胡盧巴種子的抗氧化活性

焦思鵬，楊靜慧，通信作者，劉艷軍，武肖琦，馮濤，汪海霞

胡盧巴種子的抗氧化活性

焦思鵬1，楊靜慧1，通信作者，劉艷軍1，武肖琦1，馮濤1，汪海霞2

（1. 天津農(nóng)學(xué)院 園藝園林學(xué)院，天津 300384；2. 天津市林業(yè)調(diào)查規(guī)劃設(shè)計(jì)院，天津 300112）

為了解胡盧巴的抗氧化活性，以胡盧巴種子為試材，以Vc、Ve、TBHQ（叔丁基對(duì)苯二酚）和BHT（2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚）為對(duì)照，測(cè)定了其提取物對(duì)DPPH自由基、超氧陰離子自由基和羥自由基的清除作用。結(jié)果顯示：胡盧巴種子提取物對(duì)DPPH自由基清除率最低，低于TBHQ、BHT和Vc、Ve；超氧陰離子自由基清除率居中，與BHT相同，高于TBHQ，低于Vc與Ve；清除羥自由基的能力最強(qiáng)，顯著高于其他4個(gè)抗氧化劑。進(jìn)一步測(cè)定胡盧巴提取物主要的抗氧化物質(zhì)黃酮和總酚含量，分別為0.080 g/L和0.650 g/L。

胡盧巴；提取物；抗氧化；黃酮；酚類(lèi)

胡盧巴（L.），屬于豆科蝶形花亞科胡盧巴屬，一年生草本植物[1]，全株具有香氣，抗寒，喜冷涼、干旱氣候，對(duì)土壤、氣候的適應(yīng)性強(qiáng)，生長(zhǎng)迅速。胡蘆巴的干燥成熟種子常作中藥，其性溫、味苦，入腎經(jīng)，具有溫腎壯陽(yáng)、祛寒除濕之功，用于治療寒疝、腹脅脹滿、寒濕腳氣等癥。近年來(lái)，國(guó)內(nèi)外學(xué)者從胡盧巴種子中提取分離出多種化學(xué)成分，主要包含甾體皂苷類(lèi)、三萜類(lèi)及黃酮類(lèi)[2]。

現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，胡盧巴具有廣泛的藥理作用，不僅可以降血糖、抗?jié)兛鼓[瘤、治療脂肪肝和慢性腎功衰竭，還可以對(duì)急性、慢性肝損傷進(jìn)行保護(hù)。此外，胡盧巴還具有抗氧化活性等功能[3]。石艷等[4]研究了胡盧巴對(duì)糖尿病大鼠的脂代謝及腎臟抗氧化防御功能。結(jié)果表明，胡盧巴能增強(qiáng)腎臟的抗氧化能力，調(diào)節(jié)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠的脂代謝紊亂。孫國(guó)棟等[5]研究了胡盧巴提取物的體外抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)胡盧巴提取物能清除1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH）和羥自由基。但是，缺乏胡盧巴種子抗氧化能力和清除自由基能力以及抗氧化物質(zhì)的基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。因此，本試驗(yàn)以Vc、Ve、TBHQ和BHT為對(duì)照組，以胡盧巴種子提取液為試驗(yàn)組，其中Vc、Ve、TBHQ和BHT作為抗氧化劑，具有一定的抗氧化能力與清除自由基的能力，進(jìn)一步比較分析4種抗氧化劑與胡盧巴種子提取液的清除自由基能力，從而得出胡盧巴種子浸提液的抗氧化能力的強(qiáng)弱。進(jìn)一步測(cè)定其主要抗氧化物黃酮與總酚含量，為胡盧巴的開(kāi)發(fā)和利用奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 材料

胡盧巴種子采自天津市大港區(qū)中塘鎮(zhèn)。

1.2 方法

胡盧巴種子提取液：取5 g干燥成熟的胡盧巴種子粉碎成粉末狀，加入95%乙醇10 mL研磨成勻漿，離心，取上清液保存于離心管中，于冰箱內(nèi)保存、備用。

對(duì)照組：用95%乙醇分別溶解Vc、Ve、TBHQ、BHT，配制成0.5 mmol/L溶液，備用。

對(duì)DPPH自由基的清除率：胡盧巴種子提取物及對(duì)照組對(duì)DPPH自由基的清除率參照Larrauri等[6]方法進(jìn)行，清除率=（-）/×100% （，分別表示對(duì)照組的吸光光度值和胡盧巴提取液的吸光光度值）。

對(duì)超氧陰離子自由基的清除率：胡盧巴種子提取物及對(duì)照組對(duì)超氧陰離子自由基的清除率采用光照核黃素法[7]測(cè)定，即分別用紫外分光光度計(jì)測(cè)定其吸光度，并依據(jù)上式計(jì)算清除率。

