金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠的降血脂作用

李 依， 王洪新，2， 賈啟海， 何國華， 呂文平*

（1．江南大學(xué) 食品學(xué)院，江蘇 無錫 214122；2．江南大學(xué) 國家功能食品工程技術(shù)研究中心，江蘇 無錫 214122；3．貴州赤水國禮金釵石斛發(fā)展有限公司，貴州 遵義 564700；4．貴州省赤水市金釵石斛產(chǎn)業(yè)開發(fā)有限公司，貴州 遵義564700）

高脂血癥是一種脂質(zhì)代謝紊亂疾病，是動脈粥樣硬化的主要發(fā)病因素之一。降低血清內(nèi)脂質(zhì)含量是治療高脂血癥的主要任務(wù)[1]。目前市場上降血脂的西藥種類很多，但大多存在一定不良反應(yīng)[2-3]，而中草藥的降脂作用得到了廣泛的關(guān)注和重視[4-5]。

金釵石斛（D.nobile Lindl.）為蘭科（Orchidaceae）石斛屬（Dendrobium Sw.），是我國傳統(tǒng)名貴中藥。本草綱目記載:金釵石斛可強(qiáng)陰益精，厚腸胃，壯筋骨，暖水臟，補(bǔ)腎益力，輕身延年，主要以新鮮或干燥的莖入藥?，F(xiàn)代研究證明，金釵石斛水提物具有免疫調(diào)節(jié)[6]、抗腫瘤[7]、抗白內(nèi)障[8]、降血糖[9]等作用。目前對金釵石斛水提物降血脂作用的研究報道很少，為此本研究通過建立高脂血癥大鼠模型，考察金釵石斛水提物降血脂能力，從而探討金釵石斛成為高血脂及肥胖人群日常保健品的可行性，為進(jìn)一步開發(fā)以金釵石斛為原料的降血脂類保健品提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 藥物

金釵石斛，三年生，貴州赤水國禮金釵石斛有限責(zé)任公司產(chǎn)品，經(jīng)無錫市南長區(qū)執(zhí)業(yè)中醫(yī)師凌一平老中醫(yī)鑒定為金釵石斛。

1.2 動物及飼料

健康成年雄性Wistar大鼠 （150~200 g）32只，蘇州斯萊克有限責(zé)任公司提供?；A(chǔ)飼料:江蘇協(xié)同生物工程有限公司提供；高脂飼料（質(zhì)量分?jǐn)?shù)）:基礎(chǔ)飼料45.6%，膽固醇1.2%，豬油 15.0%，蔗糖20.0%，膽酸鈉（豬膽鹽）0.2%，酪蛋白8.0%，全脂奶粉6.0%，磷酸氫鈣2.0%，實(shí)驗(yàn)動物預(yù)混料2.0%。飼養(yǎng)條件:飼養(yǎng)期間大鼠自由飲水，12 h晝夜交替，溫度（23±2）℃，濕度（60±5）%，籠具及墊料定期更換。

1.3 試劑

甘油三酯（TG）、總膽固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL-C）、高密度脂蛋白（HDL-C）、天門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶 （SOD）、過氧化氫酶（CAT）、谷胱甘肽過氧化物酶 （GSH-Px）、總酯酶（PHPA）、總膽汁酸試劑盒，購于南京建成生物工程研究所；其他試劑均為國產(chǎn)分析純。

1.4 儀器

酶標(biāo)儀，北京普朗新技術(shù)有限公司產(chǎn)品；UV-紫外分光光度計，上海尤尼柯有限公司產(chǎn)品；HH-4恒溫水浴鍋，常州容冠實(shí)驗(yàn)分析儀器廠產(chǎn)品；BS124S型分析天平，北京賽多利斯儀器系統(tǒng)有限公司產(chǎn)品。

1.5 實(shí)驗(yàn)方法

1.5.1 金釵石斛水提物的制備 金釵石斛用25倍量的蒸餾水進(jìn)行熱回流提取2次，溫度70℃，提取時間150 min，合并2次提取液，60℃旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮，冷凍干燥得到干粉為金釵石斛水提物。經(jīng)測定，水提物中多糖質(zhì)量分?jǐn)?shù)為28.71%，生物堿質(zhì)量分?jǐn)?shù)為1.30%，總酚質(zhì)量分?jǐn)?shù)為14.37%。

1.5.2 治療性高血脂癥大鼠模型的建立及分組 取健康Wistar大鼠32只，以普通飼料適應(yīng)性飼養(yǎng)1周后，按體重隨機(jī)分為正常（空白）對照組、模型對照組、金釵石斛水提物低劑量組、金釵石斛水提物高劑量組，每組8只。空白對照組給予普通飼料喂養(yǎng)，其他組均給予高脂飼料。30 d后，金釵石斛水提物低、高劑量組開始灌胃受試品，以水為溶劑配制灌胃受試品，每天灌胃1次，每周定期稱重更換1次劑量?？瞻讓φ战M和模型對照組每天灌胃同等劑量的生理鹽水。連續(xù)給藥30 d。

