湖北省武漢市某門診貓傳染性腹膜炎病例統(tǒng)計(jì)分析

唐小娟 ，王 姍 ，尹伊婭 ，胡長(zhǎng)敏 ，2，丁明星 ，2，陳建國(guó) ，2，韓 麗 ，2

（1. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)院，湖北武漢 430070；2. 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院，湖北武漢 430070）

貓傳染性腹膜炎（Feline infectious peritoniti，F(xiàn)IP）是由貓傳染性腹膜炎病毒（Feline infectious peritonitis virus，F(xiàn)IPV）引起的一種慢性、漸進(jìn)性、致死性貓科動(dòng)物傳染病，以腹膜炎、大量腹水積聚或各臟器出現(xiàn)肉芽腫病變以及高致死率為主要臨床特征[1]。此病主要經(jīng)呼吸道傳播，也經(jīng)消化道及昆蟲媒介傳播。FIPV主要感染0.5～5歲的貓，1歲以下幼貓易感性更強(qiáng)，純種貓、混養(yǎng)貓及流浪貓更易感。該病有的呈急性暴發(fā)，常發(fā)生于幼貓，有的呈慢性，病程可持續(xù)數(shù)周，甚至達(dá)4個(gè)月之久。感染病例即使獲得良好的治療，其死亡率也非常高[2]。FIPV在分類上屬于套式病毒目（Nidovirus）冠狀病毒科（Coronaviridae）冠狀病毒屬（Coronavirus），與貓腸道冠狀病毒（FECV）同屬于貓冠狀病毒（FCoV）[3]。FIPV為單股正鏈、不分節(jié)段的RNA病毒，病毒粒子呈螺旋狀對(duì)稱，有囊膜，囊膜表面有花瓣?duì)罾w突，在電子顯微鏡下呈日冕狀[4]。FIPV編碼4 種主要結(jié)構(gòu)蛋白，即刺突蛋白（S蛋白）、膜蛋白（M蛋白）、小包膜蛋白（E蛋白）和核衣殼蛋白（N蛋白）[5]。1963年Holzworth 在美國(guó)首次報(bào)道本病，1977年確定該病病原為冠狀病毒[6]。目前已報(bào)道的檢測(cè)FIPV方法有血清學(xué)檢測(cè)、RTPCR、核酸探針檢測(cè)、基因芯片檢測(cè)等[7]。目前尚無(wú)有效疫苗和特效藥物來(lái)進(jìn)行FIP防控[8]，因此了解各地FIPV流行特征，對(duì)于該病防控具有重要意義。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院是武漢市極具代表性的動(dòng)物醫(yī)院，其就診病例范圍覆蓋了武漢市各個(gè)地區(qū)。因此，本研究以華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院門診病例為代表，對(duì)2017年11月至2018年9月的門診病例進(jìn)行FIP檢測(cè)分析，以期為了解該病的流行特點(diǎn)及其臨床防治提供參考。

1 材料與方法

1.1 主要儀器

高速冷凍離心機(jī)：Eppendorf；核酸擴(kuò)增儀：博日科技有限公司生產(chǎn)；核酸電泳系統(tǒng)：北京六一公司生產(chǎn)。

1.2 主要試劑

RNAiso Reagent：TaKaRa公司產(chǎn)品；ExTaq Buffer、dNTPs、ExTaq DNA 聚 合 酶、DL-2000 DNA Marker：寶生物工程（大連）有限公司產(chǎn)品；貓傳染性腹膜炎抗原試紙條：韓國(guó)安捷公司生產(chǎn)。

1.3 病料采集

用棉簽從直腸或從新鮮糞便中直接取樣，浸入樣品稀釋管，并攪拌10次，蓋緊蓋子并混勻3～5次，靜置1 min，然后迅速送往實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)。2017年11月至2018年9月，共采集1 036份臨床疑似患病貓糞便樣品。

