養(yǎng)殖對(duì)蝦白斑綜合征防治技術(shù)的研究進(jìn)展

張 超，王印庚，張 正，孫金生，韋信賢，馬 來(lái)

(1.天津師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，天津 300387；2.中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所，農(nóng)業(yè)部海水病害防治重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，山東青島 266071；3.廣西水產(chǎn)科學(xué)研究院，廣西南寧 530021；4.北海南方海洋生態(tài)養(yǎng)殖有限公司，廣西北海 536000)

對(duì)蝦白斑綜合征病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是一種具有雙層囊膜結(jié)構(gòu)、無(wú)包涵體、橢圓形的DNA雙鏈病毒。目前國(guó)際上已經(jīng)完成了3株WSSV全基因組測(cè)序工作，分別是泰國(guó)株(AF369029)[1]、中國(guó)大陸株(AF332093)[2]及中國(guó)臺(tái)灣株(AF440570)[3]。

對(duì)蝦白斑綜合征病毒是威脅對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)健康發(fā)展的重要疾病之一，其特點(diǎn)為致病能力強(qiáng)、宿主范圍極廣、傳播迅速，一般在感染后7～10 d內(nèi)死亡率高達(dá)80%～100%[4]。該病的典型癥狀為對(duì)蝦甲殼內(nèi)面出現(xiàn)白色斑點(diǎn)，甲殼易被剝離且不黏連真皮，對(duì)蝦觸須、尾部邊緣發(fā)紅，攝食減少或停止攝食，體質(zhì)虛弱且對(duì)外界的刺激反應(yīng)逐漸遲鈍，出現(xiàn)胃腸空虛或斷腸等癥狀[5]，是迄今為止危害最為嚴(yán)重的甲殼類病毒，在全球范圍內(nèi)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失，成為目前對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)可持續(xù)發(fā)展的障礙之一[6]，所以采取切實(shí)可行的防治措施顯得尤為重要。

防控病毒類疾病的三大要素為病原體、宿主和生態(tài)環(huán)境。從切斷包括垂直和水平傳播在內(nèi)的潛在感染源、飼喂免疫增強(qiáng)劑增強(qiáng)蝦體免疫力、改良養(yǎng)殖環(huán)境等方面開(kāi)展預(yù)防WSSV的工作是卓有成效的方法。筆者將對(duì)對(duì)蝦白斑綜合征病毒(WSSV)不同防治技術(shù)進(jìn)行概述。

1 消毒劑

HUGO(1978)國(guó)際消毒劑權(quán)威組織根據(jù)化學(xué)組成將消毒劑進(jìn)行了分類，包括鹵素類、過(guò)氧化物類、醛類、醇類、酚類、酸堿類和表面活性劑類等。

1.1鹵素類消毒劑鹵素類消毒劑有含氯消毒劑(如次氯酸鈉、次氯酸鈣、二氧化氯等)、含碘消毒劑(如聚維酮碘等)、含溴消毒劑(如二溴海因等)，其中聚維酮碘是常見(jiàn)的含碘消毒劑，對(duì)大部分的細(xì)菌、真菌和病毒均有殺滅作用，在不同養(yǎng)殖品種(如魚(yú)、蝦、貝、蟹等)中不同生長(zhǎng)時(shí)期都能使用，較氯制劑、溴制劑對(duì)水產(chǎn)養(yǎng)殖動(dòng)物的刺激性小、安全性更高[7]。二溴海因是近年來(lái)研究較多的含溴類消毒劑之一，具有殺菌效果好、性質(zhì)穩(wěn)定等優(yōu)點(diǎn)，屬于實(shí)際無(wú)毒物，但對(duì)金屬有腐蝕作用。鹵素類消毒劑的作用機(jī)理有：①干擾致病原的重要酶原系統(tǒng)，抑制酶的活性，影響菌體代謝，引起菌體死亡；②作用于微生物的蛋白質(zhì)基團(tuán)使其變性，從而失去致病力。有研究表明，許多消毒劑(如高錳酸鉀、聚維酮碘[8-9]、苯扎溴銨[10]等)對(duì)細(xì)菌、真菌和病毒等大多數(shù)病原體有良好的殺滅作用。

1.2過(guò)氧化物類消毒劑常用的過(guò)氧化物類消毒劑有過(guò)氧乙酸、H2O2和臭氧等，其作用機(jī)理為依靠其氧化能力殺除微生物，以達(dá)到消毒目的。此類消毒劑因具有殺菌范圍廣、效能高、作用迅速以及在低溫下能保持較好的殺菌活性等特質(zhì)而得到廣泛使用，但因?yàn)樗茄趸瘎┧孕再|(zhì)不穩(wěn)定，且具有腐蝕作用。

