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    血漿雙調(diào)蛋白水平在肝炎、肝硬化、肝癌患者中的變化及意義

    2019-03-18 23:01:12韓少靜李帆張宏偉李亞飛閆華楠郭永澤董慧聰秦佳麗
    肝臟 2019年2期
    關(guān)鍵詞:肝炎肝病生長(zhǎng)因子

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    在慢性肝病進(jìn)展為肝硬化甚至肝癌的過(guò)程中有多種細(xì)胞因子參與。其中表皮生長(zhǎng)因子 (epidermal growth factor , EGF)和肝細(xì)胞的生長(zhǎng)、再生及肝臟膠原纖維合成密切相關(guān)。已有研究發(fā)現(xiàn),在慢性肝損傷中均有EGF異常表達(dá)。雙向調(diào)節(jié)蛋白 (amphiregulin ,AR)與EGF有較高的序列同源性,均是表皮生長(zhǎng)因子受體(epidermal growth factor receptor,EGFR)通路上游配體,可以促進(jìn)上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞增殖,與肝臟膠原纖維合成有一定的相關(guān)性。本文通過(guò)檢測(cè)慢性肝病及肝癌患者血漿AR的表達(dá)水平,以探討其臨床意義。

    材料和方法

    一、標(biāo)本來(lái)源及研究對(duì)象

    研究對(duì)象選取2018年3月至2018年6月就診于河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院符合2015年中華醫(yī)學(xué)會(huì)肝病學(xué)分會(huì)修訂的《慢性乙型肝炎防治指南》[1]及2017年《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》[2]中的診斷依據(jù)的慢性肝病及肝癌患者58例,及健康體檢者(血常規(guī)、生化正常,AFP陰性,無(wú)各型肝炎、肝硬化,無(wú)各大系統(tǒng)重大疾病史)11例作為對(duì)照組。均除外其他系統(tǒng)原發(fā)性疾病及其他部位腫瘤。其中,慢性肝炎患者12例,慢性肝炎后肝硬化30例,原發(fā)性肝癌患者16例。該研究得到河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn),所有研究對(duì)象均自愿入組,并簽署知情同意書。

    二、實(shí)驗(yàn)方法

    (一)所有患者均于清晨空腹抽取肘靜脈血2 mL,置于5%乙二胺四乙酸二鈉( 5%EDTA·K 2)抗凝管中,收集后30 min內(nèi)以1 000×g離心15 min去除顆粒,取血漿樣本約1 mL,分裝置于-80℃的低溫冰箱中保存待測(cè),以保證表皮生長(zhǎng)因子家族成員的生物學(xué)活性,檢測(cè)前于室溫完全復(fù)溶后,嚴(yán)格按照說(shuō)明書要求進(jìn)行操作。

    (二)其他臨床指標(biāo)的檢測(cè)如:肝功能、血脂、血常規(guī)、凝血六項(xiàng)、腫瘤五項(xiàng)(或甲胎蛋白)、輸血前檢查(或乙肝、丙肝標(biāo)志物),均有河北工程大學(xué)附屬醫(yī)院采用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)完成。

    三、統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

    結(jié) 果

    (一)各組研究對(duì)象一般性資料

    四組間男女構(gòu)成比經(jīng)卡方檢驗(yàn)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.619 )。對(duì)照組、慢性肝炎組、肝硬化組及肝癌組年齡分別為(58.00±9.95),(51.67±14.59),(57.90±13.04),(59.94±9.48),經(jīng)方差分析,四組間年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.337)。

    (二)對(duì)照組、慢性肝炎組、肝硬化組、肝癌組血漿中AR濃度

    (三)生化指標(biāo)檢測(cè)

