不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛體色及部分免疫指標(biāo)的影響

孫金輝 李家鑫 崔培 楊燕菁 魏東 白東清

摘要：研究了不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛（Copadichromis trimaculatus）體色以及部分免疫指標(biāo)的影響。試驗(yàn)配制4種飼料，分別為不添加藻粉的基礎(chǔ)組和添加藻粉的鹽藻組、裂壺藻組及小球藻組，添加水平均為1%。將平均體重為（9.39±0.55） g的180尾血艷紅慈鯛，隨機(jī)分為4組，每組3次重復(fù)，每次重復(fù)設(shè)置15尾魚，進(jìn)行為期45 d的攝食生長試驗(yàn)。結(jié)果表明，鹽藻組皮膚和鰭條中總類胡蘿卜素含量顯著高于其他3組（P<0.05），裂壺藻組對(duì)血艷紅慈鯛體表a*的增加有著明顯的促進(jìn)作用（P<0.05）。鹽藻組可顯著提高血艷紅慈鯛肝臟中的酸性磷酸酶（AKP）、堿性磷酸酶（ACP）和谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）的活性（P<0.05），而各組試驗(yàn)魚血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）的活性均無顯著差異，空白組含量較高。鹽藻組和裂壺藻組對(duì)血艷紅慈鯛體色有著明顯的改善作用，鹽藻組可提高其肝臟的免疫機(jī)能。

關(guān)鍵詞：血艷紅慈鯛（Copadichromis trimaculatus）;體表著色;免疫指標(biāo)

中圖分類號(hào)：S9? ? ? ? ?文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A

文章編號(hào)：0439-8114（2019）02-0100-04

DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2019.02.022? ? ? ? ? ?開放科學(xué)（資源服務(wù)）標(biāo)識(shí)碼（OSID）：

血艷紅慈鯛（Copadichromis trimaculatus）為馬拉維湖特有的巖棲類慈鯛，因其體表鮮艷的血紅色和較高的懷卵量，得到大多數(shù)觀賞魚養(yǎng)殖者的青睞。國內(nèi)經(jīng)多代繁殖的慈鯛品質(zhì)出現(xiàn)退化現(xiàn)象，原生態(tài)環(huán)境與養(yǎng)殖環(huán)境的差異也導(dǎo)致了其體色暗淡，降低其觀賞及經(jīng)濟(jì)價(jià)值。如何維持慈鯛的良好品質(zhì)，已成為養(yǎng)殖過程中一個(gè)普遍性問題。

除環(huán)境和基因外，改變飼料的營養(yǎng)成分在一定程度上也可重新展現(xiàn)慈鯛的美麗[1]，而在飼料中添加著色劑也是改變魚類體色的一種有效方式，可以提高其觀賞價(jià)值。目前，將微藻作為飼料添加劑來提高魚的生長性能及控制體色方面已有諸多研究[2]，但對(duì)于血艷紅慈鯛的研究還未見報(bào)道。微藻中含有各種多糖和大量的天然色素[3]，已有研究表明微藻多糖可增強(qiáng)免疫力、具有抗病毒抗炎等多種功效[4]。藻類對(duì)于提高水生動(dòng)物的生長、免疫力以及增強(qiáng)其體色都具有重要意義[5]。

本研究通過在飼料中添加鹽藻、裂壺藻及小球藻探究其對(duì)血艷紅慈鯛體色及部分免疫指標(biāo)的影響，旨在為血艷紅慈鯛增色餌料的研制和開發(fā)提供理論依據(jù)，提高血艷紅慈鯛的觀賞價(jià)值。

1? 材料與方法

1.1? 試驗(yàn)用魚及飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)選擇3月齡血艷紅慈鯛（9.39±0.55） g為試驗(yàn)對(duì)象，分別投喂添加1%的鹽藻、1%的裂壺藻、1%的小球藻以及不添加藻粉的4組試驗(yàn)飼料，每個(gè)試驗(yàn)組下設(shè)置3個(gè)平行，每個(gè)平行喂養(yǎng)15尾血艷紅慈鯛，以Diet1-Diet4分別表示對(duì)照組、鹽藻組、裂壺藻組、小球藻組，養(yǎng)殖期內(nèi)水溫控制在（26±0.5） ℃，pH為7.8±0.2，投餌率3%，每天9：00和15：30投喂，試驗(yàn)持續(xù)養(yǎng)殖45 d。

