Snail蛋白和細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1在原發(fā)性肝癌中的表達(dá)及與其臨床特征和預(yù)后的相關(guān)性

楊長俊 高興軍

HCC是臨床中常見的惡性腫瘤之一[1]。目前研究認(rèn)為，在眾多的腫瘤增生與侵襲的分子通路中，EMT通路在腫瘤的發(fā)生、進(jìn)展中存在關(guān)鍵作用，Snail蛋白是EMT通路中的關(guān)鍵蛋白之一，而較多文獻(xiàn)提示ECM1在多種惡性上皮腫瘤中出現(xiàn)高表達(dá)，可能與促癌細(xì)胞繁殖、轉(zhuǎn)移有很大相關(guān)性[2-3]。本研究收集了71例HCC患者的各項(xiàng)臨床資料，旨在探討Snail蛋白和ECM1在HCC中的表達(dá)及與其臨床特征和預(yù)后的相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

資料與方法

一、一般資料

選取2012年1月至2013年3月我院收治的71例HCC患者作為研究對(duì)象。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)所有患者均符合診斷符合2015年中國抗癌協(xié)會(huì)肝癌專業(yè)委員會(huì)制定的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)[4]；(2)所有患者均經(jīng)手術(shù)治療且術(shù)后病理學(xué)檢查均確診；(3)本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)；(4)所有患者及家屬均知情同意并簽署知情同意書參與本次研究。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)未進(jìn)行根治性切除術(shù)治療者或者手術(shù)前已行放化療者；(2)出現(xiàn)遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、合并肝性腦病者；(3)除HCC外存在其他惡性腫瘤者；(4)臨床及隨訪資料不完整或缺乏準(zhǔn)確性者。71例HCC中，男性50例，女性21例，年齡27～72歲，平均年齡(52.96±6.15)歲；Child Pugh 分級(jí)：A級(jí)39例，B級(jí)32例。

二、方法

收集71例HCC患者的各項(xiàng)臨床資料，手術(shù)過程中收集癌組織標(biāo)本進(jìn)行甲醛固定、石蠟包埋，同時(shí)采集71份癌旁正常組織作為參照，比較兩者間Snail蛋白和ECM1的表達(dá)水平，分析Snail蛋白和ECM1表達(dá)與HCC臨床病理特征的關(guān)系。對(duì)71例HCC進(jìn)行為期5年的隨訪，隨訪方式包括電話隨訪、短信隨訪、回院復(fù)查等，比較不同表達(dá)水平患者5年生存率，采用Logistic多因素回歸分析影響HCC患者預(yù)后死亡的危險(xiǎn)因素。

三、檢測(cè)與結(jié)果判定

兔抗人ECM1多克隆抗體購自美國Proteintech生物科技有限公司，兔抗人 Snail多克隆抗體來源于福州邁新生物技術(shù)開發(fā)有限公司。細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)明顯棕黃色顆粒者為陽性細(xì)胞。隨機(jī)選取10個(gè)高倍(400)視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)100個(gè)細(xì)胞，共計(jì)1 000個(gè)細(xì)胞。統(tǒng)計(jì)ECM1陽性表達(dá)水平，陽性判斷：將陽性染色細(xì)胞數(shù)<10%定義為陰性，≥10%定義為陽性。Snail以細(xì)胞核或細(xì)胞質(zhì)出現(xiàn)棕黃色染色為陽性細(xì)胞，PBS代替一抗為陰性對(duì)照，嚴(yán)格按試劑盒說明書、技術(shù)規(guī)范手冊(cè)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)操作。

四、 統(tǒng)計(jì)方法

結(jié) 果

一、兩種組織標(biāo)本中Snail蛋白和ECM1表達(dá)情況

71例患者癌組織Snail蛋白陽性47例、表達(dá)率為66.19%，明顯高于癌旁組織26例(36.61%)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=12.432，P<0.05)；ECM1在癌組織陽性56例(78.87%)，明顯高于癌旁組織12例(χ2=54.633，16.90%)，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

