可樂(lè)定及賽庚啶的檢測(cè)技術(shù)研究進(jìn)展

張瑩雪

（鄭州市獸藥飼料監(jiān)察所，河南 鄭州 450000）

在飼糧中添加可樂(lè)定（Clonidine），可降低脂肪比率，提高瘦肉率，改善肉類(lèi)品質(zhì)，并能促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)發(fā)育。賽庚啶（Cyproheptadine）能夠刺激食欲，增加體重?；诳蓸?lè)定和賽庚啶的這些特性，一些養(yǎng)殖企業(yè)將其作為非法飼料添加劑用于促進(jìn)畜禽生長(zhǎng)。2010年我國(guó)發(fā)布的《禁止在飼料和動(dòng)物飲水中使用的物質(zhì)》將可樂(lè)定和賽庚啶列入其中。

1 可樂(lè)定與賽庚啶的理化特性

樂(lè)定（Clonidine）分子式C9H9C12N3，分子量230，屬于咪唑啉衍生物，具有激發(fā)與促進(jìn)垂體增加分泌生長(zhǎng)激素(GH)的作用，因此可促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)，改善畜產(chǎn)品品質(zhì)。其缺點(diǎn)是副作用大、易積累，消費(fèi)者一旦食用含有可樂(lè)定殘留的動(dòng)物源性食品，將會(huì)危及自身健康。

賽庚啶（Cyproheptadine）分子式為C21H21N，分子量為287。賽庚啶與動(dòng)物下丘腦食欲中樞的5-羥色胺起到拮抗作用，從而抑制刺激動(dòng)物食欲，使其體重增加，在動(dòng)物飼料中的違法使用，與“瘦肉精”鹽酸克侖特羅的效果類(lèi)似，被稱(chēng)為新型“瘦肉精”。

2 可樂(lè)定和賽庚啶的檢測(cè)方法

2.1 可樂(lè)定測(cè)定方法

無(wú)論是飼料樣品還是動(dòng)物組織、血液、尿液等，均可使用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定可樂(lè)定的含量，該檢測(cè)方法的優(yōu)點(diǎn)為靈敏度較高、選擇性好、檢出和定量限低、準(zhǔn)確度高。相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定的缺點(diǎn)為前處理繁瑣、試驗(yàn)耗時(shí)長(zhǎng)、儀器價(jià)格昂貴、檢測(cè)成本高等，不適用于普通養(yǎng)殖廠及現(xiàn)場(chǎng)快篩。因此，根據(jù)免疫競(jìng)爭(zhēng)原理，采用抗原抗體特異性反應(yīng)，建立了適合基層推廣普及，同時(shí)也適合快篩的酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒，避免了上述液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定的缺點(diǎn)。

2.2 賽庚啶測(cè)定方法

已有的賽庚啶殘留量的測(cè)定方法主要是利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法，待測(cè)樣品主要是飼料、豬肉和豬毛。該方法準(zhǔn)確度和靈敏度較高，具有較強(qiáng)的可行性和實(shí)用性。尤其是采用豬毛作為樣品，具有易采集，能夠?qū)崟r(shí)監(jiān)控等優(yōu)點(diǎn)，彌補(bǔ)了常規(guī)豬肉、豬血等檢測(cè)技術(shù)的不足，是完善賽庚啶檢測(cè)技術(shù)的一大進(jìn)步。

3 同時(shí)檢測(cè)可樂(lè)定和賽庚啶的方法

目前，已有的可樂(lè)定及賽庚啶含量檢測(cè)方法主要涉及的待測(cè)樣品有飼料、飲水、動(dòng)物尿液、動(dòng)物血液、畜產(chǎn)品及動(dòng)物組織等。

3.1 飼料中可樂(lè)定及賽庚啶的測(cè)定

3.1.1 高效液相色譜法 吳建平等建立了適用于同時(shí)檢測(cè)飼料（包括預(yù)混飼料、濃縮飼料和配合飼料）中可樂(lè)定及賽庚啶違法添加的高效液相色譜法，該方法具有較高的精密度、準(zhǔn)確度和特異性，并可初步定性。[1]

3.1.2 超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法 李丹妮等利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜來(lái)檢測(cè)飼料中鹽酸可樂(lè)定和鹽酸賽庚啶的非法添加量。樣品經(jīng)酸性甲醇提取，濃縮后用乙腈-0.2%甲酸溶解，經(jīng)超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜在多反應(yīng)檢測(cè)(MRM)模式下測(cè)定。結(jié)果顯示鹽酸可樂(lè)定和鹽酸賽庚啶在0.02～1.0 mg/kg添加水平下，加標(biāo)回收率為70%～110%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于10%(n=6)；該方法對(duì)動(dòng)物飼料中鹽酸可樂(lè)定和鹽酸賽庚啶的定量限為0.02 mg/kg(S/N＞10)，檢出限為0.01 mg/kg(S/N＞3)。

3.1.3 國(guó)家標(biāo)準(zhǔn) 農(nóng)業(yè)部1486號(hào)公告-2-2010規(guī)定了采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜的方法測(cè)定飼料中可樂(lè)定和賽庚啶，將飼料試樣經(jīng)鹽酸甲醇混合溶液提取后，用混合型陽(yáng)離子交換柱凈化，洗脫液蒸干后用含0.2%甲酸的乙腈水溶液溶解，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜儀進(jìn)行檢測(cè)。該標(biāo)準(zhǔn)的檢測(cè)限為0.01 mg/kg，定量限為0.02 mg/kg。