1.2? 樣本采集

在試驗(yàn)過程中，每15 d取樣1次，取樣前各試驗(yàn)組血艷紅慈鯛禁食24 h，每重復(fù)組取10尾魚，使用色彩色差儀測(cè)定其體色，對(duì)魚進(jìn)行尾靜脈取血（每重復(fù)組選出2尾用不含有抗凝劑的針管取血），離心（4 000 r/min ，5 min，4 ℃），取上清并于-80 ℃保存。取皮膚（測(cè)線以上）、尾鰭、胸鰭，取肝臟和腸速凍，-80 ℃保存，待測(cè)酶活力。

1.3? 總類胡蘿卜素測(cè)定

用電子分析天平準(zhǔn)確分別稱取皮膚（帶鱗片）、鰭（背鰭、尾鰭、臀鰭）、肌肉0.1 g，置于5 mL離心管中，用丙酮定容至5 mL，放入超聲波清洗機(jī)低溫超聲波振蕩45 min后取出，以4 000 r/min離心10 min，4 ℃靜置24 h。將所得的色素萃取液分別置于1 cm比色皿中，以丙酮為空白對(duì)照管（比色皿加蓋以防止丙酮揮發(fā)，影響比色效果），用Thermo Spectronic UVmini-1240型紫外分光光度計(jì)進(jìn)行掃描，找出最大吸收峰處的波長（448 nm），在該波長下測(cè)定各組色素萃取液的吸光度?？傤惡}卜素含量（mg/kg）=（A×K×V）/（E×G），其中，E為摩爾消光系數(shù)（2 500），G為樣品質(zhì)量（g），A為吸光度，K為常數(shù)（104），V為提取液體積（mL）。

1.4? 體表色差值的測(cè)定

分別在試驗(yàn)開始前、第15天、第30天和結(jié)束時(shí)測(cè)定試驗(yàn)魚體表色差值，用紗布將魚體表面的水分吸干，將色差儀的探頭垂直緊貼于魚體背鰭和測(cè)線間部位測(cè)定各試驗(yàn)魚體表亮度值L*、紅度值a*、黃度值b*。

1.5? 生化指標(biāo)測(cè)定

第45天時(shí)，對(duì)試驗(yàn)魚進(jìn)行尾靜脈取血（每重復(fù)組選出6尾用不含有抗凝劑的針管取血），離心（4 000 r/min，5 min，4 ℃），取肝臟和腸速凍，-80 ℃保存，待測(cè)酶活力。樣品解凍后用預(yù)冷的生理鹽水清洗干凈并用濾紙吸干后稱重。在預(yù)冷的生理鹽水中漂洗，除去血液，濾紙拭干，將組織塊和預(yù)冷勻漿介質(zhì)（0.85%的氯化鈉注射液）按1∶9混合，在勻漿器中進(jìn)行勻漿，4 ℃下4 000 r/min離心15 min，取上清液備用。采用丙谷丙轉(zhuǎn)氨酶（GPT）試劑盒、谷草轉(zhuǎn)氨酶（GOT）試劑盒測(cè)定血艷紅的肝臟、血清;采用酸性磷酸酶（ACP）試劑盒、堿性磷酸酶（AKP）試劑盒測(cè)定血艷紅的腸、肝臟、血清。

1.6? 數(shù)據(jù)分析

數(shù)據(jù)使用平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，試驗(yàn)結(jié)果采用SPSS 18.0進(jìn)行單因素方差分析（One-way ANOVA），差異顯著時(shí)進(jìn)行鄧肯多重比較（Duncans multiple range tests），P<0.05表示差異顯著。

2? 結(jié)果與分析

2.1? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛皮膚中總類胡蘿卜素含量的影響

添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛皮膚中總類胡蘿卜素含量的影響見表1。由表1可知，血艷紅慈鯛皮膚中總類胡蘿卜素的含量在第15天和第30天時(shí)各試驗(yàn)組無顯著性差異，第45天時(shí)，鹽藻組皮膚中總類胡蘿卜素含量顯著高于對(duì)照組、裂壺藻組和小球藻組。