1.4 臨床診斷

病貓主要表現(xiàn)為滲出性和非滲出性兩種類型。滲出性表現(xiàn)為：病貓食欲減退，精神極度沉郁，體溫升高，呼吸急促，體重較輕，腹部明顯膨大，觸診腹部無(wú)痛感，但有明顯波動(dòng)感，血液白細(xì)胞總數(shù)增加等。非滲出型主要表現(xiàn)為眼、中樞神經(jīng)、腎臟和肝臟損傷：眼角膜水腫，眼房液變紅，眼前房有纖維蛋白凝塊；后驅(qū)運(yùn)動(dòng)障礙，背部痙攣；肝臟黃疸，腎功能衰竭或腫大。

1.5 樣品檢測(cè)

1.5.1 快速檢測(cè) 將所采集的糞便樣品，采用韓國(guó)安捷公司生產(chǎn)的貓傳染性腹膜炎抗原試紙條進(jìn)行檢測(cè)，按廠家產(chǎn)品說(shuō)明書進(jìn)行操作。具體步驟如下：取出試紙平放于寬敞干燥的操作臺(tái)面，用提供的吸管小心吸取樣品上清（不要將糞便顆粒吸取出來(lái)），并用滴管向樣品孔精確垂直加入4滴混合液，5～10 min后判斷結(jié)果。C線（質(zhì)控線）為紅色，T線為檢測(cè)線。判斷標(biāo)準(zhǔn)：T線為紅色，判斷為陽(yáng)性，否則為陰性。若C線不出現(xiàn)顏色，表示結(jié)果無(wú)效，應(yīng)重新檢測(cè)。

1.5.2 RT-PCR檢測(cè) 根據(jù)GenBank中的FIPV S基因核酸序列，用Primer 5.0軟件設(shè)計(jì)FIPV鑒定引物，擴(kuò)增的片段長(zhǎng)度為705 bp（FIPV-S-F：5′-CACTYAATGCHTWTGTGTCTCARAC-3′；FIPV-S-R：5′-GCCACACATACCANGGCCATTTTAC-3′）。引物由北京奧科鼎盛生物科技有限公司合成。將來(lái)源貓F(tuán)IP臨床癥狀明顯，但FIPV抗原快速診斷試紙條檢測(cè)為陰性的樣品以及30份陽(yáng)性樣品，采用PCR方法復(fù)檢：將所采集的樣品按照RNAiso Reagent使用說(shuō)明書進(jìn)行病毒基因組提取，再按程序進(jìn)行PCR擴(kuò)增（94 ℃預(yù)變性5 min，94 ℃變性 30 s，50 ℃退火 30 s，72 ℃延伸 45 s，35個(gè)循環(huán)，最后72 ℃延伸10 min），對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物使用瓊脂糖電泳方法進(jìn)行鑒定。

2 結(jié)果與分析

2.1 總體情況

本研究對(duì)華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院2017年11月至2018年9月的1 036份就診貓糞便樣品，采用FIPV抗原快速診斷試紙條檢測(cè)，檢出陽(yáng)性61份，陽(yáng)性檢出率為5.9%（61/1 036）。隨機(jī)選取30份快速診斷試紙條檢測(cè)為陽(yáng)性的病料，利用PCR復(fù)檢，結(jié)果仍為陽(yáng)性。對(duì)來(lái)源貓臨床癥狀明顯，但抗原快速診斷試紙條檢測(cè)為陰性的樣品，進(jìn)行PCR復(fù)檢，結(jié)果仍為陰性。

2.2 時(shí)間分布

對(duì)2017年11月至2018年9月各月份的FIPV陽(yáng)性病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)FIP的季節(jié)性特征并不明顯，大部分月份的陽(yáng)性檢出率在6.0%～8.0%之間。2018年1月的陽(yáng)性檢出率最高，為13.4%，2017年11月、12月和2018年5月的陽(yáng)性檢出率較低，在3.0%左右（表1）。

表1 各月份就診病例的FIPV檢測(cè)結(jié)果統(tǒng)計(jì)