    討 論

    AR含有 84 個(gè)氨基酸的糖蛋白,是表皮生長(zhǎng)因子家族成員之一,最早由 Shoyab 從人乳腺癌細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)并分離出來(lái),因其同時(shí)具有抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)和促進(jìn)成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)這兩種相反功能而得名。目前研究已對(duì)AR通過(guò)激活相應(yīng)受體EGFR及下游多條信號(hào)通路在腫瘤增殖、凋亡、侵襲等過(guò)程起重要調(diào)控作用有了一定的認(rèn)識(shí)[1]。EGFR在肝癌發(fā)生發(fā)展中起重要作用。研究表明正常肝細(xì)胞中EGFR呈陰性,在急慢性肝損傷時(shí)肝細(xì)胞組織中EGFR的上調(diào),如在肝硬化和肝細(xì)胞癌組織中EGFR的過(guò)度表達(dá)和活化[2-5]。AR作為激活EGFR配體,除有其他配體相同的促肝細(xì)胞增殖效應(yīng)外,還有不可被代償?shù)淖饔肹6,7]。Castillo等[8]證明了重組AR誘導(dǎo)EGFR依賴性細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的治療可以刺激肝癌細(xì)胞的增殖并抵抗TGF -β誘導(dǎo)的凋亡,還觀察到AR能夠通過(guò)激活EGFR刺激其自身在肝癌細(xì)胞中的基因表達(dá),藥物抑制AR脫落或干擾AR結(jié)合,包括使用中和抗體,導(dǎo)致EGFR信號(hào)和細(xì)胞增殖減少。AR基因和EGFR一樣在健康人肝臟中檢測(cè)不到[9]。AR在部分肝切除術(shù)后的再生肝中容易誘導(dǎo)產(chǎn)生,對(duì)正常肝細(xì)胞起有絲分裂和抗凋亡作用[10,11]。AR在細(xì)胞外基質(zhì)或血液循環(huán)中發(fā)揮重要作用[12]。Han等[13]研究發(fā)現(xiàn)肝癌患者AR高于正常人及良性肝病患者,而良性肝病患者與正常人無(wú)明顯差異。Ahn等[11]發(fā)現(xiàn),和慢性肝炎/肝硬化病人相比,肝細(xì)胞癌AR表達(dá)上調(diào)。試驗(yàn)觀察到了在人類肝硬化及大鼠實(shí)驗(yàn)性肝硬化中AR基因的表達(dá)上調(diào)。這些結(jié)果提示AR可能起到了促進(jìn)肝細(xì)胞增生及過(guò)度增殖的作用。目前國(guó)內(nèi)外關(guān)于該因子研究較少,關(guān)于AR及AR在慢性肝炎、肝硬化及肝癌病中的變化及相應(yīng)的作用機(jī)制仍在不斷討論。

    本研究發(fā)現(xiàn),良性肝病組(慢性肝炎、肝硬化)及肝癌組外周血中AR含量與健康對(duì)照組相比均明顯升高(P<0.001),提示AR可能參與此類疾病的發(fā)生發(fā)展,其可能的機(jī)制為:AR是表皮生長(zhǎng)因子家族成員,與表皮生長(zhǎng)因子有相似的生物學(xué)功能,主要表現(xiàn)在促進(jìn)上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的增殖、再生及肝臟膠原纖維合成。健康人中不表達(dá),當(dāng)肝細(xì)胞受損時(shí),AR表達(dá)升高,促進(jìn)細(xì)胞增殖修復(fù)損傷的肝臟,當(dāng)機(jī)體中過(guò)度增殖,轉(zhuǎn)化為肝癌時(shí),抑癌基因表達(dá)弱于原癌基因,抑癌基因Ras相關(guān)結(jié)構(gòu)域家族蛋白1A(rasassociation domain family 1 isoform A,RASSF1A)表達(dá)下調(diào),與此同時(shí)AR表達(dá)上調(diào)。RASSF1A能夠通過(guò)活化Hippo通路抑制Yes相關(guān)蛋白和AR的表達(dá),從而誘導(dǎo)肝細(xì)胞癌細(xì)胞凋亡,抑制細(xì)胞增殖[1]。EGFR是原癌基因表達(dá)產(chǎn)物,AR作為配體激活EGFR,EGFR活化后可促進(jìn)腫瘤細(xì)胞增殖、生長(zhǎng)、侵襲及轉(zhuǎn)移,同時(shí)還可抑制腫瘤細(xì)胞凋亡[14-16]。具體機(jī)制還有待進(jìn)一步研究。

    同時(shí)研究還發(fā)現(xiàn)肝病的嚴(yán)重程度即肝組織增殖程度與血漿AR水平存在相關(guān)性。在一定范圍內(nèi),肝病嚴(yán)重程度與AR含量呈正相關(guān),肝組織的炎性反應(yīng)越重,組織增生纖維化程度越重,AR含量也隨之上升。

    試驗(yàn)數(shù)據(jù)還顯示,ALT及AST與AR的含量無(wú)明顯的相關(guān)性,從某種程度上ALT、AST是反映肝臟炎性活動(dòng)的重要指標(biāo),但部分患者肝臟炎性活動(dòng)時(shí)二者并無(wú)升高,嚴(yán)重肝衰竭、肝硬化、肝細(xì)胞壞死患者中二者與肝臟炎性程度也不成正比。這也許與本研究未發(fā)現(xiàn)相關(guān)性有一定關(guān)系。

    綜上所述,AR可能與肝病的嚴(yán)重程度有一定相關(guān)性,可以在一定程度上反映疾病程度,測(cè)定血漿AR有助于判斷患者肝臟損傷程度及其預(yù)后,AR是否能成為一個(gè)有價(jià)值的肝病診療檢測(cè)指標(biāo)可做進(jìn)一步研究。

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