HPLC測(cè)定秋水仙堿片前處理的優(yōu)化

葉丹怡

(上海市金山食品藥品檢驗(yàn)所，上海 201505)

秋水仙堿是典型的細(xì)胞有絲分裂毒素，其結(jié)構(gòu)中的C環(huán)與微管蛋白結(jié)合，阻止其聚合成紡錘絲，使細(xì)胞有絲分裂停止于中期，臨床上主要作為抗痛風(fēng)藥。秋水仙堿片收載于中、美、英等國的藥典。本實(shí)驗(yàn)按照中國藥典2015年版二部，采用高效液相色譜法，并采用UV檢測(cè)方法，對(duì)2批0.5 mg和2批1 mg的秋水仙堿含量進(jìn)行測(cè)定。

1 材料與方法

1.1 儀器

高效液相色譜儀Agilent1260（美國安捷倫公司）。

1.2 試藥與試劑

秋水仙堿共4個(gè)批次（1 mg的批號(hào)分別為A廠161R，17BN；0.5 mg的批號(hào)分別為B廠151120，170204）抽于市場；秋水仙堿對(duì)照品來源于中國食品藥品檢定研究院，批號(hào)為101176-201202，含量為93.6%；甲醇為色譜純，水為純化水（符合中國藥典規(guī)定）。

1.3 色譜條件

色譜柱：C8柱：ZORBAX SB-C8 150 mm×4.6 mm，3.5 μm，流動(dòng)相：甲醇-水（40∶60）；流速為1.0 mL/min。檢出波長為254 nm。

1.4 供試品溶液的制備

①直接制備。取樣品20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于秋水仙堿1 mg），置于100 mL量瓶中，加水適量，振搖1 h使秋水仙堿溶解，用水稀釋至刻度，搖勻，過濾，取濾液作為供試品溶液。

②其他制備。取4批片劑各20片，精密稱定，研細(xì)，精密稱取適量（約相當(dāng)于秋水仙堿1 mg），每批稱取平行的2份，即8份樣品，分別置于100 mL量瓶中，分別加5%甲醇、10%甲醇、15%甲醇及20%甲醇適量，振搖1 h使秋水仙堿溶解，用上述溶劑分別稀釋至刻度，搖勻，濾過，取濾液作為供試品溶液。

1.5 對(duì)照品溶液的制備

取秋水仙堿對(duì)照品10 mg，精密稱定，加水溶解并定量稀釋制成每1 mL中約含10 μg的溶液。

1.6 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)

取上述對(duì)照品溶液20 μL注入液相色譜儀中，理論塔板數(shù)為10975，回校率為99.4%，符合規(guī)定。

1.7 測(cè)定法

取上述對(duì)照品溶液和供試品溶液各20 μL，注入色譜儀中，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積計(jì)算秋水仙堿的含量。

2 結(jié)果與分析

2.1 HPLC-UV法測(cè)定不同規(guī)格堿片中秋水仙堿的含量

兩種規(guī)格的堿片秋水仙堿含量見表1。

表1 兩種規(guī)格的秋水仙堿含量

2.2 不同濃度甲醇溶液制成供試品的秋水仙堿含量

不同濃度甲醇溶液制成供試品的秋水仙堿含量見表2。

表2 不同濃度甲醇溶液制成的供試品的秋水仙堿含量

2.3 加標(biāo)回收

取1.5步驟中0.1mg/mL的對(duì)照品溶液5 mL3份，分別置于不同的50 mL容量瓶中，分別精密加入0.1 mg/mL的對(duì)照品溶液2.0mL、3.0mL及4.0mL，計(jì)算得出的回收率分別為99.1%、99.4%及99.5%，平均回收率為99.3%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.21%，說明所得的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確可靠。

3 討論

（1）按中國藥典2015年版的供試品提取方法，兩種規(guī)格秋水仙堿片所測(cè)得的含量均大大低于標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，造成假陽性的檢測(cè)結(jié)果；但如果使用適量甲醇破壞溶液的過飽和現(xiàn)象，就能避免這種假陽性。

（2）溶劑中甲醇含量的不同也使相同條件下秋水仙堿片的溶解度也有所區(qū)別，但是在15%甲醇溶液和20%甲醇溶液中，基本保持在一個(gè)穩(wěn)定值，由此可見，這兩個(gè)濃度的甲醇溶液已經(jīng)成功破壞過飽和現(xiàn)象造成的假陽性，可以使用這兩個(gè)濃度的甲醇溶液替代水溶液來作為秋水仙堿片含量測(cè)定處理時(shí)的溶劑。