1.3醛類消毒劑醛類消毒劑(如甲醛、戊二醛、鄰苯二甲醛等)是一種廣譜消毒劑，能夠殺滅細(xì)菌、病毒、芽孢等病原體[11-12]，其作用機(jī)制是其能夠與病原體蛋白質(zhì)中的重要基團(tuán)，如氨基、羧基、巰基等相互作用，損壞蛋白質(zhì)分子使微生物死亡。但該類消毒劑具有一定的揮發(fā)性，因此若使用高濃度的醛類消毒劑應(yīng)避免直接接觸或吸入，否則會(huì)對(duì)皮膚和黏膜造成一定的刺激性。

1.4醇類消毒劑醇類消毒劑有乙醇、異丙醇等，殺菌原理是使病原微生物的蛋白質(zhì)發(fā)生變性或烷基化，最終導(dǎo)致微生物死亡。此類消毒劑對(duì)細(xì)菌、真菌、病毒和芽孢均有效果，但一般不用于養(yǎng)殖場(chǎng)消毒，多用于手部、皮膚、器械、注射器針頭等消毒。武昌俊等[13]發(fā)現(xiàn)乙醇對(duì)銅綠假單胞菌(Pseudomonasaeruginosa)和白色念珠菌(Candidaaibicans)具有很強(qiáng)的殺滅效果，且對(duì)豚鼠皮膚無(wú)刺激作用。

1.5酚類消毒劑酚類消毒劑是一類表面活性物質(zhì)，能損壞病原菌菌體的細(xì)胞膜，故有消毒作用。此外，此類消毒劑還可以通過(guò)抑制細(xì)菌重要酶活性(如脫氫酶和氧化酶)而產(chǎn)生抑菌作用。一般情況下，這類消毒劑僅用來(lái)進(jìn)行環(huán)境及用具消毒，對(duì)大多數(shù)不產(chǎn)生芽孢的細(xì)菌和真菌具有殺滅作用，但對(duì)病毒和芽孢的作用并不顯著。目前市場(chǎng)上的酚類消毒劑大部分是由2種或2種以上成分組成的化合物來(lái)擴(kuò)展其效用范圍。而且由于酚類物質(zhì)會(huì)產(chǎn)生不良?xì)馕恫⑽廴经h(huán)境，所以開(kāi)發(fā)低毒、高效的酚類消毒劑應(yīng)當(dāng)受到重視。

1.6酸、堿類消毒劑酸類消毒劑是對(duì)蝦養(yǎng)殖場(chǎng)地常用的消毒劑之一，如0.3%～0.5%硼酸可用于黏膜消毒[14]；生石灰是一種常見(jiàn)的堿性消毒劑，其最大特點(diǎn)是價(jià)廉易得，多用于涂刷墻體、地面等，或者將石灰添加在需要消毒的液體中，或潑灑在潮濕的地面、污渠等處進(jìn)行消毒處理[15]，這2類消毒劑的殺菌機(jī)理為使蛋白質(zhì)變性、沉淀或溶解，但此類消毒劑(如硝酸、氫氧化鈉等)的缺點(diǎn)在于具有強(qiáng)腐蝕性，會(huì)對(duì)皮膚或黏膜造成損害，使得此類消毒劑的使用存在一定局限性。

1.7表面活性劑類消毒劑表面活性劑類消毒劑包括胍類消毒劑和季銨鹽類消毒劑，其中氯己定、聚六亞甲基胍(PHMG)屬于常見(jiàn)的胍類消毒劑。氯己定屬于低效消毒劑，多用于皮膚、黏膜等的消毒，此類消毒劑品種多樣，但目前單方制劑的使用并不多見(jiàn)，大多是與其他制劑配比使用，才能達(dá)到更好的殺菌效果[16]。PHMG是一種新型高分子聚合物，具有安全高效、無(wú)毒副作用、無(wú)腐蝕性等優(yōu)點(diǎn)，在醫(yī)療、化工、食品、飲水等方面得到廣泛應(yīng)用，此類化合物的作用機(jī)理為可以改變細(xì)菌細(xì)胞膜的通透性，高劑量的PHMG可使細(xì)胞膜破裂，引起細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)外泄，從而達(dá)到殺菌目的[17]。鄭飛龍等[18]證實(shí)1%聚六亞甲基胍對(duì)大腸桿菌(Escherichiacoli)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、白色念珠菌和黑霉菌(Aspergillusniger)的殺滅率大于99.9%，且在急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)中，屬于實(shí)際無(wú)毒級(jí)。秦志華等[19]報(bào)道采用聚六亞甲基胍(2×10-6μL/L)對(duì)中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)的受精卵和無(wú)節(jié)幼體進(jìn)行消毒處理是可行的。

