HPLC測(cè)定咽炎片中哈巴苷和哈巴俄苷的含量

李懷偉 仝桂平 馬昌豪 張朋 馬海春

【摘 要】目的：建立雙波長(zhǎng)法測(cè)定咽炎片中哈巴苷和哈巴俄苷的含量。方法：色譜柱為Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，3 ?m），柱溫30 ℃。采用梯度洗脫，以乙腈為流動(dòng)相A，0.05 %磷酸為流動(dòng)相B，流速0.6 mL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)210 nm（哈巴苷）、276 nm（哈巴俄苷）。結(jié)果：哈巴苷和哈巴俄苷分別在濃度5.47～164.13 ?g/ml（r=0.9998）、2.00～60.06 ?g/ml（r=0.9993）的范圍內(nèi)，呈良好的線性關(guān)系。哈巴苷和哈巴俄苷平均回收率分別為98.55%、98.40%（n=6），RSD分別為0.80%、0.57%。結(jié)論：該方法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重復(fù)性好，可用于咽炎片的質(zhì)量控制。

【關(guān)鍵詞】HPLC;咽炎片;哈巴苷;哈巴俄苷

【中圖分類號(hào)】R286【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1005-0019（2019）10-0-02

咽炎片由玄參、百部（制）、天冬、牡丹皮、麥冬、款冬花（制）、木蝴蝶、地黃、板藍(lán)根等十二味藥材組成。具有養(yǎng)陰潤(rùn)肺，清熱解毒，清利咽喉，鎮(zhèn)咳止癢的功效。臨床常用于慢性咽炎引起的咽干，咽癢，刺激性咳嗽等癥[1]。玄參為咽炎片的君藥，具有清熱涼血、滋陰降火、解毒散結(jié)等功效[2]。哈巴苷和哈巴俄苷是玄參的兩種主要生物活性成分，我們采用高效液相色譜法測(cè)定了咽炎片中兩種成分的含量，為科學(xué)、規(guī)范的控制咽炎片的內(nèi)在質(zhì)量提供參考依據(jù)。

1材料與方法

1.1 儀器與試藥 （1）儀器：Agilent1260高效液相色譜儀（美國(guó)安捷倫）;XS105 DualRange型十萬分之一天平（METTLER TOLEDO）。

（2）藥品與試劑：乙腈、甲醇、磷酸（色譜純）;哈巴苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111729-201707）;哈巴俄苷（中國(guó)食品藥品檢定研究院，批號(hào)：111730-201709）;咽炎片（市售，批號(hào)1709020Z，1804005Z，1804006Z）。

1.2 方法 （1）色譜條件 色譜柱為Welch Ultimate XB-C18（250 mm×4.6 mm，3 ?m）;柱溫：30 ℃;進(jìn)樣體積20 ?L，檢測(cè)波長(zhǎng)為210 nm（哈巴苷）、276 nm（哈巴俄苷）;以乙腈為流動(dòng)相A，0.05 %磷酸為流動(dòng)相B，進(jìn)行梯度洗脫（0～10min，3%→20% A;10～30min，20%→50%A;30～31min，50%→3%A;31～45，3%A）。

（2）對(duì)照品溶液的制備 精密稱取哈巴苷和哈巴俄苷對(duì)照品各適量，制成每1ml含哈巴苷0.5471 mg、哈巴俄苷0.2002 mg的貯備液;將貯備液稀釋10倍作為混合對(duì)照品溶液。

（3）供試品和陰性樣品溶液的制備 取本品20片，除去包衣，研細(xì)，取約2.0 g，精密稱取，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 ml，稱定重量，超聲處理30 min，冷卻至室溫，用甲醇補(bǔ)足失重，濾過，精密量取續(xù)濾液25ml，加在大孔樹脂柱上（10g，100～200目，內(nèi)徑1 cm），30%甲醇50 ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘?jiān)?0 %甲醇溶解，轉(zhuǎn)移至10 ml容量瓶中，定容，即得。同法處理制備不含玄參的陰性對(duì)照溶液。

2結(jié)果

2.1 專屬性考察 結(jié)果表明，表明哈巴苷、哈巴俄苷為玄參特有成分，其它成分對(duì)其測(cè)定無干擾。

2.2 線性關(guān)系考察 精密吸取上述對(duì)照品貯備液0.10、0.30、0.50、1.00、2.00、3.00ml置10ml容量瓶中，30%甲醇定容至刻度，搖勻;進(jìn)樣測(cè)定，以峰面積為縱坐標(biāo)（y），濃度（μg/ml）為橫坐標(biāo)（x）進(jìn)行線性回歸。哈巴苷和哈巴俄苷的回歸方程分別為y = 13.137 x +10.764（r=0.9999）和y = 92.081x-7.0756（r=0.9992）;分別在5.47～164.13 μg/ml和2.00～60.06 μg/ml范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系。

2.3 精密度試驗(yàn) 取混合對(duì)照品溶液，連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果哈巴苷和哈巴俄苷峰面積的RSD分別為0.05%和0.02%，表明儀器具有良好的精密度。

2.4 重復(fù)性試驗(yàn) 取咽炎片6份，按“1.2”項(xiàng)下（3）方法制備6份供試品溶液，結(jié)果哈巴苷和哈巴俄苷峰面積的RSD分別為0.22%和0.58%。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液，于0，4，8，16，24 h時(shí)進(jìn)樣，結(jié)果哈巴苷和哈巴俄苷峰面積的RSD分別為1.42%和1.05%。

2.6 加樣回收率試驗(yàn) 精密稱取含有量已知的咽炎片1.0 g，共6份，精密加入混合對(duì)照品溶液（哈巴苷0.7521mg/ml，哈巴俄苷0.1302mg/ml）1.00 ml，按供試品溶液制備方法進(jìn)行處理，測(cè)定回收率，結(jié)果哈巴苷和哈巴俄苷平均回收率分別為98.55%和98.40%;RSD分別為0.80和0.57。

2.7 含量測(cè)定 取3批樣品，按上述色譜條件測(cè)定，計(jì)算哈巴苷和哈巴俄苷的含量。

3討論

玄參具有抗炎、調(diào)節(jié)心腦血管功能、免疫調(diào)節(jié)功能等藥理活性[3]，作為咽炎片處方中的主藥，其含量直接影響咽炎片的功效。本研究采用DAD檢測(cè)器雙波長(zhǎng)檢測(cè)法，同時(shí)測(cè)定哈巴苷和哈巴俄苷的含量，該方法專屬性、穩(wěn)定性較好，簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，可為咽炎片的質(zhì)量控制提供參考依據(jù)。

參考文獻(xiàn)

《衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)》中藥成方制劑第二冊(cè)，咽炎片[S].1990：161.

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王鋒，王勝男，朱小燕.中藥玄參研究進(jìn)展[J]飲食保健，2018，5（42）：87-88.