2.2? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛鰭條中總類胡蘿卜素含量的影響

添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛鰭條中總類胡蘿卜素含量的影響見表2。由表2可知，血艷紅鰭條中總類胡蘿卜素的含量，在第15天和第30天時(shí)各試驗(yàn)組無顯著性差異，第45天時(shí)，添加藻粉組顯著高于對(duì)照組。

2.3? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛 L*值的影響

各試驗(yàn)組血艷紅慈鯛L*值（表3）無顯著性差異，整體呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì)。

2.4? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛a*值的影響

添加不同藻源組血艷紅慈鯛a*大致呈上升趨勢(shì)（表4），其中第15天時(shí)，裂壺藻組a*顯著高于小球藻組，與對(duì)照組和鹽藻組無顯著性差異;第30天時(shí)，裂壺藻組顯著高于小球藻組、對(duì)照組與鹽藻組無顯著性差異;第45天時(shí)，裂壺藻組顯著高于其他3組。

2.5? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛腸道生化指標(biāo)的影響

添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛腸道ACP、AKP活性的影響見表5，其中Diet 1、Diet 2、Diet 4組腸道的ACP活性顯著高于Diet 3組（P<0.05），AKP活性Diet 4組顯著高于Diet 3組（P<0.05）。

2.6? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛肝臟生化指標(biāo)的影響

添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛肝臟ACP、AKP、GOT、GPT活性的影響見表6。其中，Diet 2組肝臟的ACP活性和GPT活性都顯著高于Diet 1、Diet 3和Diet 4組（P<0.05），AKP活性顯著高于Diet 4，與Diet 1、Diet 3無顯著性差異（P>0.05），GOT活性與其他各組無顯著性差異。

2.7? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛血清生化指標(biāo)的影響

添加不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛血清中ACP、AKP、GOT、GPT活性的影響見表7，血清中ACP、AKP、GOT、GPT活性各試驗(yàn)組組在統(tǒng)計(jì)學(xué)上沒有顯著差異（P>0.05），但對(duì)照組的ACP、AKP、GOT、GPT活性都要高于添加不同藻源。

3? 討論

3.1? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛皮膚、鰭條、肌肉中總類胡蘿卜素含量的影響

類胡蘿卜素是一種脂溶性色素，魚體表由黃到紅的顏色都是由其決定的[6]，而魚體自身又不能合成類胡蘿卜素只能將從食物中獲取的類胡蘿卜素將其沉積或轉(zhuǎn)化為自身所需的類胡蘿卜素。β-胡蘿卜素是鹽藻中類胡蘿卜素的主要組成部分[7]，本試驗(yàn)中，第45天時(shí)，鹽藻組慈鯛皮膚中總類胡蘿卜素的含量要顯著高于對(duì)照組、裂壺藻組和小球藻組，添加藻粉后各組鰭條中總類胡蘿卜素的含量均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），這表明鹽藻中的類胡蘿卜素經(jīng)過代謝能夠在血艷紅慈鯛體內(nèi)得到有效轉(zhuǎn)化，從而起到增色效果，這與楊育凱等[8]和方珍珍等[9]研究相符，說明3種藻粉對(duì)于血艷紅均有一定增色效果，其中鹽藻的增色效果最好。

3.2? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛L*、a*、b*的影響

一般情況下，對(duì)血艷紅慈鯛的體表紅色是用肉眼來進(jìn)行識(shí)別的，但當(dāng)其紅色差別不大時(shí)，很難有一個(gè)準(zhǔn)確的評(píng)判，為了建立更好的分色評(píng)判系統(tǒng)，在測(cè)定血艷紅慈鯛皮膚、鰭條和肌肉中類蘿卜素的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步對(duì)其體表紅質(zhì)L*、a*、b*數(shù)值做了相關(guān)測(cè)定。在姜志強(qiáng)等[10]和崔培等[11]對(duì)錦鯉的研究中發(fā)現(xiàn)，以螺旋藻和蝦青素為著色劑，對(duì)錦鯉魚體表紅度a*值的增加都表現(xiàn)出了較好的效果。血艷紅作為觀賞魚的一種，通常考察的是其紅度值和亮度值，本試驗(yàn)裂壺藻組對(duì)血艷紅體色表現(xiàn)出較好的促進(jìn)作用，可能與其含有大量的DHA有關(guān)，宋建婷等[12]研究表明，類胡蘿卜素作為一種脂溶性色素，必須以脂類為載體運(yùn)輸和吸收利用，若脂類含量不足，會(huì)影響到魚體消化道對(duì)飼料原料中類胡蘿卜素的吸收。只有保證有足夠量的飼料油脂含量，才可有效保障魚體對(duì)飼料中的色素物質(zhì)的吸收。