常見(jiàn)的季銨鹽類消毒劑如雙癸基二甲基溴化銨，具有無(wú)色、無(wú)味、無(wú)刺激性和無(wú)腐蝕性等優(yōu)點(diǎn)。殺菌機(jī)理同樣是改變細(xì)胞膜通透性使細(xì)胞質(zhì)外漏，阻礙呼吸或使蛋白質(zhì)變性。

關(guān)于消毒劑對(duì)WSSV的殺滅作用也有大量報(bào)道，楊冰等[20]將中國(guó)對(duì)蝦白斑綜合征病毒粗提液與含氯消毒劑、高錳酸鉀、甲醛、過(guò)氧化氫等7種消毒劑混合作用后，進(jìn)行了核酸斑點(diǎn)雜交試驗(yàn)，結(jié)果表明甲醛、過(guò)氧化氫、乙醇、氯仿和甲酚皂對(duì)病毒核酸無(wú)明顯的破壞效果，含氯消毒劑和高錳酸鉀在一定濃度下可破壞病毒DNA。謝數(shù)濤等[21]研究表明，用次氯酸和甲醛處理WSSV病毒粗提液作用1 h后失去致病力。李文婷[22]選取碘三氯、二氧化氯、雙氧水和高錳酸鉀對(duì)WSSV病毒液進(jìn)行處理，分析這幾種消毒劑對(duì)病毒基因組DNA和結(jié)構(gòu)蛋白的影響發(fā)現(xiàn)，濃度為25 mg/L的高錳酸鉀處理病毒60 min后即可殺滅WSSV；50 mg/L的二氧化氯與病毒粗提液作用60 min后，能使病毒完全喪失感染性，達(dá)到滅活的效果；在0.5～250 mg/L的濃度范圍內(nèi)，過(guò)氧化氫和碘三氯對(duì)WSSV沒(méi)有殺滅作用。Park等[23]使用含氯消毒劑連續(xù)處理海水，可有效地預(yù)防對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV。Chang等[24]研究發(fā)現(xiàn)使用最終濃度為100 mg/L的次氯酸鈉、聚維酮碘和75 mg/L的苯扎溴銨與WSSV常溫下混合作用10 min，能使WSSV失活。

2 中草藥

中草藥是一種純天然物質(zhì)，具備來(lái)源廣泛、價(jià)格低廉、毒副作用小、不易導(dǎo)致病原菌產(chǎn)生耐藥性等優(yōu)點(diǎn)[25]，在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中也得到了廣泛的應(yīng)用。中草藥對(duì)水產(chǎn)動(dòng)物的作用主要包括2個(gè)方面：①藥物作用,具有抗菌、抗病毒等方面的作用;②免疫效果,能夠調(diào)節(jié)機(jī)體平衡與生理功能(如增強(qiáng)體質(zhì)、促進(jìn)生長(zhǎng)等作用)、提高機(jī)體特異性和非特異性免疫力等[26]。

2.1藥物作用許多研究結(jié)果表明，中草藥對(duì)水生動(dòng)物疾病的預(yù)防和治療具有顯著效果。中草藥按其功效可以分為以下幾類：①抗病毒類中草藥，如板藍(lán)根、射干、苦地丁等；②抗菌、抑菌類中草藥，如百部、大黃、大青葉、白頭翁等；③驅(qū)蟲(chóng)、殺蟲(chóng)類中草藥，如仙鶴草、草果、常山、五信子等。

此外，在中草藥提高對(duì)蝦抵抗白斑綜合征病毒能力上也有大量研究。國(guó)子娟等[27]通過(guò)對(duì)蝦原代細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)篩選出了具有抗白斑綜合征病毒作用的中草藥。郭志勛等[28]研究表明，番石榴葉水提取物與WSSV作用超過(guò)12 h后可使其滅活。江湧等[29]通過(guò)在飼料中添加中草藥，可顯著提高受到WSSV脅迫的凡納濱對(duì)蝦的抗病能力。陳輝輝等[30]研究了復(fù)方中草藥(內(nèi)含葛根、黃連、金銀花、板藍(lán)根等11味中草藥)對(duì)感染了WSSV凡納濱對(duì)蝦的免疫特性，研究表明該復(fù)方中草藥能提高對(duì)蝦免疫性能和抗WSSV能力，且添加量為0.8%和1.2%時(shí)效果最佳。

