的揮發(fā)油類成分進(jìn)行整體、綜合性控制，本研究以桂皮醛為參照物，采用氣相色譜法對(duì)處方中的多種組分進(jìn)行分離分析，建立了豆蔻、砂仁、荊芥穗、白術(shù)、肉桂、炮姜的特征圖譜檢查方法，并對(duì)特征峰進(jìn)行指認(rèn)，為女寶膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供了可靠依據(jù)。

1 材料

1.1 儀器

Agilent 7890B氣相色譜儀、FID檢測(cè)器、柱溫箱；BS 124S電子天平(賽多利斯科學(xué)儀器有限公司)。

1.2 試藥

桂皮醛對(duì)照品(中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)：110710-201418)；正己烷(天津市科密歐化學(xué)試劑有限公司，色譜純)；無水硫酸鈉(北京化工廠，分析純)；水為超純水。

女寶膠囊129批。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜柱的選擇及系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

本實(shí)驗(yàn)考察了HP-5(柱長為30 m，內(nèi)徑為0.25 mm，膜厚度為0.25 μm)和DB-FFAP毛細(xì)管柱(柱長為30 m，內(nèi)徑為0.25 mm，膜厚度為0.25 μm)兩根色譜柱，結(jié)果DB-FFAP色譜條件下均能使供試品溶液很好分離，且各色譜峰保留時(shí)間適中。故選用DB-FFAP毛細(xì)管柱作為實(shí)驗(yàn)用色譜柱。

2.2 程序升溫的考察

分別考察了1)初始溫度100 ℃，保持5 min，以6 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min；2)初始溫度100 ℃，保持15 min，以8 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min；3)初始溫度100 ℃，保持15 min，以5 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min。結(jié)果在第2個(gè)程序升溫條件下，供試品溶液中的各主要色譜峰達(dá)到完全分離，互不干擾，分離效果明顯優(yōu)于其他兩個(gè)升溫程序，故選擇其作為本法的升溫程序。

2.3 采集時(shí)間的考察

采用正文擬定的色譜柱程序升溫，精密量取供試品溶液1 μL注入氣相色譜儀，記錄90 min的色譜圖，結(jié)果在50 min之后無色譜峰出現(xiàn)，故確定采集時(shí)間為50 min。

2.4 測(cè)定方法

2.4.1 色譜條件 色譜柱為DB-FFAP毛細(xì)管柱(柱長為30 m，內(nèi)徑為0.25 mm，膜厚度為0.25 μm)；程序升溫：初始溫度100 ℃，保持15 min，以8 ℃·min-1的速率升溫至220 ℃，保持30 min；進(jìn)樣口溫度為240 ℃；檢測(cè)器溫度為250 ℃。理論板數(shù)按桂皮醛峰計(jì)算應(yīng)不低于50 000。

2.4.2 溶液的制備

2.4.2.1 對(duì)照品溶液的制備 取桂皮醛對(duì)照品適量，精密稱定，用正己烷溶解并稀釋制成質(zhì)量濃度為1.0 mg·mL-1的溶液，即得。

2.4.2.2 供試品溶液的制備 取本品粉末約10 g，精密稱定，置圓底燒瓶中，加水200 mL，連接揮發(fā)油測(cè)定器，自測(cè)定器上端加水至刻度3 mL，再加正己烷2～3 mL，連接回流冷凝管，加熱至微沸，并保持2 h，放冷，分取正己烷液，然后用鋪有無水硫酸鈉約1 g的漏斗濾過[8]，濾液置5 mL量瓶中，揮發(fā)油測(cè)定器內(nèi)壁再用少量正己烷洗滌，洗液并入上述量瓶中，用正己烷稀釋至刻度，搖勻，用0.45 μm的微孔濾膜濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4.3 測(cè)定法 分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各1 μL，注入氣相色譜儀，測(cè)定，即得。結(jié)果見圖1～2，供試品溶液的特征圖譜中應(yīng)有16個(gè)特征峰，其中1個(gè)峰應(yīng)與參照物峰的保留時(shí)間相同，且以桂皮醛參照物峰為S峰，計(jì)算其他15個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間，其均應(yīng)在相應(yīng)規(guī)定值的±3%之內(nèi)。規(guī)定值分別為為：0.15(峰1)、0.32(峰2)、0.40(峰3)、0.50(峰4)、0.64(峰5)、0.71(峰6)、0.73(峰7)、0.79(峰8)、1.00(峰S)、1.11(峰9)、1.13(峰10)、1.16(峰11)、1.21(峰12)、1.34(峰13)、1.54(峰14)、1.63(峰15)。

