原發(fā)性高血壓并發(fā)2型糖尿病患者與MTHFR C677T基因的相關(guān)性研究

隋小芳,徐 男,費(fèi)秀斌,黃佳濱,范巧菊,王鳳玲*

(1.佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院 老年病科,黑龍江 佳木斯154002；2.佳木斯大學(xué)老年醫(yī)學(xué)研究生)

亞甲基四氫葉酸還原酶(MTHFR)催化5，10-亞甲基四氫葉酸轉(zhuǎn)化為5-甲基四氫葉酸，這一過程為同型半胱氨酸到甲硫氨酸的甲基化提供了碳源[1]。MTHFR C>T的轉(zhuǎn)換導(dǎo)致酶活性的降低，進(jìn)而同型半胱氨酸水平增高[2]。本研究旨在通過檢測高血壓并發(fā)糖尿病患者中MTHFR C>T的突變頻率，探討高同型半胱氨酸水平與糖尿病的發(fā)生和發(fā)展的關(guān)系，為臨床更好的治療和預(yù)防高血壓和糖尿病的發(fā)生和發(fā)展奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 研究對象

本研究總計(jì)納入了從2017年11月到2018年3月就診于佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院的患者，嚴(yán)格按照實(shí)驗(yàn)納入標(biāo)準(zhǔn)排除后有317人符合，同時(shí)，選取同期體檢中心73人作為對照組共同納入本研究。最終，本研究共納入113名高血壓患者(HTN組)、101名2型糖尿病患者(T2D組)、103名高血壓并發(fā)2型糖尿病組(HTN+T2D組)和73名健康人(control組)。

所有以上研究對象是長期居住在佳木斯地區(qū)且沒有血緣關(guān)系的漢族人，本研究已經(jīng)通過佳木斯大學(xué)附屬第一醫(yī)院倫理委員會(huì)的認(rèn)可，且已經(jīng)獲得研究對象的知情同意書，同意提供外周靜脈血做基因型檢測分析。

1.2 納入標(biāo)準(zhǔn)

(1)年齡≥18歲；(2)沒有重大疾病(肝腎衰竭、癌癥等)或傳染性疾病史；(3)原發(fā)性高血壓組納入標(biāo)準(zhǔn)參照2017年《高血壓防治指南》；(4)2型糖尿病診斷標(biāo)準(zhǔn)符合1999年WHO糖尿病專家委員會(huì)報(bào)告。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

采集所有受試者靜脈血2 ml于紫色抗凝真空采血管中，放置-20℃冰箱中冷藏保存。DNA提取使用傳統(tǒng)的實(shí)驗(yàn)方法(酚氯仿方法)。采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制片段長度多態(tài)性對SNP進(jìn)行基因型分析，并用高分辨溶解曲線進(jìn)行基因型分析。為了保證基因分型的質(zhì)量，我們隨機(jī)選擇了三個(gè)基因型樣品進(jìn)行直接測序,未見差異。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

運(yùn)用SPSS 19.0版本做數(shù)據(jù)處理和分析。哈迪溫伯格平衡分析檢驗(yàn)群體的代表性，t檢驗(yàn)用于樣本均值間的比較，分類變量用頻率表示；χ2檢驗(yàn)分析MTHFR等位基因頻率與基因型頻率比較。本研究所有的統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)結(jié)果均為雙尾，P<0.05有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各實(shí)驗(yàn)組臨床資料的比較

HTN組、T2D組、HTN+T2D組分別與control組的比較，結(jié)果見表1。四組在年齡、性別無明顯差異(P>0.05)。其中HTN組、T2D組、HTN+T2D組中同型半胱氨酸水平分別高于control組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。T2D組、HTN+T2D組中甘油三酯水平高于control組，HTN組、HTN+T2D組中血壓高于control組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，其余未見有明顯差異(P>0.05)。

表1 各實(shí)驗(yàn)組臨床基線數(shù)據(jù)的比較

注：M:男,F:女,Hcy:同型半胱氨酸TG:甘油三酯,TC:總膽固醇,LDL:低密度脂蛋白,HDL:高密度脂蛋白,FBG:血糖,SBP:收縮壓,DBP:舒張壓,PP:脈壓差。*表示P<0.05。

2.2 各實(shí)驗(yàn)組患者哈迪溫伯格平衡分析

HTN組、T2D組、HTN+T2D組和control組的哈迪溫伯格平衡分析檢驗(yàn)結(jié)果見表2，結(jié)果顯示各組P>0.05，說明樣本具有群體代表性。

表2 各實(shí)驗(yàn)組患者M(jìn)THFRC677T的哈迪溫伯格平衡分析

2.2 各實(shí)驗(yàn)組患者M(jìn)THFR C677T基因型和等位基因頻率的比較

HTN組、T2D組、HTN+T2D組和control組MTHFR C677T基因型和等位基因頻率的組間比較，結(jié)果見表3。HTN組、T2D組、HTN+T2D組T等位基因頻率顯著高于control組，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(61.06% vs.41.78%,61.39% vs.41.78%,53.88% vs.41.78%,Prangge=0.0003-0.03)；HTN組、T2D組TT基因型頻率明顯高于control組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(38.94% vs.13.70%,34.65% vs.13.70%,P=0.0007)，HTN+T2D組TT基因型頻率高于control組，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(25.24% vs.13.70%,P=0.06)，其余組未見明顯差異(P>0.05)。

表3 各實(shí)驗(yàn)組患者M(jìn)THFRC677T的基因型頻率和等位基因頻率

注：P<0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

高血壓并發(fā)糖尿病患者的心血管疾病發(fā)生率會(huì)明顯上升，基于這兩種疾病基礎(chǔ)罹患心血管疾病風(fēng)險(xiǎn)增加2-4倍[3]。近來有研究表明同型半胱氨酸水平與2型糖尿病及心血管疾病相關(guān)，MTHFR C>T降低了酶的活性，引起同型半胱氨酸水平增高，機(jī)體活性氧的破壞性產(chǎn)生導(dǎo)致胰島素抵抗，進(jìn)而引起糖尿病的發(fā)生[4，5]。國外有研究表明MTHFR C>T與糖尿病無明顯關(guān)聯(lián)，與本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果不同，可能是由于地區(qū)、種族差異，使基因變異的頻率不同，如C677T的TT基因型的頻率在印度的拉其普特地區(qū)人群中發(fā)現(xiàn)為7.8%，而在印度的科姆、梅泰、帕特等地區(qū)人群中未發(fā)現(xiàn)這種基因型[6，7]。此外，本研究結(jié)果顯示高血壓并發(fā)2型糖尿病患者的MTHFR 677T基因型頻率均低于單純高血壓和糖尿病患者，CC、CT基因型頻率高于單一病種的患者，但未有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，未來需進(jìn)一步研究。

綜上，本研究結(jié)果表明：MTHFR 677T基因型與高血壓和2型糖尿病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)相關(guān)；與高血壓并發(fā)2型糖尿病可能無關(guān)，尚需未來進(jìn)一步探討。