Kumaran等[31]、Balasubramanian等[32]和Yogeeswaran等[33]研究表明，獲取的中草藥提取物都可以增強(qiáng)蝦體對(duì)抗WSSV感染能力，存活率大幅提高；Balasubramanian等[34-35]對(duì)20種藥用植物進(jìn)行了抗病毒藥物的篩選工作，研究發(fā)現(xiàn)從木橘、苦瓜、狗牙根等植物中獲得的提取物具有良好的抗WSSV活性；Bindhu等[36]利用開(kāi)花薔薇(Agathigrandiflora)乙酸乙酯和甲醇提取物投喂已注射感染了WSSV的印度明對(duì)蝦(Penaeusindicus)，試驗(yàn)組致死率是對(duì)照組的10%～20%，因此推斷可能是提取物阻斷病毒在蝦體內(nèi)的轉(zhuǎn)錄和翻譯過(guò)程，進(jìn)而抑制了WSSV的增殖，減少了對(duì)蝦體內(nèi)WSSV的負(fù)載量。Immanuel等[37]通過(guò)實(shí)時(shí)定量PCR驗(yàn)證了隨著投喂的馬尾藻(Sargassumwightii)密度增加，對(duì)蝦體內(nèi)病毒數(shù)目不斷降低，0.3%馬尾藻投喂組WSSV拷貝數(shù)為11，而陽(yáng)性對(duì)照組蝦體內(nèi)病毒數(shù)量達(dá)106。

2.2免疫效果中草藥除了含抗病毒、殺菌抑菌等重要藥物成分外，還含蛋白質(zhì)、多糖、維生素和微量元素等諸多營(yíng)養(yǎng)成分，因此中草藥具備增強(qiáng)機(jī)體免疫能力和抗應(yīng)激能力、調(diào)節(jié)機(jī)體的新陳代謝、促進(jìn)生長(zhǎng)等作用[38-41]，適合在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)廣泛使用。劉波等[42]發(fā)現(xiàn)在飼料中添加2.0%杜仲三黃、1.0%三黃均可以提高凡納濱對(duì)蝦增重率，降低餌料系數(shù)，且能提高對(duì)蝦抵抗溶藻弧菌(Vibrioalginolyticus)感染的能力。

有大量研究表明多糖類制劑——黃芪多糖[43]、葡聚糖、肽聚糖[44-45]等也能提高對(duì)蝦免疫力，具有抗菌抑菌或抗病毒的效力。將β-1,3葡聚糖添加在普通飼料中，連續(xù)投喂對(duì)蝦20 d后，通過(guò)肌肉注射進(jìn)行WSSV人工感染，試驗(yàn)結(jié)果表明，β-1,3葡聚糖能提高對(duì)蝦抗WSSV感染活性[46]。朱衛(wèi)衛(wèi)等[47]使用不同濃度的肽聚糖免疫凡納濱對(duì)蝦24 h后感染W(wǎng)SSV，發(fā)現(xiàn)0.15 mg/mL劑量組的免疫保護(hù)率最高。劉恒等[48]在飼料中添加從海藻中提取的免疫多糖飼喂凡納濱對(duì)蝦幼蝦，10 d后可提高對(duì)蝦的酶活力和抗菌活力。江曉路等[49]利用海藻多糖(PV911)、北蟲(chóng)草多糖(cP)作為飼料添加劑連續(xù)投喂中國(guó)明對(duì)蝦20 d，結(jié)果表明2種多糖能顯著提高中國(guó)明對(duì)蝦血細(xì)胞的吞噬能力、酚氧化酶等的活力，增強(qiáng)對(duì)蝦的免疫能力。

3 益生菌

3.1益生菌特征和益生菌制劑分類目前水產(chǎn)動(dòng)物疾病防治中使用的廣譜抗生素能有效控制疾病的發(fā)生和蔓延，但它會(huì)干擾和破壞養(yǎng)殖環(huán)境和水產(chǎn)動(dòng)物腸道中的正常菌群，導(dǎo)致水生動(dòng)物對(duì)病原體的易感性，增強(qiáng)病原菌的耐藥性[50]。因此提出使用益生菌制劑，它具有調(diào)節(jié)機(jī)體內(nèi)微生態(tài)平衡、改善水體環(huán)境、促進(jìn)機(jī)體生長(zhǎng)等作用[51]，從而減少疾病的發(fā)生。