3.2 畜產(chǎn)品中可樂(lè)定及賽庚啶的殘留測(cè)定

3.2.1 豬肉中可樂(lè)定及賽庚啶的殘留測(cè)定 將豬肉樣品用0.1 mol/L HCl酸化的甲醇(VCH3OH/VHCl=80∶20)提取，WCX固相萃取小柱凈化，利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜來(lái)測(cè)定含量。豬肉樣品中鹽酸可樂(lè)定和鹽酸賽庚啶的檢出限均為為0.2 μg/L，定量限均為0.6 μg/L，批內(nèi)和批間的精密度均小于10%，回收率均在85%～100%。該方法的優(yōu)點(diǎn)為操作簡(jiǎn)單、檢出限和定量限低、試驗(yàn)時(shí)間短、內(nèi)標(biāo)回收率高，提供了一種豬肉中可樂(lè)定和賽庚啶殘留量的檢測(cè)方法。

3.2.2 豬可食組織（豬肉、豬肝和豬腎）中可樂(lè)定及賽庚啶的殘留測(cè)定 應(yīng)用QuEChERS技術(shù)進(jìn)行前處理，利用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜確定豬可食組織中可樂(lè)定和賽庚啶的殘留量，該方法能較好的凈化基質(zhì)，試驗(yàn)操作步驟簡(jiǎn)便，檢測(cè)效率得到了大大的提升。對(duì)豬可食組織中可樂(lè)定和賽庚啶在添加濃度范圍為1～50 μg/kg內(nèi)的回收率均在62%～121%之間，相對(duì)偏差小于10%，檢出限為0.5 μg/kg。[2]

3.3 其他部位中可樂(lè)定及賽庚啶的殘留測(cè)定

可樂(lè)定和賽庚啶等藥物進(jìn)入到動(dòng)物體內(nèi)之后，會(huì)存在于動(dòng)物的毛發(fā)、血液、尿液中，因此可將方便易取的動(dòng)物毛發(fā)、血液、尿液等作為可樂(lè)定和賽庚啶的待檢樣品，從而及時(shí)排查食品安全隱患，保障食品安全，并可以用于生豬屠宰前的快速監(jiān)控。

3.3.1 豬毛中可樂(lè)定及賽庚啶的殘留測(cè)定 檢測(cè)毛發(fā)中的藥物濃度可間接反映藥物在動(dòng)物組織中的積累，且毛發(fā)易獲得，能夠作為測(cè)定可樂(lè)定及賽庚啶藥物殘留濃度的可靠待檢樣本。其中前處理的方法是利用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液溶解樣品，乙腈提取，液質(zhì)聯(lián)用測(cè)定。該方法的優(yōu)點(diǎn)是試驗(yàn)操作簡(jiǎn)便且快捷，檢出限和定量限低，內(nèi)標(biāo)回收率高。[3]

3.3.2 豬尿液中可樂(lè)定及賽庚啶的殘留測(cè)定 陳其煌建立了檢測(cè)尿液中可樂(lè)定和賽庚啶殘留量的高效液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法，待測(cè)樣品用高氯酸溶液酸解及沉淀蛋白質(zhì)，用乙酸乙酯—異丙醇提取，經(jīng)凈化、富集后，利用UPLC-MS/MS進(jìn)行定性和定量分析。鹽酸可樂(lè)定和鹽酸賽庚啶在1.0～1 000 μg/L的范圍內(nèi)線性關(guān)系良好（r≥0.999 5），在0.2 、2.0 、10.0 μg/L添加水平下的回收率為83.5%～95.1%，定量限（以信噪比＞10計(jì)）為0.2 μg/L。該方法的優(yōu)點(diǎn)為樣品前處理步驟簡(jiǎn)單，有機(jī)溶劑使用量少，檢出限和定量限低，精密度和準(zhǔn)確度高，可實(shí)現(xiàn)宰前檢測(cè)，及時(shí)排除食品安全隱患，保障食品質(zhì)量安全。[4]

3.3.3 豬血液中可樂(lè)定及賽庚啶的殘留測(cè)定 測(cè)定活體動(dòng)物的血液可有效解決獸藥殘留檢測(cè)的時(shí)滯性問(wèn)題。楊挺等采用了高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定豬血中的可樂(lè)定和賽庚啶的殘留量，二者的檢出限和定量限均分別為0.2 μg/L和0.6 μg/L，批內(nèi)和批間的精密度均小于10%，回收率均在85%～110%之間。該方法簡(jiǎn)便、快捷、檢出限低、回收率高。[5]

4 小結(jié)

隨著人們生活水平的提高，人們對(duì)食品安全問(wèn)題越來(lái)越重視，其中獸藥的違規(guī)使用和非法添加嚴(yán)重威脅食品安全和消費(fèi)者健康?？蓸?lè)定和賽庚啶的違法使用造成了新的食品安全問(wèn)題，這就要求相應(yīng)的監(jiān)測(cè)機(jī)構(gòu)必須要選擇合適的樣品種類(lèi)及檢測(cè)方法，及時(shí)、準(zhǔn)確、快速的檢測(cè)出可樂(lè)定和賽庚啶的非法添加，以保障食品安全。