1.5.3 血脂的測定 末次給藥后大鼠禁食不禁水12 h，用4 g/dL水合氯醛腹腔注射大鼠，麻醉后腹主動脈取血，室溫下3 000 r/min離心10 min，獲得血清，-20℃保存。按照試劑盒說明書測定血清TC、TG、LDLC、HDLC、AST 和 ALT 含量。

1.5.4 臟器指數(shù)和體脂含量的測定 大鼠麻醉取血后迅速取出肝臟、腎臟、脾臟、腎周脂、睪周脂，在預(yù)冷生理鹽水中清洗后濾紙吸干，稱量質(zhì)量，計算臟器指數(shù)和體脂含量。

1.5.5 肝組織血脂測定及病理切片的制備 肝臟中 MDA、SOD、CAT、GSH-Px、PHPA 含量測定根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作；肝臟組織在體積分?jǐn)?shù)10%甲醛溶液中充分固定后，經(jīng)過梯度脫水，石蠟包埋，切片，撈片、烤片、脫蠟、復(fù)水、蘇木素-伊紅（HE）染色、清洗、晾片、封片等一系列步驟，在光學(xué)顯微鏡下觀察組織結(jié)構(gòu)及病理變化。

1.5.6 糞便中TC、TG及總膽汁酸的測定 大鼠糞便冷凍干燥后嚴(yán)格按照試劑盒的說明書進(jìn)行操作。

2 結(jié)果與討論

2.1 對大鼠體質(zhì)量的影響

實(shí)驗(yàn)前大鼠的體質(zhì)量比較均衡，各組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P＞0.05）。在飼養(yǎng)的8周內(nèi)，各組大鼠的體質(zhì)量呈增長趨勢，高脂模型組大鼠的體質(zhì)量較正常對照組增長快。從第2周開始，空白對照組大鼠和高脂模型組大鼠體質(zhì)量開始有顯著性差異 （P＜0.05），但各高脂組大鼠的體重?zé)o統(tǒng)計學(xué)差異。在第6周之后，金釵石斛水提物低、高劑量組大鼠體質(zhì)量與高脂模型組大鼠體質(zhì)量呈現(xiàn)顯著性差異 （P＜0.05），說明金釵石斛水提物可以減弱由于高脂飲食引發(fā)的體質(zhì)質(zhì)量增加現(xiàn)象，結(jié)果見圖1。

圖1 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠體質(zhì)量的影響（n=8，）Fig.1 Effects of DNAE on body weight of hyperlipidemic rats（n=8，

2.2 對大鼠各個臟器指數(shù)的影響

金釵石斛對腎、脾指數(shù)影響不大，對肝、腎周脂、睪周脂影響較大。高脂飼料會引起肝指數(shù)，腎周脂和睪周脂指數(shù)升高，在灌胃金釵石斛水提物后可以改善這種變化。和空白對照組比較，高脂模型組的肝、腎周脂、睪周脂指數(shù)升高（P＜0.05），與高脂模型組比較，金釵石斛水提物低、高劑量可以顯著降低以上臟器指數(shù)（P＜0.05），結(jié)果見表1。

表1 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠臟器指數(shù)的影響（n=8，）Table 1 Effects of DNAE on LW/BW，SW/BW，KW/BW，PFW/BW，EFW/BW of hyperlipidemic rats（n=8，

表1 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠臟器指數(shù)的影響（n=8，）Table 1 Effects of DNAE on LW/BW，SW/BW，KW/BW，PFW/BW，EFW/BW of hyperlipidemic rats（n=8，

注:同列數(shù)值標(biāo)有不同字母表示各組具有顯著性差異（P＜0.05），相同字母表示差異不顯著（P＞0.05），下同

組別空白對照組模型組水提物高劑量組水提物低劑量組肝比2.96±0.11a 3.75±0.06c 3.48±0.09b 3.39±0.06b脾比0.17±0.01b 0.16±0.00ab 0.16±0.00ab 0.16±0.00ab腎比0.65±0.03a 0.56±0.02a 0.56±0.01a 0.59±0.32a腎周脂比2.30±0.21a 3.51±0.16c 3.23±0.16bc 2.93±0.08b睪周脂比2.89±0.29a 3.78±0.15c 3.45±0.08b 3.24±0.10ab