3.3? 不同藻源對(duì)血艷紅慈鯛ACP和AKP活力的影響

ACP和AKP 在各種生物體內(nèi)都大量存在，一方面其在體內(nèi)營養(yǎng)物質(zhì)的消化、吸收、運(yùn)輸中起著關(guān)鍵作用，另一方面還參與對(duì)磷酸酯進(jìn)行水解，在機(jī)體消化代謝中起著關(guān)鍵作用[13]，同時(shí)還具有機(jī)體防御、免疫調(diào)節(jié)和很強(qiáng)的解毒效果[14]，作為溶菌酶的重要組成，其通過自身的水解作用清除體內(nèi)異物[15]，它們的活性在一定水平上可以反映整個(gè)機(jī)體的免疫情況。黃亮華等[16]的研究表明裂壺藻能提高刺參的免疫機(jī)能。馮偉[17]的研究表明，裂壺藻可以提高對(duì)蝦的免疫機(jī)能，在飼料中添加1%鹽藻可顯著提高血艷紅肝臟中的AKP和ACP活性（P<0.05），說明鹽藻具有提高血艷紅免疫機(jī)能的作用，這可能與鹽藻含有大量的β-胡蘿卜素有關(guān)。高前欣[18]研究表明類胡蘿卜素的抗氧化作用可有效地捕殺動(dòng)物體內(nèi)過量的活性氧和自由基，提高動(dòng)物的非特異性免疫機(jī)能。

3.4? 不同藻源對(duì)血艷紅體內(nèi)GOT和GPT活力的影響

轉(zhuǎn)氨酶是催化氨基酸和酮酸之間氨基轉(zhuǎn)移的一類酶，在生物體組織中普遍存在，GOT和GPT 是其中最重要的兩種，是生命體正常生命活動(dòng)不可缺少的酶，在生物體大多數(shù)物質(zhì)代謝過程中有著非常重要的作用[19]。正常情況下，GOT和GPT在血清中活性極低，但當(dāng)肝臟細(xì)胞受損或通透性改變后，血清GOT 和GPT的值就會(huì)升高，因此GOT和GPT是肝臟損傷的重要指示酶[19]。本試驗(yàn)中，鹽藻組肝臟中GOT活力與其他各組無顯著性差異，GPT活性顯著高于對(duì)照組、裂壺藻組、小球藻組（P<0.05），這表明在飼料中添加一定量的鹽藻可以平衡飼料中氨基酸的含量，使機(jī)體的氨基酸代謝維持在一個(gè)穩(wěn)態(tài)，在一定程度上提高了氨基酸的吸收效果，減輕了血艷紅慈鯛肝臟的負(fù)擔(dān)。而3個(gè)藻組血清中GOT和GPT的含量均與對(duì)照組無顯著差異，說明在飼料中添加一定量藻粉對(duì)魚體肝臟沒有造成負(fù)影響，這與張燕[20]研究結(jié)果一致。

4? 結(jié)論

本試驗(yàn)通過在飼料中添加3種不同藻粉投喂血艷紅慈鯛，研究結(jié)果表明，①在飼料中添加3種藻粉對(duì)血艷紅慈鯛的生長沒有明顯的促進(jìn)作用;②在飼料中添加1%鹽藻能顯著提高血艷紅皮膚中總類胡蘿卜素含量，飼料中添加1%裂壺藻能顯著提高血艷紅慈鯛體表紅質(zhì)a*值，說明這兩種藻粉具有促進(jìn)血艷紅著色的作用（P<0.05）;③在飼料中添加1%鹽藻可顯著提高肝臟中的AKP、ACP和GPT活性（P<0.05），可促進(jìn)魚體肝臟的代謝機(jī)能;④飼料中添加裂壺藻、鹽藻、小球藻對(duì)血艷紅慈鯛的肝臟不會(huì)產(chǎn)生副作用。

參考文獻(xiàn)：

[1] 吳? 勐.三湖慈鯛的血統(tǒng)和品質(zhì)[J].水族世界，2014（1）：142-149.