益生菌應(yīng)當(dāng)具備的特征有：①促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物的生長(zhǎng)，增強(qiáng)其抵抗病害的能力；②能在惡劣和不穩(wěn)定的腸道環(huán)境中定殖、生存；③能在保藏條件下長(zhǎng)時(shí)間地保持性能穩(wěn)定并維持活力。目前在水產(chǎn)養(yǎng)殖上得到應(yīng)用的益生菌制劑分為2類：①?gòu)?fù)合制劑，如由硝化細(xì)菌、假單胞菌和芽孢桿菌組成的復(fù)合益生菌，與單一制劑相比能顯著降低氨氮含量和亞硝酸鹽濃度[52]；②單一制劑，如光合桿菌(PhotosyntheticBacteria)、乳酸菌(Lacticacidbacteria)、芽孢桿菌(Bacillussp.)、乳酸桿菌(Lactobacillusclearans)、乳酸乳球菌(Lactococcuslactis)、熒光假單胞菌(Pseudomonnasfluorescens)、溶藻弧菌(V.alginolyticus)、蛭弧菌(Bdellovibriobacteriovorus)等。

3.2益生菌在水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的應(yīng)用

3.2.1水質(zhì)調(diào)節(jié)劑。在水產(chǎn)養(yǎng)殖中使用益生菌進(jìn)行水質(zhì)調(diào)控的報(bào)道很多[53-55]，其中應(yīng)用最多的是光合細(xì)菌。光合細(xì)菌的作用方式是直接消耗水體中有機(jī)物、氨氮和硫化氫等物質(zhì)，并可通過(guò)反硝化作用除去亞硝酸，具有良好的凈水能力[56]。趙玉潔等[57]報(bào)道了光合細(xì)菌可以把水體中異養(yǎng)菌分解剩余有機(jī)物產(chǎn)生的有機(jī)酸、硫化氫等物質(zhì)合成菌體物質(zhì)并大量繁殖，既參與水質(zhì)凈化，又可被其他動(dòng)物捕食。朱將偉[58]報(bào)道了由枯草芽孢桿菌(Bacillussubtilis)、沼澤紅假單胞菌(Rhodopseudomonaspalustris)等4種益生菌組成的復(fù)合制劑具有良好的去除水體中硫化物的能力。

3.2.2抑制有害微生物。益生菌進(jìn)入動(dòng)物體內(nèi)的消化道后定殖并進(jìn)行大量擴(kuò)增，與消化道內(nèi)的有益菌共同建立起優(yōu)勢(shì)菌群，維持消化道內(nèi)的動(dòng)態(tài)平衡，從而達(dá)到抑制致病菌繁殖的目的。其作用機(jī)理主要有:①通過(guò)分泌代謝產(chǎn)物(如抑菌物質(zhì))來(lái)抑制致病菌的增殖；②通過(guò)競(jìng)爭(zhēng)作用與病原菌爭(zhēng)奪黏附位點(diǎn)，進(jìn)而阻止病原菌在消化道內(nèi)定殖；③改變消化道的pH。

3.2.3提高水產(chǎn)動(dòng)物機(jī)體免疫力。益生菌具備調(diào)節(jié)機(jī)體免疫系統(tǒng)的功能，這是益生菌最重要的益生特性[59]。諸多研究表明，益生菌制劑可增強(qiáng)水生動(dòng)物機(jī)體免疫力[60-66]。朱學(xué)芝等[67]通過(guò)將由乳酸芽孢桿菌(Lactic acidBacillus)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)和枯草芽孢桿菌組成的復(fù)合益生菌制劑添加到飼料中或直接添加至水體，結(jié)果表明均可以促進(jìn)凡納濱對(duì)蝦的生長(zhǎng)，且能夠降低水體中的氨氮、亞硝酸鹽含量。

關(guān)于添加益生菌抗白斑綜合征病毒方面國(guó)內(nèi)外均有許多報(bào)道[68-73]，劉君等[74]研究表明使用益生菌制劑能顯著提高凡納濱對(duì)蝦免疫酶活力，且在對(duì)蝦感染W(wǎng)SSV后可以起到一定的免疫保護(hù)作用。王曉琳等[75]研究表明，在浸泡和注射2種方式下，芽孢桿菌BZ5(Bacillus.Sp BZ5)能大幅提升對(duì)蝦超氧化物歧化酶和過(guò)氧化物酶活性，且能提高對(duì)蝦抗WSSV感染能力。孫艷[76]分析了堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿菌PC024(BacillusfirumsPC024)和溶藻弧菌LV463(VibrioalginolyticusLV463)配合使用添加到飼料中，可通過(guò)提高對(duì)蝦免疫水平和抗病基因表達(dá)來(lái)緩解WSSV在蝦體內(nèi)的繁殖，從而起到抗病毒的作用效果。Zhang等[77]發(fā)現(xiàn)將一株分離自中國(guó)對(duì)蝦(Fenneropenaeuschinensis)腸道的益生菌(Halomonassp.B12)添加到對(duì)蝦飼料中能增強(qiáng)對(duì)蝦抗病毒感染的能力。研究發(fā)現(xiàn)在飼料中添加由4種乳酸菌和1種酵母菌制成的復(fù)合益生菌，在對(duì)蝦受到WSSV脅迫時(shí)能顯著提高對(duì)蝦存活率[78]。Haryanti[79]也對(duì)芽孢桿菌能提升機(jī)體抗WSSV的能力進(jìn)行了報(bào)道。

