子宮肌瘤組織中葡萄糖轉運蛋白1及硫酸基轉移酶1A3表達及其臨床意義

陸欣怡 聞先萍 丁華峰 倪觀太

皖南醫(yī)學院附屬弋磯山醫(yī)院(蕪湖，241001)

子宮肌瘤常見于30～50歲婦女，有些患者無自覺癥狀，部分患者甚至終生未發(fā)覺患病，故臨床發(fā)病率遠低于實際[1]。目前，子宮肌瘤發(fā)病機制尚未探明，可能涉及到正常肌層的細胞突變、性激素及局部生長因子間的較為復雜的相互作用[2]。葡萄糖轉運蛋白1(Glut-1)主要介導細胞中葡萄糖轉運過程，在腫瘤能量代謝中扮演關鍵角色[3]。研究顯示，子宮肌瘤是激素依賴性腫瘤，雌激素是促使肌瘤生長的主要因素。硫酸基轉移酶(SULTs)為介導神經遞質、甾體激素等內源性因子及藥物制劑等外源性復合物硫酸化反應關鍵酶[4]。硫酸基轉移酶1A3(SULT1A3)被證實與雌激素合成代謝密切相關。為此，本研究通過檢測子宮肌瘤組織中Glut-1、SULT1A3蛋白表達情況，探討其與患者臨床病理特征關系以及發(fā)病相關性。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2019年2月-2021年2月本院收治行子宮肌瘤剔除術患者(肌瘤組)臨床資料。納入標準：①經術后病理確診，月經周期正常；②年齡30～55歲；③單發(fā)肌瘤。排除標準：①合并心、肝、腎嚴重功能障礙；②近6個月接受激素類藥物、放療、化療治療；③合并惡性腫瘤；④甲狀腺功能異常、免疫系統(tǒng)疾??；⑤合并糖尿??；⑥妊娠、哺乳期；⑦肌瘤復發(fā)。同期因子宮脫垂行全子宮切除術患者(對照組)，無其他子宮病變。本研究經本院倫理委員會審批。

1.2 實驗方法

1.2.1取材留存兩組術中切除病理組織(肌瘤組為肌瘤結節(jié)中央處組織，對照組為正常肌層組織)標記，石蠟包埋，-70℃待檢。

1.2.2主要試劑磷酸緩沖液(PBS)、10%山羊血清封閉液、辣根過氧化物酶(HRP)、二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑均購自北京中杉金橋生物技術有限公司；兔抗人Glut-1多克隆抗體購自上海萬疆生物技術有限公司，兔抗人SULT1A3多克隆抗體購自Abnova公司；廣譜免疫組織化學檢測試劑盒(SP法)購自深圳子科生物科技有限公司。

1.2.3免疫組化檢測采用免疫組織化學SP法檢測待測標本中Glut-1、SULT1A3蛋白表達。

1.2.4結果判讀由2位經驗豐富病理科醫(yī)生雙盲法單獨閱片，Glut-1蛋白主要定位于細胞核，細胞質或細胞核出現棕黃色顆粒視為陽性表達[5]；SULT1A3蛋白主要定位于細胞漿，細胞質或胞漿內出現棕黃色顆粒視為陽性表達。Glut-1、SULT1A3蛋白均以陽性細胞占比與染色強度評分乘積行半定量綜合評估。見表1。

表1 Glut-1、SULT1A3蛋白表達評分標準

1.3 統(tǒng)計學方法

數據采用SPSS 22.0處理。計數資料以(%)表示，比較行χ2檢驗；相關性采用Kendall相關分析。P<0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 一般臨床資料

肌瘤組90例，年齡(42.7±10.6)歲(30～55歲)，體質指數(BMI)(22.6±2.7)kg/m2，國際婦產科聯(lián)盟(FIGO)分型1型55例、2型35例；對照組78例，年齡(43.6±10.7)歲(32～54歲)，BMI(22.7±2.7)kg/m2。兩組年齡、BMI無差異(P>0.05)。

2.2 Glut-1、SULT1A3蛋白在組織中表達

免疫組化結果顯示，在肌瘤組織中Glut-1蛋白表達高于正常肌層組織，ULT1A3蛋白表達低于正常肌層組織(P<0.05)。見表2。

表2 兩種蛋白在不同組織中表達比較[例(%)]

2.3 Glut-1、SULT1A3蛋白與子宮肌瘤患者臨床病理特征關系

結果顯示，Glut-1、SULT1A3蛋白在不同年齡、BMI、肌瘤直徑的子宮肌瘤患者肌瘤組織中表達均無差異(P>0.05)，但在FIGO 2型患者肌瘤組織中高表達(P<0.05)；Glut-1蛋白在非絕經患者肌瘤組織中高表達，SULT1A3蛋白在絕經患者肌瘤組織中高表達(P<0.05)。見表3。

表3 兩種蛋白與子宮肌瘤患者臨床病理特征關系[例(%)]