[2] 陳玉春，顧雪飛，劉? 敏.5種中草藥對(duì)鯉血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶及紅細(xì)胞過氧化氫酶活性的影響[J].淡水漁業(yè)，2007， 37（5）：11-13.

[3] 張繼紅，任丹丹，姜玉聲，等.微藻營養(yǎng)價(jià)值及其在水產(chǎn)生物營養(yǎng)強(qiáng)化中的應(yīng)用[J].食品工業(yè)科技，2016，37（20）：371-376.

[4] 查榮博，張? 輝，孫佳明.微藻的有效成分及生物活性[J].吉林中醫(yī)藥，2015，35（1）：64-67.

[5] 谷建勇.藻類對(duì)動(dòng)物的營養(yǎng)和保健作用[J].浙江畜牧獸醫(yī)，2002，27（3）：42.

[6] 崔? 培，姜志強(qiáng)，崔寬寬.類胡蘿卜素對(duì)魚類功能的作用及影響魚類著色效果的因素[J].天津水產(chǎn)，2012（1）：4-9.

[7] WATARU M，KATSUMI Y，SHOJI K. Carotenoid composition of Sprulina maxina[J].Bulletin of the Japanese Society of Scientific Fisheries，1986，52（7）：1225-1227.

[8] 楊育凱，陳效儒，林黑著，等.飼料鹽藻水平對(duì)卵形鯧鲹體色和生長的影響[J].水產(chǎn)科學(xué)，2017，36（3）：336-340.

[9] 方珍珍，閆珊珊，白東清，等.鹽藻、辣椒粉及溫度對(duì)紅白錦鯉生長及著色的影響[J].飼料工業(yè)，2014，35（18）：24-29.

[10] 姜志強(qiáng)，石洪玥，崔? 培，等.不同蛋白水平的螺旋藻飼料對(duì)錦鯉體色、生長及免疫的影響[J].東北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，43（3）：95-103.

[11] 崔? 培，姜志強(qiáng)，王? 雪，等.不同蛋白水平的蝦青素飼料對(duì)錦鯉體色、生長及免疫的影響[J].上海海洋大學(xué)學(xué)報(bào)，2012，21（3）：382-388.

[12] 宋建婷，周光宏.影響β-胡蘿卜素吸收的因素[J].中國飼料，2002（22）：16-17.

[13] POELSTRA K，BAKKER W W，KLOK P A，et al. Dephosphorylation of endotoxin by alkaline phosphatase in vivo[J].American Journal of Pathology，1997，151（4）：1163-1169.

[14] PIPE R K. Hydrolytic enzymes associated with granular haemocytes of the marine mussel Mytilus edulis[J].Histochem J，1990，22（11）：595-603.

[15] COVELLI S，F(xiàn)AGANELI J，HORVAT M，et al. Mercury contamination of coastal sediments as the result of long-term cinnabar mining activity（Gulf of Trieste，northern Adriatic sea）[J].Applied Geochemistry，2001，16（5）：541-558.

[16] 黃亮華，李浩洋，李? 彬，等.裂壺藻對(duì)刺參生長、免疫及消化酶的影響[J].漁業(yè)科學(xué)進(jìn)展，2014，35（3）：91-97.

[17] 馮? 偉.維生素C、E和裂壺藻對(duì)中國對(duì)蝦非特異性免疫功能影響的研究[D].上海：上海海洋大學(xué)，2011.

[18] 高前欣.水產(chǎn)動(dòng)物中類胡蘿卜素的生理功能[J].中國飼料，2005（11）：29-30.

[19] 黃? 凱，楊鴻昆，甘? 暉，等.飼料中添加膽堿預(yù)防羅非魚脂肪肝病變的作用[J].中國水產(chǎn)科學(xué)，2007，14（2）：257-262.

[20] 張? 燕.兩種微藻粉替代魚油對(duì)星斑川鰈幼魚生長、體組成、生理生化與免疫影響的研究[D].上海：上海海洋大學(xué)，2017.