高效液相色譜同時測定游泳池水中二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸的方法研究

吳 飛 陳 晨

（揚州市疾病預防控制中心 江蘇 揚州 225002）

對游泳池水進行嚴格的消毒殺菌，是防止各種疾病的傳播，保障游泳者健康與池水水質(zhì)的必要措施。我國 GB26370-2010《含溴消毒劑衛(wèi)生標準》[1]規(guī)定，溴氯海因和二溴海因適用于游泳池水、污水和一般物體表面消毒。GB/T36758-2018《含氯消毒劑衛(wèi)生要求》[2]規(guī)定，二氯海因可用醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)、公共場所和水的消毒。

二氯海因、溴氯海因和二溴海因均屬乙內(nèi)酰脲類衍生物，在水中水解生成5,5-二甲基乙內(nèi)酰脲、次溴酸和次氯酸，起消毒殺菌作用。但其在消毒過程中可與水中有機物發(fā)生反應，生成對人體有害的鹵代消毒副產(chǎn)物。大量研究表明，鹵乙酸僅次于三鹵甲烷的第二大類 DBPs，其濃度約占DBPs總量的13%，但致癌風險占總致癌風險的91.95%以上。常見的HAAs 有 一氯乙酸、二氯乙酸、三氯乙酸、一溴乙酸、二溴乙酸、三溴乙酸、溴氯乙酸、一溴二氯乙酸、二溴一氯乙酸9 種[3]。目前文獻報道的測定乙內(nèi)酰脲的方法有液相色譜法[4]；9種鹵乙酸的檢測方法有液相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜-質(zhì)譜法、氣相色譜法[3,5-6]，前兩種方法儀器設備價格昂貴，難以在基層實驗室開展檢測，后一種方法需要衍生，操作繁瑣，本實驗在保證目標化合物峰型對稱性和分離效果的條件下，通過適當加大進樣量，建立了同時測定游泳池水中二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸的高效液相色譜分析方法

1.實驗部分

1.1 儀器

1290型高效液相色譜儀，配自動進樣器和二極管陣列檢測器（美國Agilent公司）。

1.2 試劑

二甲基乙內(nèi)酰脲、9種鹵乙酸標準品（上海安譜公司）；甲醇 (上海安譜公司CNW)；磷酸氫二鈉、磷酸（國藥集團化學試劑有限公司）。

1.3 標準儲備液與標準溶液配制

分別取適量的二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸標準品（精確到0.01mg）用純水溶解定容至50ml，配制濃度為1000mg/L的混合標準儲備液，置于冰箱中保存。精密吸取一定量的標準儲備液，用純水逐級稀釋成0.02mg/L～20.0mg/L混合標準溶液系列。

1.4 實驗方法

1.4.1 樣品前處理 均勻水樣經(jīng)0.45μm微孔濾膜過濾后，收集約1.5ml按色譜條件進行測定。

1.4.2 色譜條件 PICKERING-C8 色譜柱（4.6 mm×250mm，5μm）；柱溫30℃；流量1.0ml/min；進樣體積100μL；檢測波長為210nm,流動相：A為甲醇，B為0.01mol/L磷酸氫二鈉（PH7.5）。梯度洗脫程序：0～6min時，A為5%；6～20min時，A由5%升至20%，20～25min時，A由20%降至5%，保持5min。

圖1 混合標準溶液色譜圖

2.結(jié)果

2.1 流動相條件的選擇

為確定合適的流動相和梯度洗脫程序,分別采用乙腈-水、甲醇-水、甲醇-0.02mol/L乙酸銨、甲醇-0.01mol/L磷酸氫二鈉作為流動相進行實驗，并比較了在不同pH條件下的分離度，在柱溫30℃；流量1.0ml/min；流動相：A為甲醇，B為0.01mol/L磷酸氫二鈉（PH7.5），0～6min時，A為5%；6～20min時，A由5%升至20%，20～25min時，A由20%降至5%，保持5min的條件下甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸能達到有效分離且峰型對稱性好，游泳池水中尿素在此條件下不保留，不對檢測產(chǎn)生干擾，故選用上述流動相比例作為本實驗檢測條件。

2.2 檢測波長的選擇

利用二極管陣列檢測器在190nm～400nm之間進行波長掃描，在本流動相條件下二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸最大吸收波長在200nm～216nm之間，綜合考慮10種化合物的檢測靈敏度和不同檢測波長下基線噪聲因素，選擇 210nm作為本方法的檢測波長。

2.3 標準曲線和檢出限

用純水稀釋混合標準儲備溶液配制成0.02、0.05、0.10、0.25、0.50,1.00,5.00，10.0,20.0mg/L混合標準溶液,按實驗方法進行測定,并繪制標準曲線。結(jié)果表明：僅一氯乙酸0.5～20.0mg/L范圍，二甲基乙內(nèi)酰脲和其余9種鹵乙酸的質(zhì)量濃度均在0.02～20.0mg/L范圍內(nèi)與其峰面積呈線性關(guān)系,見表1。

2.4 精密度與回收實驗

分別向自來水樣中添加低、中、高三個濃度的二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸混合標準溶液，按上述實驗條件分別進行6次測定，見表2。

表1 線性回歸方程、相關(guān)系數(shù)及檢出限

表2 精密度和回收實驗結(jié)果（n=6）

3.結(jié)論

本實驗建立了采用高效液相色譜同時測定游泳池水中二甲基乙內(nèi)酰脲和9種鹵乙酸的檢測方法.方法的建立對了解游泳池水中的有毒有害物質(zhì)，進行有毒有害物質(zhì)的篩查，保障游泳者、游樂者、藝術(shù)表演者的身體健康提供了可靠的科學依據(jù)。