4 RNA干擾技術(shù)(RNAi)

近年來(lái)研究表明，RNA干擾技術(shù)同樣可以抑制對(duì)蝦白斑綜合征病毒基因在蝦體中的復(fù)制和表達(dá)，進(jìn)而預(yù)防和控制白斑綜合征病毒的感染。

Kim等[80]將白斑綜合征病毒VP28和VP281的dsRNA肌肉注射給受到WSSV脅迫的對(duì)蝦，結(jié)果發(fā)現(xiàn)和對(duì)照組相比，能提高對(duì)蝦的存活率。Xu等[81]用VP28特異性siRNA和在大腸桿菌中表達(dá)的VP28-si RNA處理凡納濱對(duì)蝦，結(jié)果表明兩者均能得到較好的免疫保護(hù)效果。Westenberg等[82]也通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)dsRNA能夠提高對(duì)蝦的抗病毒能力。Alenton等[83]研究表明，dsRNA(VP9與GFP)都能顯著增強(qiáng)對(duì)蝦抵抗WSSV感染的能力。

5 疫苗的應(yīng)用

接種疫苗是水產(chǎn)養(yǎng)殖中預(yù)防疾病的有效措施，具有特異性免疫反應(yīng)，能夠特異性地防治相應(yīng)的某種疾病，但現(xiàn)階段疫苗的制備及其在實(shí)際生產(chǎn)中的廣泛應(yīng)用仍存在著困難[84]，尤其是對(duì)對(duì)蝦這種體積較小的水產(chǎn)動(dòng)物而言。

5.1DNA疫苗DNA疫苗又稱核酸疫苗或基因疫苗，是把主要抗原基因克隆到真核質(zhì)粒表達(dá)載體上，然后將重組的質(zhì)粒DNA直接注入動(dòng)物體內(nèi)，使外源基因通過(guò)宿主細(xì)胞合成抗原蛋白，進(jìn)而誘導(dǎo)宿主產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的過(guò)程[85-86]。

Rout等[87]將WSSV結(jié)構(gòu)蛋白基因(VP15、VP28和VP35等)進(jìn)行DNA重組質(zhì)粒構(gòu)建，并分別免疫對(duì)蝦，再進(jìn)行WSSV感染試驗(yàn)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)VP28和VP281的DNA重組質(zhì)粒在攻毒后35 d仍能起到良好的免疫保護(hù)作用，而表達(dá)病毒核酸蛋白VP15和VP35的DNA沒(méi)有免疫保護(hù)效果。Rajesh kumar等[88]用DNA疫苗免疫斑節(jié)對(duì)蝦(Penaeusmonodon)，試驗(yàn)組對(duì)蝦存活率是56.6%～90.0%，且提高了對(duì)蝦的酚氧化酶和超氧化物歧化酶水平，這表明這些免疫因子可能參與了機(jī)體抗WSSV并提高了對(duì)蝦免疫力。

5.2蛋白亞單位疫苗近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn)基因重組囊膜蛋白尤其是VP28具有顯著抗WSSV的作用，因此根據(jù)囊膜蛋白基因設(shè)計(jì)亞單位疫苗成為研究熱點(diǎn)[89-92]。Chen等[93]利用大腸桿菌作為載體表達(dá)WSSV囊膜蛋白VP28和VP36B，均通過(guò)肌肉注射的方式免疫健康的凡納濱對(duì)蝦，通過(guò)注射方式感染后觀測(cè)對(duì)蝦死亡率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)VP28和VP36B均能起到一定的抗WSSV效果，且VP28效果優(yōu)于VP36B。張敬艷等[94]將VP28核酸疫苗采用肌肉注射和飼料添加的方式免疫健康對(duì)蝦，比較各處理組的免疫保護(hù)率，結(jié)果為肌肉注射組和飼料免疫組的相對(duì)保護(hù)率分別為22.40%、36.84%，這說(shuō)明構(gòu)建VP28核酸疫苗在對(duì)蝦WSSV防治中具有一定的應(yīng)用價(jià)值。