對(duì)羥自由基的清除率：胡盧巴種子提取液及對(duì)照組對(duì)羥自由基的清除率用水楊酸法[8]，并計(jì)算清除率：清除率=（-（-））/×100%（、、分別為對(duì)照組、添加待測(cè)液后以及待測(cè)液本底吸收光度值）。

黃酮含量測(cè)定采用硝酸鋁顯色法[9]，總酚含量測(cè)定采用Folin-Ciocalteau法[10]。

2 結(jié)果與分析

2.1 胡盧巴對(duì)DPPH自由基清除率的影響

從圖1可以看出，胡盧巴種子提取物和對(duì)照組對(duì)DPPH自由基的清除率有顯著差異，其中胡盧巴的清除率最低，顯著低于其他抗氧化劑，是TBHQ的39.7%，BHT的67.2%，Vc和Ve的97.2%和97.0%。

圖1 胡盧巴組對(duì)DPPH自由基清除率的影響

注：不同小寫(xiě)字母表示在5%水平的顯著性，大寫(xiě)字母表示在1%水平的顯著性。下同

2.2 胡盧巴對(duì)超氧陰離子自由基清除率的影響

從圖2可以看出，胡盧巴種子提取物和對(duì)照組對(duì)超氧陰離子自由基都有一定的清除作用，其清除率顯著高于TBHQ，是TBHQ的1.13倍；與BHT差異不顯著；顯著低于Vc和Ve，分別是Vc和Ve的86.8%和86.0%。

圖2 胡盧巴對(duì)超氧陰離子自由基清除率的影響

2.3 胡盧巴對(duì)羥自由基清除率的影響

從圖3可以看出，胡盧巴種子提取物對(duì)羥自由基清除率最強(qiáng)，顯著高于Ve、Vc、TBHQ與BHT等抗氧化劑，分別是Ve、Vc、TBHQ與BHT的1.07、1.02、1.21和1.16倍。

圖3 胡盧巴對(duì)羥自由基清除率的影響

2.4 胡盧巴總黃酮、總酚含量

從表1中可以得出，胡盧巴種子提取物總黃酮及總酚的含量均值分別為0.080 g/L和0.650 g/L。

表1 胡盧巴種子中總黃酮和總酚含量 g/L

指標(biāo)123平均值 總黃酮0.1000.0600.0800.080 總酚0.6530.5820.7140.650

3 討論

胡盧巴含有十分復(fù)雜的化學(xué)成分，大致可以分為皂甙、黃酮類(lèi)、酚類(lèi)、生物堿、氨基酸、酶、多糖、香豆素等，其中皂甙占大部分，其次是黃酮和酚類(lèi)。胡盧巴的抗氧化物質(zhì)主要是黃酮類(lèi)和酚類(lèi)物質(zhì)，含量分別是0.080 g/L和0.650 g/L。研究發(fā)現(xiàn)，藍(lán)莓及枇杷果實(shí)富含抗氧化物質(zhì)[11-12]，并且其黃酮與酚類(lèi)物質(zhì)也高于胡盧巴，表明藍(lán)莓和枇杷的抗氧化性強(qiáng)于胡盧巴。研究中胡盧巴的黃酮與酚類(lèi)物質(zhì)含量較低，對(duì)DPPH自由基等清除率也低。這一結(jié)果與扶慶權(quán)等[13]在研究櫻桃籽抗氧化活性以及劉長(zhǎng)姣等[14]研究五味子種子抗氧化活性結(jié)論相接近。但兩者研究的結(jié)果顯示，櫻桃籽的黃酮和五味子種子總酚均高于胡盧巴，并且DPPH自由基清除率也高于胡盧巴。所以，種子中含有黃酮、酚類(lèi)物質(zhì)越高，對(duì)DPPH自由基的清除率就越強(qiáng)，抗氧化性越好。

4 結(jié)論

本研究得出，胡盧巴種子提取物的DPPH自由基清除率最低，低于TBHQ、BHT和Vc、Ve，分別是TBHQ、BHT和Vc、Ve的0.38%、0.67%、 0.97%、0.96%；超氧陰離子自由基清除率居中，與BHT相同，高于TBHQ的1.13倍，低于Vc與Ve，是他們的0.87%；清除羥自由基的能力最強(qiáng)，顯著高于其他4個(gè)抗氧化劑，是TBHQ、BHT和Vc、Ve的1.07、1.02、1.21、1.16倍。本試驗(yàn)還測(cè)定了胡盧巴種子主要氧化物質(zhì)總黃酮與總酚的含量，分別為0.080 g/L和0.650 g/L。

[1] 何漢德，唐道生. 中藥胡蘆巴的研究[J]. 基層中藥雜志，2000，13（1）：35-36.