圖1 桂皮醛對(duì)照品溶液色譜圖

注：1.豆蔻；2、5.荊芥穗；3、4、6、7、9、10.砂仁；S.肉桂；8、12、14、15.白術(shù)；11、13.炮姜。圖2 供試品溶液色譜圖

2.5 精密度試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，連續(xù)測(cè)定6次，以桂皮醛峰為參照物峰，分別計(jì)算其他15個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%(n=6)，表明該儀器精密度良好[9]。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取同一份供試品溶液，分別于0、4、8、16、24 h，按照正文擬定的方法進(jìn)行測(cè)定，以桂皮醛峰為參照物峰，分別計(jì)算其他15個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%，表明該方法的穩(wěn)定性良好[9]。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一份供試品6份，精密稱定，按照正文擬定的供試品溶液制備方法分別制備供試品溶液，并進(jìn)行分析測(cè)定，以桂皮醛峰為參照物峰，計(jì)算其他15個(gè)特征峰的相對(duì)保留時(shí)間。結(jié)果各特征峰的相對(duì)保留時(shí)間的RSD均小于1.0%(n=6)，表明該方法的重復(fù)性良好[9]。

3 樣品測(cè)定

按照正文擬定的條件，對(duì)5個(gè)不同生產(chǎn)廠家的129批樣品進(jìn)行分析測(cè)定，結(jié)果見圖3、4。

圖3 5家不同生產(chǎn)企業(yè)樣品特征圖譜

注：A.濟(jì)邦；B.一正；C.雙藥；D.天強(qiáng)。圖4 生產(chǎn)企業(yè)樣品特征圖譜

4 討論

A企業(yè)生產(chǎn)的97批次樣品均未檢出荊芥穗的特征峰，97批次樣品中有47批次未檢出豆蔻的特征峰；C企業(yè)生產(chǎn)的5批次樣品均未檢出荊芥穗和豆蔻的特征峰；D企業(yè)生產(chǎn)的8批次樣品均未檢出荊芥穗特征峰。顯示部分企業(yè)存在不投或少投藥材，使用劣質(zhì)藥材投料的違規(guī)生產(chǎn)行為，或者是藥材的滅菌方式不合理，造成藥材的揮發(fā)性成分的流失。

不同企業(yè)間樣品各特征峰峰面積差異較大，企業(yè)內(nèi)樣品各特征峰峰面積差異不大，表明不同企業(yè)間投料藥材質(zhì)量差異較大，企業(yè)內(nèi)批次間投料藥材質(zhì)量較穩(wěn)定。

本實(shí)驗(yàn)中供試品溶液制備方法考察了乙酸乙酯超聲提取、乙酸乙酯回流提取、揮發(fā)油提取器提取等方法，發(fā)現(xiàn)回流提取樣品溶液過于黏稠，超聲提取圖譜峰整體性差，揮發(fā)油提取器提取揮發(fā)性成分圖譜整體性好，峰數(shù)目多且分離度好，故選取揮發(fā)油提取器提取方法制備供試品溶液。

分別對(duì)女寶膠囊中肉桂、炮姜、白術(shù)、砂仁、荊芥穗、豆蔻6味藥材的揮發(fā)油提取液和相應(yīng)的陰性對(duì)照揮發(fā)油提取液及相應(yīng)的對(duì)照品溶液進(jìn)行氣相圖譜測(cè)定，通過藥材、陰性對(duì)照溶液和對(duì)照品溶液的圖譜，提取出相應(yīng)的藥材特征峰。

文中2.4.3項(xiàng)下給出的供試品溶液色譜圖是按照正常工藝自制小樣分析得出的色譜圖，具有可靠性和代表性，是符合該品種特點(diǎn)的特征性色譜圖。

通過建立女寶膠囊的特征圖譜方法，可以達(dá)到一測(cè)多評(píng)的目的，從整體上對(duì)多味藥材的質(zhì)量進(jìn)行綜合控制，并為女寶膠囊的質(zhì)量評(píng)價(jià)提供可靠的依據(jù)。