2.4 子宮肌瘤組織中Glut-1蛋白與SULT1A3蛋白表達相關性

Kendall相關分析顯示，子宮肌瘤組織中Glut-1蛋白與SULT1A3蛋白表達呈顯著負相關(r=-0.577，P<0.001)。

3 討論

子宮肌瘤系臨床最常見女性良性腫瘤。目前研究認為，子宮肌瘤發(fā)病和泌乳素、孕激素、雌性激素等有關，激素療法治療療效不佳，表明子宮肌瘤發(fā)病除與激素刺激有關外，還可能與其他因素相互作用有關[7-8]。本研究采用免疫組織化學法檢測子宮肌瘤組織中Glut-1、SULT1A3蛋白表達情況，并探討兩種蛋白與子宮肌瘤患者臨床病理特征及兩種蛋白表達相關性，以期為Glut-1、SULT1A3蛋白對子宮肌瘤發(fā)病影響作出合理解釋。

眾所周知，腫瘤細胞生長需要大量能量供給，而葡萄糖為腫瘤細胞主要能量來源。既往研究證實，葡萄糖被細胞吸收過程中需葡萄糖轉運蛋白(Gluts)參與，而目前已知Gluts中以Glut-1作用最為重要[9]。多項研究指出，Glut-1在結直腸癌、乳腺癌、肝癌、肺癌、胃癌、卵巢癌等常見惡性腫瘤中呈高表達[10-11]。而惡性腫瘤細胞異常增值導致腫瘤局部缺氧，無氧環(huán)境下糖酵解產生的三磷酸腺苷(ATP)含量極低，腫瘤細胞需過量表達Glut-1以滿足自身能量需求，而糖酵解過程中間產物能合成核酸、脂肪酸等，調節(jié)生物合成及細胞代謝過程，從而介導腫瘤細胞增殖、侵襲過程。因此，Glut-1已成為多種惡性腫瘤潛在治療靶點之一[12]。本研究結果表明，相較于正常肌層組織，肌瘤組織中Glut-1蛋白表達升高，提示可能與子宮肌瘤發(fā)病有關；進一步分析發(fā)現，Glut-1蛋白表達不受患者年齡、BMI、肌瘤直徑影響，而與患者FIGO分型及絕經狀態(tài)有關。究其原因：FIGO分型越高，組織分化程度越低，腫瘤細胞所需能量越高，因而Glut-1表達量升高；子宮肌瘤為激素依賴性腫瘤，雌激素為調控肌瘤生長重要因素，而絕經后雌激素分泌停止，對肌瘤生長促進作用減弱，腫瘤細胞所需能量減少，因而Glut-1表達量降低。

SULT1A3主要參與多種化合物硫酸化反應[13]。SULT1A3基因主要表達于腦、肺、胃腸、腎、血小板組織內，還參與雌激素及其類似物代謝過程[14]。朱悅等[15]檢測子宮肌瘤及子宮正常組織中SULT1A3表達，發(fā)現子宮肌瘤患者SULT1A3的mRNA相對表達量、蛋白灰度值、蛋白表達量均低于子宮正常者。本研究與其結果一致，肌瘤組織中SULT1A3蛋白表達量低于正常肌層組織，說明SULT1A3表達量降低可能與子宮肌瘤發(fā)病有關；進一步分析發(fā)現，SULT1A3在子宮肌瘤組織中表達與患者年齡、BMI、肌瘤直徑無關，而與患者FIGO分型及絕經狀態(tài)有關。分析原因：FIGO分型越高，絕經狀態(tài)下雌激素停止分泌，而SULT1A3為調節(jié)雌激素代謝關鍵酶之一，因而使得SULT1A3活性降低、表達減少。

此外，本研究相關分析發(fā)現Glut-1蛋白與SULT1A3蛋白在子宮肌瘤組織中表達呈負相關，對子宮肌瘤發(fā)病起相反作用。分析可能機制：子宮肌瘤為激素依賴性腫瘤，ERα為雌孕激素主要受體，正常子宮組織內ERα水平較低，而在子宮肌瘤組織中ERα水平升高；SULT1A3蛋白水平升高可降低ERα水平，從而抑制子宮肌瘤生長，而Glut-1蛋白水平升高會促進ERα水平表達，從而促進子宮肌瘤生長，因而Glut-1蛋白與SULT1A3蛋白在子宮肌瘤發(fā)病過程中呈現負相關表達關系。

綜上所述，較正常肌層組織子宮肌瘤組織中Glut-1蛋白表達升高，而SULT1A3蛋白表達降低，且兩者表達與患者FIGO分型及絕經狀態(tài)相關，有望成為子宮肌瘤治療新靶點之一。本研究雖比較了Glut-1、SULT1A3蛋白在不同組織及不同臨床病理特征患者間表達情況，但未在細胞層面進行研究，且納入樣本量較少，后續(xù)需大樣本、多層面研究予以證實。