液相色譜-串聯(lián)質譜法測定嬰幼兒配方乳粉中六種消毒劑殘留

王浩，陳江龍，張杉，趙麗，張旭

（國家食品質量安全監(jiān)督檢驗中心，北京 100094）

0 引 言

嬰幼兒配方乳粉是通過添加營養(yǎng)成分，使其組成在數(shù)量上和質量上無限接近母乳的營養(yǎng)元素為目標的的調制乳粉。嬰幼兒配方乳粉消費比例逐年增加，所以其安全問題備受廣泛關注。苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨都是常用的消毒劑，乳粉生產企業(yè)在生產環(huán)節(jié)及原料乳中有時會存在殘留，從而造成嬰幼兒營養(yǎng)乳粉中存在上述消毒劑污染；目前，國家還沒有嬰兒配方奶粉中消毒劑殘留的限量標準，為了保護廣大嬰幼兒的健康和利益，對嬰幼兒配方乳粉中消毒劑殘留進行監(jiān)控有著重要的現(xiàn)實意義。

目前，測定苯扎氯銨等六種消毒劑的方法有示差分光光度法[1]、毛細管電泳法[2]、液相色譜法[3-7]、液相色譜串聯(lián)質譜[8]等。液相色譜-質譜聯(lián)用技術是近年來新興的檢測技術,由于其對痕量殘留物質強大的定性定量能力,符合目前食品安全檢測所追求的快速高效定性定量測定要求,目前還未見對嬰兒配方奶粉中苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨等六種消毒劑殘留同時定性定量檢測的研究報道。本文采用水超聲溶解，乙腈除蛋白，基質外標法定量，采用高效液相色譜串聯(lián)質譜儀進行檢測,前處理簡單，靈敏度高，能夠為嬰兒配方奶粉中多種消毒劑殘留的監(jiān)管提供技術支撐。

1 材料與方法

1.1 試劑與試劑

1.2 主要儀器與設備

液相色譜-串聯(lián)三重四極桿質譜儀，美國Agilent公司；渦旋混合器，海門市其林貝爾公司；超聲波清洗儀，昆山市超聲儀器有限公司；離心機，上海安亭科學儀器廠；去離子水發(fā)生器，瑞士Millipore公司。

1.3 標準溶液的配制

1.3.1 標準儲備液

分別稱取適量的苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨標準品，分別用甲醇配成0.1 mg/mL的標準儲備液，該溶液在-18℃保存，有效期一年。

1.3.2 中間濃度標準溶液

用甲醇將標準儲備液稀釋成1.0μg/mL，該溶液在2～8℃保存，有效期三個月。

1.3.3 標準工作溶液

用甲醇將中間濃度標準溶液配制成苯扎溴銨、C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨、二癸基二甲基氯化銨、四丁基硫酸氫銨濃度均為50 ng/mL的標準工作液，該溶液在2～8℃保存，有效期一周。

3)在加木墊板后，錨桿支護預應力場壓應力區(qū)峰值和壓應力擴散范圍都出現(xiàn)明顯降低。應力峰值降低38%，-0.10、-0.08、-0.02 MPa等各應力等值面面積平均降低27%。

1.3.4 基質標準工作液

稱取約1.0 g陰性樣品,精確至0.01 g，置于10 mL玻璃離心管中，分別加入標準工作液：10μL、20μL、40μL、100μL、200μL，余下操作同1.3。

1.4 樣品處理

稱取1.0 g樣品,精確至0.01 g，置于10 mL具塞比色管中，加入2 mL 60℃～70℃熱水，渦旋30 s后，再加入3 mL乙腈，具塞振搖使蛋白質沉淀，超聲提取10 min，吸取1 mL上清液4℃條件下15 000 r/min離心5 min，液相色譜-串聯(lián)質譜測定。

1.5 儀器參數(shù)

1.5.1 色譜參數(shù)

色譜柱：Hypersil GOLD C18柱，4.6 mm×50 mm,1.9μm；流速：0.35 mL/min；柱溫25℃，進樣量3μL，流動相：20 mmolL乙酸銨水溶液(含0.2%甲酸）+甲醇=10:90，V/V。

1.5.2 質譜參數(shù)

離子源：電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子掃描；檢測方式：多反應檢測；干燥氣：N2；霧化氣壓力310 kPa；干燥氣溫度：350℃；干燥氣流速：10 L/min。

表1 六種消毒劑的質譜參數(shù)