二、 Snail蛋白和ECM1表達(dá)與肝癌患者不同臨床特征的關(guān)系

Snail蛋白在不同年齡、性別、腫瘤直徑中的表達(dá)情況無明顯差異(P>0.05)，ECM1在不同年齡、性別、腫瘤直徑、肝硬化、腫瘤直徑中的表達(dá)情況無明顯差異(P>0.05)；Snail蛋白在病理分期、微血管侵犯、肝硬化中其表達(dá)情況存在明顯差異(P<0.05)；ECM1在病理分期、微血管侵犯中其表達(dá)情況存在明顯差異(P<0.05)，見表1。

三、 71例HCC患者預(yù)后情況

隨訪5年結(jié)束后，Snail蛋白表達(dá)陽性、表達(dá)陰性者5年總生存率分別為21.27%(10/47)、37.50%(9/24)；ECM1表達(dá)陽性、表達(dá)陰性者5年總生存率分別為19.64%(11/56)、33.33%(5/15)，不同Snail蛋白、ECM1表達(dá)水平HCC患者5年總生存率比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.001)。

經(jīng)非條件多因素Logistic回歸模型結(jié)果顯示：病理分期(Ⅲ期)、腫瘤直徑(>5cm)、微血管侵犯(有)、 Snail蛋白(陽性)、ECM1(陽性)均為影響HCC患者預(yù)后的獨(dú)立危險(xiǎn)因素(P<0.001)，見表2。

表1 Snail蛋白和ECM1表達(dá)與肝癌患者不同臨床特征的關(guān)系

表2 影響HCC患者預(yù)后的多因素分析

討 論

信號(hào)分子轉(zhuǎn)錄因子在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中起到了主要作用，間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化是影響人體心臟、外周神經(jīng)系統(tǒng)及生理過程傷口愈合的主要機(jī)制之一，當(dāng)人體出現(xiàn)病理改變后，間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)分化機(jī)制可使引起一系列分子和細(xì)胞事件，其中包括影響轉(zhuǎn)錄因子Snail蛋白[5]。本組研究中發(fā)現(xiàn)肝癌組織Snail蛋白陽性表達(dá)率明顯高于癌旁組織，與ECM1同為影響HCC患者預(yù)后的危險(xiǎn)因素，與既往文獻(xiàn)報(bào)道相似，事實(shí)上Snail蛋白可促進(jìn)上皮細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞的轉(zhuǎn)化，對(duì)于其通路的特征性，Snail蛋白可能作為腫瘤逆轉(zhuǎn)的有效靶向[6]。

ECM1首次的出現(xiàn)是在1994年，自老鼠成骨機(jī)制細(xì)胞系MN7中分離出來的一種分泌性糖蛋白，參與多類生物學(xué)過程，其中包括促細(xì)胞增殖機(jī)制，同時(shí)在各類惡性腫瘤中呈現(xiàn)高表達(dá)[7]。既往多類動(dòng)物研究實(shí)驗(yàn)[8]對(duì)肝癌細(xì)胞和組織分析后發(fā)現(xiàn)，無論是在細(xì)胞或組織中ECM1在肝癌的蛋白、基因表達(dá)水平都明顯高于其他正常組織，與本組研究結(jié)果相似，同時(shí)，本組研究認(rèn)為ECM1高表達(dá)的患者預(yù)后較差，相對(duì)于低表達(dá)的肝癌患者，更易病情惡化并出現(xiàn)不良預(yù)后。

綜上所述，Snail蛋白和ECM1在HCC中表達(dá)陽性率高于癌旁組織，Snail蛋白和ECM1表達(dá)陽性者預(yù)后較差。本組研究存在不足之處為研究樣本數(shù)量較低，研究結(jié)論仍然需要進(jìn)一步探討。