柴胡的真?zhèn)舞b別※

謝嘉馳 李亞蘭 彭江麗 肖冰梅* 王 興*

（1 湘潭市中醫(yī)醫(yī)院藥學(xué)部，湖南 湘潭 411100；2 湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院，湖南 長沙 410208）

柴胡為傘形科植物柴胡 Bupleurum chinense DC.或狹葉柴胡 Bupleurum scorzoneri folium Willd.的干燥根。根據(jù)性狀區(qū)分，我們將其稱為“北柴胡”和“南柴胡”。柴胡［1］首次記載于在《神農(nóng)本草經(jīng)》，具有和解退熱，疏肝解郁，升提中氣功效，臨床應(yīng)用廣泛。其入湯劑有用來治療寒熱往來感冒的小柴胡湯，治療肝郁血虛導(dǎo)致月經(jīng)不調(diào)的逍遙散。《中國植物志》中記載，我國柴胡屬（Bupleurum） 植物多達 36種。近年由于柴胡在臨床上使用量增大，產(chǎn)量低，正品柴胡常常不能滿足市場的需求，導(dǎo)致多種柴胡的混偽品進入了藥材銷售市場［2］。為保證臨床上患者用藥安全及藥效質(zhì)量，對高橋藥材市場購買的樣品進行系統(tǒng)的鑒別研究。通過對樣品與正品柴胡在性狀特征、顯微特征及理化反應(yīng)進行系統(tǒng)對比研究，以確定該柴胡的真?zhèn)?，為柴胡的真?zhèn)舞b別提供簡便可行的實驗研究方法，為臨床用藥提供可靠依據(jù)。

1 儀器、試劑與材料

1.1 儀器 顯微鏡（廠家：Motic型號：BA210LED）；培養(yǎng)皿；剪刀；刀片；牛角勺；濾紙；載玻片；蓋玻片；鑷子；解剖針；文具盒；酒精燈；打火機；粉碎機；玻璃燒杯；試管；膠頭滴管；25 mL量筒；10 mL量筒；水浴鍋。

1.2 試劑 水合氯醛液；稀甘油；甲醇；蒸餾水；95%乙醇；冰醋酸；硫酸；對二甲氨基甲醛；磷酸。

1.3 材料 從高橋藥材市場采購柴胡藥材，由湖南中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院中藥鑒定學(xué)教研室肖冰梅老師鑒定均符合《中國藥典》2015年版項下規(guī)定。

2 方法

取樣品和柴胡飲片分別用蒸餾水浸泡 24 h，待其充分吸水膨脹時及時取出按常規(guī)制片法制作組織橫切片，用水合氯醛透化后置于顯微鏡下觀察。取中藥材，烘箱干燥后，用打粉機打成粉末并過100目篩網(wǎng)以備用。分別取適當粉末制成透化裝片置于顯微鏡下觀察并記錄比較兩者間的顯微特征。取樣品粉末和正品柴胡粉末各進行理化鑒別反應(yīng)。

2.1 徒手切片法 取已被蒸餾水浸泡過的藥材，選擇合適的部位，將其兩端削平；注意手拿刀片的姿勢，防止使用不當造成刀片損傷手指。切片時刀片應(yīng)與材料相垂直并且應(yīng)用臂力切片，若使用腕力，則很難切得均勻透明。切的過程中刀片不能離開食指，否則易造成厚薄不均，注意動作要敏捷迅速，不能中途停頓或是做拉鋸式切割。將刀片上的切片移入盛有水的培養(yǎng)皿中，選取較薄且完整均勻的切片置于載玻片上；在滴加適量的水合氯醛液后于點燃的酒精燈上加熱，當水合氯醛液因加熱而減少時，及時用膠頭滴管添加，重復(fù)數(shù)次直至切片透化完成；滴加 1～2滴稀甘油，用鑷子夾取潔凈蓋玻片，從左至右沿液面輕輕覆蓋，以防氣泡產(chǎn)生影響觀察。蓋玻片外溢出的的液體用吸水紙輕輕吸去，置于顯微鏡下觀察。

2.2 水合氯醛法 用牛角勺取適量樣品粉末和正品粉末置于載玻片上，滴加水合氯醛液1～2滴后在點燃的酒精燈上邊加熱邊用解剖針適當攪拌，這樣可使裝片受熱均勻防止沸騰。當試液因加熱漸漸揮干時，再次滴加水合氯醛液1～2滴，反復(fù)數(shù)次，透化完成后，用鑷子夾取干凈無水的蓋玻片沿液面從左至右覆蓋，保證試液充滿蓋玻片下方并無氣泡。