2 結果與討論

2.1 樣品前處理條件優(yōu)化

乳粉基質復雜，富含脂肪和蛋白質，所以本方法在樣品中先加入2 mL水，渦旋1 min，使樣品中目標化合物充分溶解，再加入3 mL乙腈，去除樣品中蛋白質。此外，因為消毒劑殘留可能存在環(huán)境污染，所以不易做除油和過膜處理，最終采用4℃條件下15 000 r/min后直接進樣。這種前處理的方法簡便快速，既能充分提取樣品中苯扎溴胺等六種消毒劑殘留，又能除去樣品中的蛋白質，定量限均為0.5μg/kg，平均加標回收率＞85%，可以完全滿足實際檢測要求。

2.2 儀器條件

2.2.1 色譜柱的優(yōu)化

為了有利于色譜峰的分離及鋒形的改善，本方法分別采用資生堂MGⅢ-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,1.8μm)、Hypersil GOLD C18色譜柱(50 mm×4.6 mm,1.9μm)和Agilent Extend-C18色譜柱(150 mm×2.1 mm,5μm)進行分離試驗，發(fā)現(xiàn)Hypersil GOLD C18色譜柱(50 mm×4.6 mm,1.9μm))峰形及出峰時間較為合適。

2.2.2 流動相

苯扎溴胺等六種消毒劑極性相差很大，首先考慮用梯度洗脫的方式實現(xiàn)目標化合物的有效分離，但是隨后的實驗發(fā)現(xiàn)C16-苯扎氯銨會出現(xiàn)假陽性情況，因此確定等度洗脫的流動相。分別比較了20 mmolL乙酸銨水溶液(含0.2%甲酸）-乙腈、10 mmolL乙酸銨水溶液-乙腈、水-乙腈等三種體系，發(fā)現(xiàn)后兩種體系C12-苯扎氯銨、C14-苯扎氯銨、C16-苯扎氯銨會出現(xiàn)不同程度的峰形展寬，靈敏性降低。所以本實驗選擇20mmolL乙酸銨水溶液(含0.2%甲酸）-乙腈=10:90，V/V。

2.3 方法學結論

2.3.1 基質工作曲線、檢出限、定量限

乳粉富含油脂蛋白質，為了消除測定液中存在的基質效應，本方法首先在前處理過程中采取除油和除蛋白處理，同時采用空白樣品加標法配制的基質工作曲線，極大程度消除測定中的基質效應，同時又明顯提高了定量的準確性。用基質標準工作液分別進樣3μL，測定結果經(jīng)線性回歸（y為峰面積，Counts；x為濃度，μg/L），同時用空白樣品進行加標實驗，在信噪比均大于3的條件下能檢出，將此添加量定為檢出限，在信噪比均大于,10的條件下能檢出，將此添加量定為定量限。結果見表2。

表2 六種消毒劑的線性方程、線性關系、相關系數(shù)及檢出限

2.3.2 方法的回收率和精密度

選取空白樣品進行回收率和精密度試驗。每組分別定量加入苯扎溴胺等六種消毒劑標準品，添加水平分別為0.5μg/kg、1.0μg/kg、5.0μg/kg，按供試品溶液制備方法制備后進行測定,結果見表3。按供試品溶液制備方法制備后進行測定,結果見表3。從表3中可看出，不同濃度平均加標回收率87.3%～104.6%，平均相對標準偏差為2.96%～9.87%（n=6）。圖1為加標樣品中MRM色譜圖。

表3 加標樣品回收率與相對標準偏差（n=6）

圖1 苯扎溴胺等六種消毒劑的加標MRM色譜圖

2.4 實際樣品檢測

利用本方法對市場銷售的50種嬰幼兒營養(yǎng)乳粉進行檢測，其中32個樣品檢出C12-苯扎氯銨（濃度范圍為0.63μg/kg-50.7μg/kg，檢出率64.0%），6個樣品檢出C14-苯扎氯銨（濃度范圍為0.56μg/kg-2.39μg/kg，檢出率12.0%），2個樣品檢出四丁基硫酸氫銨（濃度分別為0.56μg/kg和2.30μg/kg，檢出率4.0%），1個樣品檢出二癸基二甲基氯化銨（濃度為22.6μg/kg，檢出率2.0%），苯扎溴銨和C14-苯扎氯銨未檢出。上述結果表明，嬰幼兒營養(yǎng)乳粉中確實存在消毒劑殘留，其對嬰幼兒健康存在的風險應當引起國家監(jiān)管部門及嬰配生產企業(yè)重視。

3 結論

建立了嬰幼兒配方乳粉中苯扎溴胺等六種消毒劑的液相色譜-串聯(lián)質譜測定方法。該法樣品加標回收率87.3%～104.6%，平均相對標準偏差為2.96%～9.87%（n=6），定量限及精密度均能滿足殘留檢測要求，能為我國嬰幼兒配方乳粉中消毒劑殘留的監(jiān)管與監(jiān)督提供技術支撐。