2.3 群間分布

2.3.1 品種 本研究對(duì)就診貓品種進(jìn)行了相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn)FIPV陽(yáng)性病例中，英國(guó)短毛貓占比最高，為41.7%，其次是田園貓和美國(guó)短毛貓，分別為23.3%和11.7%。這3種貓的陽(yáng)性數(shù)量占總陽(yáng)性數(shù)量的76.7%（圖1），表明這3種貓對(duì)FIPV易感。

圖1 不同品種門診貓的FIPV陽(yáng)性數(shù)量占比

2.3.2 性別、年齡 本研究對(duì)就診陽(yáng)性貓按性別進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)雄性貓43只，占比70.0%，而雌性僅18只，占比30.0%。對(duì)就診陽(yáng)性貓按年齡進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性病例主要為1歲以下的幼貓，占比72.1%，1～3歲的占比21.3%，而3歲以上的占比6.6%（表2），說(shuō)明陽(yáng)性病例中以幼貓為主。

表2 不同年齡門診貓的FIPV陽(yáng)性數(shù)量統(tǒng)計(jì)

3 討論

本研究以華中農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)院的門診病例為代表，對(duì)2017年11月至2018年9月的貓F(tuán)IPV陽(yáng)性病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，發(fā)現(xiàn)陽(yáng)性檢出率為5.9%。該檢測(cè)結(jié)果在一定程度上反映了武漢市乃至全國(guó)的FIP流行情況，關(guān)于其真實(shí)流行情況，需要進(jìn)行更加系統(tǒng)全面的流行病學(xué)調(diào)查才能確定。

時(shí)間分布分析發(fā)現(xiàn)，該病的季節(jié)性特征并不明顯，大部分月份的陽(yáng)性檢出率在6.0%～8.0%之間。2018年1月的陽(yáng)性檢出率最高（13.4%），而2017年11月、12月和2018年2月、5月的陽(yáng)性檢出率較低，其原因可能與臨床就診病例數(shù)量偏少有關(guān)，也可能與5月份武漢市氣候適宜，適合幼貓的成長(zhǎng)和護(hù)理有關(guān)，其真正原因需進(jìn)行深入探究。此外，該病的暴發(fā)是否受地域差異、氣候差異、飼養(yǎng)規(guī)模和飼養(yǎng)習(xí)慣等因素的影響，也需要進(jìn)行后續(xù)系統(tǒng)調(diào)查。

群間分布分析發(fā)現(xiàn)，英國(guó)短毛貓、田園貓和美國(guó)短毛貓以及雄性貓的陽(yáng)性占比較高。由于本研究?jī)H對(duì)一家動(dòng)物醫(yī)院的門診病例進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，也未對(duì)貓品種進(jìn)行陽(yáng)性檢出率對(duì)比，僅統(tǒng)計(jì)分析了陽(yáng)性病例中的占比情況，其結(jié)果并不能說(shuō)明該類貓對(duì)FIPV最易感，只能表示該類貓受FIPV影響較嚴(yán)重。雄性貓的陽(yáng)性占比明顯高于雌性，這與王杰等[9]報(bào)道的結(jié)果一致，這很有可能與雄性貓的飼養(yǎng)率高于雌性，且雄性貓的活動(dòng)性在一定程度上高于雌性貓有關(guān)。英國(guó)短毛貓、田園貓和美國(guó)短毛貓陽(yáng)性占比較高，可能與此類品種貓飼養(yǎng)數(shù)量偏高有關(guān)。此后需要結(jié)合各種貓的流行病學(xué)調(diào)查，進(jìn)一步確定該病發(fā)病率與性別、品種之間的關(guān)聯(lián)性。

檢測(cè)結(jié)果顯示，1歲以下幼貓病例數(shù)量占比較高，從某種意義上說(shuō)明幼貓對(duì)此病較易感，這與FIP的流行特點(diǎn)一致，也與呂艷枝等[10]、張麗等[11]的研究報(bào)道相一致。其原因可能與幼齡貓抵抗力低有一定關(guān)系，因此臨床上要特別注意幼貓的FIP防治。