2.3 泡沫反應(yīng) 取樣品粉末和柴胡粉末各 0.5 g，分別置于具塞試管中，加水10 mL，用力振搖，觀察現(xiàn)象。

2.4 顯色反應(yīng) （1）取樣品粉末和柴胡粉末各1 g，加入10 mL冰醋酸，浸提12 h后過濾，將濾液置于干燥潔凈的試管中，各緩緩加入濃硫酸 0.5 mL，觀察現(xiàn)象［3］。（2）取用水潤軟的樣品飲片和正品柴胡飲片，切取橫切片，用膠頭滴管滴加配比好的硫酸和無水乙醇的等量混合液 1滴，觀察現(xiàn)象［3］。（3） 取樣品粉末和柴胡粉末各0.5 g，分別加10 mL甲醇，用力振搖后再靜置30 min，過濾，各取0.5 mL濾液于干燥潔凈的試管中，分別滴加0.5 mL的對二甲氨基甲醛的甲醇溶液（1∶30），搖勻后再滴加2 mL磷酸，水浴加熱，加熱時溫度不宜太高，觀察現(xiàn)象［3］。

3 結(jié)果

3.1 性狀鑒別 樣品飲片外觀呈現(xiàn)為長圓柱形，直徑較小，彎曲。根頭部明顯可見膨大，并有較多支根、根頭部殘留多數(shù)莖基和葉基。飲片長約為5～7 cm，直徑約為0.3～0.6 cm。飲片外表皮為灰褐色或黑褐色，摸起來粗糙。質(zhì)地較松脆，折斷后較平坦，可見片狀纖維性。皮部較薄，且易與木部分離。氣微香，味微苦［4］。

正品柴胡飲片外觀呈圓柱形，部分有分支，直徑0.3～0.8 cm。根頭部的膨大不明顯，頂端留有莖基和葉基。飲片外表面為淺棕色或黑褐色，外表皮可見縱皺紋和支根痕。質(zhì)地較硬，有韌性，因此不易折斷，斷面可見片狀纖維性。皮部和木部顏色有較大區(qū)別，一為淺棕色，二為黃白色。氣微香，味微苦［4］。如圖1～3。

圖1 正品

圖2 樣品

圖3 樣品

3.2 橫切面顯微特征 正品：木栓層下有7層栓內(nèi)層細胞；皮層散有油管；韌皮部有紅棕色或黃棕色油腔；形成層成環(huán)；木質(zhì)部面積占整個根部面積約為2/3，導(dǎo)管徑向排列，木纖維群排列成多個不連續(xù)的環(huán)狀［2］。

樣品：木栓層由眾多數(shù)列細胞構(gòu)成；皮層分布有油管；韌皮部油管數(shù)目眾多，排列散在，大小不一；木質(zhì)部面積占比較小，導(dǎo)管徑向排列。如圖4～7。

圖4 正品

圖5 正品

圖6 樣品

圖7 樣品

3.3 粉末顯微特征 正品：粉末偏黃棕色；木纖維眾多，多呈長梭形，，木化較明顯；管道中含黃棕色分泌物；木栓細胞大部分為黃棕色，偶見數(shù)層重疊，表面觀一般呈類多角形，壁較厚；主要為網(wǎng)紋導(dǎo)管，偶見雙螺紋導(dǎo)管；薄壁細胞多呈長圓形，類長方形［5］。

樣品：粉末偏灰棕色；纖維較少，呈末端鈍圓的長梭形；油管多是破斷的，管道中含有棕色油狀分泌物；多為網(wǎng)紋導(dǎo)管和梯紋導(dǎo)管；薄壁細胞呈長圓形；木栓細胞排列緊密，無色或黃棕色，呈類多角形［6］。如圖8～13。

表1 柴胡與偽品區(qū)別

圖8 正品木纖維

圖9 正品油管和導(dǎo)管

圖10 正品薄壁細胞

圖11 樣品木栓細胞

圖12 樣品導(dǎo)管

圖13 樣品薄壁細胞

3.4 泡沫反應(yīng) 振搖后均產(chǎn)生蜂窩狀泡沫，樣品產(chǎn)生的泡沫明顯較對照品少。靜置，樣品泡沫明顯減少，五分鐘后泡沫基本消失，而對照品產(chǎn)生持久性泡沫，基本沒有變化，如圖 14～15。

圖14 左為樣品，右為對照品

圖15 左為樣品，右為對照品

3.5 顯色反應(yīng) 2.4.1項下，正品柴胡在液面交接處呈現(xiàn)紅棕色環(huán)，放置后呈深棕色。而樣品無該現(xiàn)象。2.4.2項下，正品柴胡初顯黃綠色，5～10 min后由黃綠色變?yōu)樗{色，1 h后變?yōu)樯钏{色，最后消失。而樣品無該現(xiàn)象。2.4.3項下，正品柴胡水浴加熱后溶液出現(xiàn)淡紅紫色。而樣品無該現(xiàn)象。

4 小結(jié)

根據(jù)理化實驗結(jié)果（表1） 和相關(guān)文獻［4］，鑒定該偽品為傘形科的小葉黑柴胡。正品與偽品柴胡其藥理活性成分不同，臨床治療效果差異明顯。進一步證明目前市場上存在偽柴胡混淆用藥，危害患者的安全性，政府要加大對其監(jiān)控力度，維護市場秩序。