施定基等[95]和JIA等[96]將WSSV結(jié)構(gòu)蛋白的VP28基因與質(zhì)粒連接后，構(gòu)建穿梭表達(dá)載體，通過(guò)三親接合轉(zhuǎn)移法分別轉(zhuǎn)化念珠藻(Nostoc)、聚球藻7002(Synechococcussp.PPC7002)和魚(yú)腥草7120(Anabaenasp.PCC7120)，后將轉(zhuǎn)基因微藻飼喂給蝦苗再進(jìn)行感染試驗(yàn)，其中試驗(yàn)組念珠藻、聚球藻7002和魚(yú)腥草7120成活率分別高達(dá)61.5%、76.9%和68.0%，而陽(yáng)性對(duì)照組100%死亡。

6 健康養(yǎng)殖措施

白斑綜合征病毒嚴(yán)重阻礙了對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展進(jìn)程，在積極研發(fā)各種抗WSSV藥物的同時(shí)，養(yǎng)殖過(guò)程中仍需要采取一些預(yù)防措施，這些措施對(duì)我國(guó)對(duì)蝦養(yǎng)殖業(yè)發(fā)展具有很大貢獻(xiàn)。

6.1投放SPF苗種對(duì)蝦養(yǎng)殖過(guò)程中蝦苗質(zhì)量的高低是決定對(duì)蝦養(yǎng)殖成功與否的關(guān)鍵，因此加快對(duì)蝦無(wú)毒良種幼苗的培育研發(fā)進(jìn)程尤為重要。1999年我國(guó)從美國(guó)引進(jìn)了SPF凡納濱對(duì)蝦繁育技術(shù)，培育出SPF凡納濱對(duì)蝦蝦苗[97]，SPF親蝦具備生長(zhǎng)迅速、大小均勻、產(chǎn)卵量大等優(yōu)勢(shì)[98]，但其抗病能力和適應(yīng)性無(wú)顯著優(yōu)勢(shì)，因此還應(yīng)增強(qiáng)對(duì)對(duì)蝦育苗場(chǎng)的監(jiān)管，同時(shí)還應(yīng)選取個(gè)體強(qiáng)壯、胃腸飽滿均勻、肌肉飽滿細(xì)膩、活力強(qiáng)、刺激反應(yīng)靈敏、體色透明光滑及體表干凈的蝦苗[99]。

6.2投放優(yōu)質(zhì)餌料在對(duì)蝦養(yǎng)殖的不同階段投喂適宜的優(yōu)質(zhì)餌料十分重要，如苗期飼料應(yīng)當(dāng)以無(wú)毒的鮮活餌料為主[100]，養(yǎng)成期以營(yíng)養(yǎng)豐富的全價(jià)飼料為主。同時(shí)還應(yīng)注意合理投料，勿使?fàn)I養(yǎng)過(guò)剩，否則會(huì)引起池中微生物大量繁殖從而影響水質(zhì)[101]。另外有研究人員在輪蟲(chóng)[102]、鹵蟲(chóng)[103-104]等小型甲殼類生物以及橈足類[105]中檢測(cè)出WSSV陽(yáng)性，說(shuō)明它們可以作為WSSV的中間宿主進(jìn)行傳播，所以在投喂鹵蟲(chóng)、輪蟲(chóng)等餌料時(shí)，應(yīng)對(duì)其進(jìn)行嚴(yán)格的消毒處理，防止對(duì)蝦感染疾病。

6.3水質(zhì)調(diào)控良好的水體環(huán)境對(duì)于對(duì)蝦健康養(yǎng)殖而言也是至關(guān)重要的，但水體富營(yíng)養(yǎng)化、殘餌過(guò)多及糞便等有機(jī)物的大量積累等造成養(yǎng)殖池塘的污染，同時(shí)也造成致病微生物繁殖，氨氮、亞硝酸鹽等有害物質(zhì)累積，這也增加了病害發(fā)生的可能性，所以將養(yǎng)殖水體管控好對(duì)疾病防控而言至關(guān)重要，調(diào)控水質(zhì)的措施有：①養(yǎng)殖過(guò)程中，定期使用消毒劑(如二溴海因、二氯異氰尿酸鈉等)對(duì)池塘進(jìn)行消毒處理[106-107]，殺滅水體中潛在的病原體和中間宿主;②在蝦池旁邊修建蓄水池是改善蝦池水質(zhì)有效的方法，以控制某些病原體的傳播，達(dá)到凈化水質(zhì)的目的，有條件的地方也可使用沙濾或消毒海水及深層海水[108];③嚴(yán)格監(jiān)測(cè)養(yǎng)殖水體的pH、氨氮含量、亞硝酸鹽濃度等水質(zhì)指標(biāo)[109-110]，若指標(biāo)偏離正常水平，應(yīng)該及時(shí)采取措施進(jìn)行科學(xué)改良。