[2] 張仲，劉亞靜. 中藥胡蘆巴的化學(xué)成分研究進(jìn)展[J]. 中國(guó)藥業(yè)，2011，20（14）：77-78.

[3] 黃玉萍，張黎明，江麗霞，等. 胡盧巴多糖對(duì)小鼠試驗(yàn) 性肝損傷的保護(hù)作用[J]. 贛南醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2005，25（6）：757-758.

[4] 石艷，李才，孫波，等. 胡蘆巴種子有效成分對(duì)實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腎臟病變的保護(hù)作用[J]. 吉林大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2005，31（6）：875-878.

[5] 孫國(guó)棟，李新霞，李琳琳，等. 胡蘆巴提取物化學(xué)成分含量測(cè)定及體外抗氧化研究[J]. 新疆醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào)，2013，36（6）：772-776.

[6] Larrauri J A，Concepcion S M，F(xiàn)ulgencio S C. Effects of temperature on the free radical scavenging capacity of extracts from red and white grape pomace peels[J]. J Agr and Food Chem，1998，46（7）：2694-2697.

[7] 李春美，謝筆韻. 茶多酚及其氧化產(chǎn)物清除不同體系產(chǎn)生的活性氧自由基的分光光度法研究[J]. 精細(xì)化工，2000，17（4）：241-244.

[8] 顏軍，茍小軍，鄒全付，等. 分光光度法測(cè)定Fention反應(yīng)產(chǎn)生的羥自由基[J]. 成都大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2009，28（2）：91-93.

[9] 張燕，張洪斌，陳忠蔭，等. 磨盤(pán)草不同營(yíng)養(yǎng)器官中總黃酮和總酚含量測(cè)定[J]. 安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，37（35）：487-488.

[10] 蔡文國(guó)，吳衛(wèi)，邵金鳳，等. Folin-Ciocalte法測(cè)定魚(yú)腥草多酚的含量[J]. 食品科學(xué)，2010，30（14）：201-204.

[11] 夏凱麗，秦艷筠，楊靜慧，等. 10個(gè)藍(lán)莓品種在天津溫室促成栽培下果實(shí)內(nèi)在品質(zhì)差異研究[J]. 中國(guó)果樹(shù)，2018，5（4）：39-42.

[12]林素英，何松濤，謝文燕，等. 枇杷果實(shí)總酚和總黃酮的提取及抗氧化性研究[J]. 宜春學(xué)院學(xué)報(bào)，2016， 38（6）：90-94.

[13] 扶慶權(quán)，王海鷗，陳守江，等. 櫻桃籽總黃酮的提取及抗氧化活性的研究[J]. 南京曉莊學(xué)院學(xué)報(bào)，2017，11（6）：79-84.

[14]劉長(zhǎng)姣，張守勤，王曉英，等. 五味子果汁與種子抗氧化活性研究[J]. 食品研究與開(kāi)發(fā)，2014，35（14）：6-9.

Antioxidant activity of the seed inL.

JIAO Si-peng1, YANG Jing-hui1, Corresponding Author, LIU Yan-jun1, WU Xiao-qi1, FENG Tao1, WANG Hai-xia2

（1. College of Horticulture and Landscape, Tianjin Agricultural University, Tianjin 300384, China; 2. Tianjin Forestry Planning and Design Institute, Tianjin 300112, China）

In order to understand the antioxidant activity ofL., the scavenging effects of the extracts on DPPH free radicals, superoxide anion free radicals and hydroxyl free radicals of the seeds were determined with Vc、Ve、TBHQ（tert-butylhydroquinone）and BHT（2,6-tert-butyl-4-methylphenol）used as controls.The results showed that DPPH free radical removal rate was the lowest, lower than TBHQ, BHT, Vc and Ve. Superoxide anionic radical removal rate was in the middle, the same with that of BHT, higher than TBHQ, lower than Vc and Ve. Its hydroxyl radical scavenging ability was the strongest, significantly higher than the other four antioxidants. These phenomena were closely related to the difference of flavonoids and total phenols（0.080 g/L and 0.650 g/L）in the extracts.

L.; extracts; antioxidant; flavonoids; phenolic

1008-5394（2019）04-0027-03

10.19640/j.cnki.jtau.2019.04.006

S567.219

A

2019-01-15

天津市林果現(xiàn)代農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目（ITTFPRS2018002）；天津市科技特派員項(xiàng)目（18JCTPJC68000）

焦思鵬（1992-），男，碩士在讀，主要從事園藝植物生理方面的研究。E-mail：2289978790@qq.com。

楊靜慧（1961-），女，教授，博士，主要從事園藝植物栽培和生理生化研究。E-mail：jinghuiyang2@aliyun.com。

責(zé)任編輯：楊霞