2.3 對大鼠血清脂質(zhì)濃度的影響

與空白對照組比較，高脂模型組大鼠血清的TC、TG 和 LDL-C 濃度都有顯著升高 （P＜0.05），HDL-C濃度顯著降低（P＜0.05），表示高脂模型造模成功。與高脂模型組比較，金釵石斛水提物低、高劑量組血清TG、LDL-C顯著降低，HDL-C顯著升高（P＜0.05），血清TC雖有降低，但無顯著差異 （P＞0.05）。說明金釵石斛水提物能夠降低血清TG和LDL-C，升高HDL-C，對TC也有一定作用。由此可知，金釵石斛水提物能夠有效降低高脂大鼠血清TG、TC、LDL-C的濃度，升高 HDL-C的濃度，結(jié)果見表2。

2.4 對大鼠血清AST、ALT活性的影響

與空白對照組比較，高脂模型組ALT、AST明顯升高（P＜0.05），其他2個給藥組無顯著差異；與高脂模型組比較，金釵石斛水提物低、高劑量組ALT活性及低劑量組AST活性顯著降低（P＜0.05），高劑量組AST活性有降低但無顯著差異。表明低、高劑量組能夠降低高脂大鼠血清AST、ALT活性。結(jié)果見表3。

表2 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠血清脂質(zhì)濃度的影響（n=8，x±s）Table 2 Effects of DNAE on lipid levels in serum of hyperlipidemic rats（n=8，x±s）

表3 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠血清AST、ALT活性的影響（n=8，）Table 3 Effects of DNAE on AST and ALT activities in serum of hyperlipidemic rats（n=8，）

表3 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠血清AST、ALT活性的影響（n=8，）Table 3 Effects of DNAE on AST and ALT activities in serum of hyperlipidemic rats（n=8，）

組別ALT/（U/gprot）AST/（U/L）空白對照組10.01±6.35bc 13.34±3.12a模型組15.76±2.67a 18.23±3.20c水提物高劑量組13.71±2.15bc 14.95±1.02ab水提物低劑量組12.95±2.20cd 15.43±0.74abc

2.5 對大鼠肝臟MDA含量和SOD、CAT、GSHPx活性的影響

高脂誘導(dǎo)造模后，與正常組比較，高脂模型組大鼠肝臟的SOD、GSH-Px、CAT活性均低于正常組，MDA含量高于正常組；與高脂模型組比較，低、高劑量組肝臟 SOD、GSH-Px、CAT活性升高 （P＜0.05），MAD 含量降低（P＜0.05）。 結(jié)果見表 4。

2.6 對大鼠肝臟LPL、HL和PHPA活性的影響

實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，高脂模型組大鼠肝臟LPL、HL及總酯酶活性降低，與空白對照組和高脂模型組比較，低、高劑量組大鼠酯酶活性均顯著升高 （P＜0.05）。這說明金釵石斛水提物可以通過增加酯酶活性提高肝臟內(nèi)脂質(zhì)的代謝作用。結(jié)果見表5。

表4 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠肝臟MDA含量和SOD、CAT、GSH-Px活性的影響（n=8，Table 4 Effects of DNAE on the activities of SOD，GSH-Px，CAT and the content of MDA in liver of hyperlipidemic rats（n=8，

表4 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠肝臟MDA含量和SOD、CAT、GSH-Px活性的影響（n=8，Table 4 Effects of DNAE on the activities of SOD，GSH-Px，CAT and the content of MDA in liver of hyperlipidemic rats（n=8，

組別空白對照組模型組水提物高劑量組水提物低劑量組ρSOD/（U/mgprot）334.73±12.16b 271.96±26.55a 315.71±13.90b 311.38±16.78b cMDA/（nmol/mgprot）4.06±2.61ab 5.63±0.82d 4.37±15.92ab 5.06±4.29bcd GSH-PX 10.94±0.59a 8.99±1.25c 9.95±0.77abc 9.47±0.63bc CAT/（U/mgprot）3.94±1.63b 2.68±1.17a 3.34±0.67bc 3.30±1.61ab

表5 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠肝臟LPL、HL和PHPA活性的影響（n=8，）Table 5 Effects of DNAE on the activities of LPL，HL and PHPA（n=8

表5 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠肝臟LPL、HL和PHPA活性的影響（n=8，）Table 5 Effects of DNAE on the activities of LPL，HL and PHPA（n=8

組別空白對照組模型組水提物高劑量組水提物低劑量組ρLPL/（U/ml）0.40±0.00a 0.17±0.00b 0.98±0.00c 0.94±0.00cd ρHL/（U/ml）0.58±0.00a 0.37±0.00b 1.44±0.00d 1.18±0.00c ρPHPA/（U/ml）0.98±0.00a 0.54±0.01b 2.42±0.00c 2.12±0.01de