6.4混養(yǎng)模式混養(yǎng)是一種有效提高養(yǎng)殖效益的模式[111-113]。混養(yǎng)模式不僅能充分利用不同水層空間，增加池塘負(fù)載力，而且能合理利用水體中的天然餌料資源[114]。各種養(yǎng)殖品種的生活習(xí)性和食性有所不同，可利用不同水層空間[115-116]。若合理混合多個(gè)不同養(yǎng)殖種類，既可以充分利用整個(gè)養(yǎng)殖池塘的空間，增大單位面積水體的養(yǎng)殖承載量，又可使各種天然餌料資源都合理的配置，更好地發(fā)揮養(yǎng)殖池塘生態(tài)效益[117-118]。

混養(yǎng)模式還能發(fā)揮養(yǎng)殖種類之間的協(xié)同作用[119]，一些魚(yú)類通過(guò)攝食活動(dòng)，清除池塘中水產(chǎn)動(dòng)物(對(duì)蝦)的殘餌和糞便，減少沉積[120]，提高餌料利用率，改善池塘養(yǎng)殖條件，也可通過(guò)攝食活動(dòng)，攪動(dòng)底層池水[121]，促進(jìn)上、下水層的對(duì)流，有利于養(yǎng)殖池塘底層的物質(zhì)循環(huán)及營(yíng)養(yǎng)流通，提高全池養(yǎng)殖動(dòng)物的生長(zhǎng)和產(chǎn)量[122]。

7 小結(jié)

對(duì)白斑綜合征病毒不同防治方法進(jìn)行了綜述，但這些防治手段各有其優(yōu)缺點(diǎn)。如傳統(tǒng)的治療和預(yù)防水產(chǎn)動(dòng)物疾病的方法是大量使用抗生素和化學(xué)藥物，但頻繁使用這些藥物極易引起養(yǎng)殖和水體環(huán)境的污染、藥物殘留、病原微生物產(chǎn)生耐藥性和破壞機(jī)體內(nèi)微生態(tài)平衡等諸多負(fù)面影響[123]；而中草藥具有天然、毒副作用小、無(wú)抗藥性、無(wú)殘留和耐藥性、資源豐富等獨(dú)特優(yōu)勢(shì)，完全符合發(fā)展無(wú)公害水產(chǎn)業(yè)、生產(chǎn)綠色水產(chǎn)品的病害防治原則[124]。益生菌制劑也具有促進(jìn)水產(chǎn)動(dòng)物生長(zhǎng)，降低生產(chǎn)成本，提高產(chǎn)品質(zhì)量，減少疾病的發(fā)生，改善水體污染等特點(diǎn)，因此益生菌制劑將來(lái)有可能成為抗生素的替代品，有著較好的發(fā)展前景[125]。采用RNAi技術(shù)和疫苗來(lái)注射免疫對(duì)蝦，對(duì)于水產(chǎn)養(yǎng)殖實(shí)際生產(chǎn)來(lái)說(shuō)耗費(fèi)成本太高，所以這種防治方法不適合大規(guī)模地投入到實(shí)際生產(chǎn)應(yīng)用中，而且水產(chǎn)疫苗要得到更好的推廣和應(yīng)用，需要具備用量少、效價(jià)高、保護(hù)力強(qiáng)、免疫期長(zhǎng)及使用安全方便等優(yōu)點(diǎn)，同時(shí)，疫苗相關(guān)新獸藥證書(shū)的申請(qǐng)也是個(gè)十分耗時(shí)的過(guò)程。

病原體、蝦體和養(yǎng)殖環(huán)境是產(chǎn)生蝦病的重要因素，三者相互影響，是蝦病產(chǎn)生與否的基礎(chǔ)。因此，應(yīng)當(dāng)從這三方面綜合考慮，采取切實(shí)有效的防治措施。主要包括利用中草藥這一綠色、環(huán)保藥物和益生菌等添加劑來(lái)提高蝦體自身非特異性免疫能力；結(jié)合混養(yǎng)吞食魚(yú)類攝食病蝦、死蝦的防控技術(shù)，能夠及時(shí)消滅傳播源，有效控制對(duì)蝦白斑綜合征病毒的蔓延；采取綜合的防治措施，減少漁藥的使用，生產(chǎn)綠色對(duì)蝦產(chǎn)品，促進(jìn)對(duì)蝦產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展。