2.7 對大鼠糞便中TC、TG和總膽汁酸濃度的影響

由結(jié)果知，雖然高脂模型組和低、高劑量組大鼠糞便內(nèi)TC濃度較空白對照組均有增加，但4組無顯著性差異（P＞0.05）。與空白對照組比較，高脂模型組和低、高劑量組大鼠糞便內(nèi)TG及總膽汁酸濃度顯著升高（P＜0.05），說明高脂飲食會引起機(jī)體TG排泄的增多，并將多余膽固醇以膽汁酸形式排出體外。結(jié)果見表6。

2.8 肝臟形態(tài)學(xué)觀察

HE染色后電鏡觀察，發(fā)現(xiàn)各組細(xì)胞漿均存在大小不一，數(shù)量不等的透明空泡，這些空泡為中性脂肪滴。通過計算脂肪滴面積可以看出與空白對照組比較，高脂模型組細(xì)胞內(nèi)脂肪含量顯著升高（P＜0.05）；與高脂模型組比較，低、高劑量組細(xì)胞內(nèi)脂肪含量均顯著降低（P＜0.05），說明金釵石斛水提物可以有效降低肝臟內(nèi)脂肪堆積。結(jié)果見圖2。

表6 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠糞便中TC、TG和總膽汁酸濃度的影響（n=8，Table 6 Effects of DNAE on the content of TC，TG，total bile acid in feces of hyperlipidemic rats（n=8，

表6 金釵石斛水提物對高血脂癥大鼠糞便中TC、TG和總膽汁酸濃度的影響（n=8，Table 6 Effects of DNAE on the content of TC，TG，total bile acid in feces of hyperlipidemic rats（n=8，

組別空白對照組模型組水提物高劑量組水提物低劑量組c 糞便 TC/（mmol/L）0.41±0.00ab 0.47±0.07a 0.49±0.15ab 0.46±0.32ab ρ 糞便 TG/（mmol/L）1.22±0.16a 3.19±0.99b 3.38±0.23b 3.82±0.51b c 總膽汁酸/（μmol/L）141.67±17.58a 416.89±140.50ab 653.94±0.28c 515.38±149.33bc

圖2 金釵石斛對高血脂癥大鼠肝臟脂肪含量的影響（HE×400）Fig.2 Effects of DNAE on fat accumulation in liver of hyperlipidemic rats（HE×400）

2.9 討論

高血脂癥是動脈粥樣硬化的主要原因，動脈粥樣硬化又可引發(fā)心腦血管疾病，引起嚴(yán)重后果，預(yù)防和治療高血脂癥對維持人體健康有重要意義[10]。血脂升高主要以TC、TG、LDL-C升高和HDL-C降低為表現(xiàn)[11]。血清中LDL的氧化修飾及其在血中的堆積會導(dǎo)致動脈粥樣硬化[12]。HDL被認(rèn)為是一種抗動脈粥樣硬化的脂蛋白，能夠?qū)⑽盏哪懝檀歼\(yùn)送入肝臟分解再以膽汁形式排出[13]。因此控制血脂中TC、TG、LDL-C含量的降低，HDL-C含量的升高對降低患動脈粥樣硬化有正相關(guān)性。本研究表明金釵石斛水提物可以降低血清中TG、LDL-C和ALT濃度，升高HDL-C濃度，使機(jī)體血脂水平趨于正常，防止脂代謝紊亂[14]。

有研究表明，動脈粥樣硬化的發(fā)生與脂質(zhì)過氧化損傷相關(guān)[15]。人體內(nèi)預(yù)防脂質(zhì)過氧化一是通過酶促反應(yīng)，如SOD和GSH-Px的催化反應(yīng)，另一類是非酶促反應(yīng)，如維生素C、還原型谷胱甘肽等的氧化反應(yīng)。MDA是脂質(zhì)過氧化的終產(chǎn)物之一，能客觀衡量機(jī)體產(chǎn)生自由基的水平[16]。因此控制體內(nèi)脂質(zhì)過氧化的發(fā)生，抑制氧化還原反應(yīng)也是減緩動脈粥樣硬化的重要措施。研究結(jié)果顯示金釵石斛水提物能夠降低肝臟中MDA含量，緩解氧化應(yīng)激，升高SOD、CAT、GSH-Px、LPL 和 HL 的活性，降低氧化損傷[17]。

3 結(jié) 語

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，金釵石斛水提物可以降低高血脂癥大鼠體重和血脂水平，抑制體內(nèi)過氧化反應(yīng)的發(fā)生，對預(yù)防動脈粥樣硬化發(fā)揮重要作用。因此金釵石斛水提物對預(yù)防和治療高血脂癥有非常好的應(yīng)用前景。