8種常見鮮中草藥MIC測(cè)定

為了研究新鮮中草藥對(duì)細(xì)菌的抑制作用，選取了常見的8種鮮中草藥獲取藥汁并且運(yùn)用煮沸和低溫超速離心進(jìn)行處理對(duì)其MIC測(cè)定。MIC測(cè)定結(jié)果顯示新鮮酢漿草對(duì)大腸桿菌和葡萄球菌的最小抑菌濃度分別為2.5 g/ml、1.25 g/ml。

一、材料與方法

1.主要藥品?？噘u菜、酢漿草、車前草、金銀花、蒲公英、板藍(lán)根、魚腥草、蒼耳子。

2.主要儀器。BCD-555WKM華凌電冰箱、GNP-9 160型隔水式恒溫培養(yǎng)箱、GZX-9 140 MBE數(shù)顯鼓風(fēng)干燥箱、LDZX-50KBS立式壓力蒸汽滅菌器、SWCJ-2F潔凈工作臺(tái)。

3.試驗(yàn)菌株。大腸桿菌和葡萄球菌。

4.試驗(yàn)方法。（1）鮮中草藥原液的提取與處理。將選取的鮮中草藥（苦賣菜500 g、車前草400 g、金銀花300 g、板藍(lán)根300 g、蒼耳子400 g、酢漿草500 g、魚腥草500 g、蒲公英400 g），洗凈剪碎，碾碎或打成漿狀，用消毒紗布過濾，濾除藥渣等雜質(zhì)，獲得藥汁原液，4℃保存?zhèn)溆茫ǘ唐趦?nèi)使用）；

藥汁酸堿度的測(cè)定：運(yùn)用 0.5～ 5.0和 5.0～ 7.0的pH精密試紙，測(cè)定鮮中草藥汁pH；

藥汁的處理：①加熱消毒法：將藥汁加熱70℃～80℃，保持3 min，自然冷卻，4℃保存?zhèn)溆?；②低溫高速離心法：將藥汁原液4℃，12 000 r/min，離心10 min，4℃保存?zhèn)溆茫?/p>

（2）干品中藥提取物的制備。每種中藥均采用水煎法制備水提物?？噘u菜、車前草、金銀花、板藍(lán)根、蒼耳子、酢漿草、魚腥草、蒲公英各稱取50 g，分別置于500 ml燒杯中，加蒸餾水300 ml浸泡30 min，加熱至沸騰，然后改用文火繼續(xù)煎煮，30 min后趁熱過濾(4層紗布)，收集濾液。藥渣中再加蒸餾水200 ml，同法煎煮、過濾。將兩次濾液相混，水浴濃縮后涼至室溫，用100 ml容量瓶定容后進(jìn)行高壓滅菌，制得各濃度為0.5 g/ml的水煎液，4℃保存，備用，并測(cè)定其pH值；

（3）鮮中草藥原液的稀釋。制備的干品水煎液的濃度為0.5 g/mL，根據(jù)每種鮮中草的折干率（酢漿草、金銀花和蒲公英的折干率約為5∶1，魚腥草和車前草的折干率約為4∶1，苦荬菜和板藍(lán)根的折干率約為3∶1，蒼耳子的折干率約為2∶1）將鮮中草藥物原液用滅菌蒸餾水進(jìn)行稀釋，使終濃度與干品水煎液濃度一致，4℃?zhèn)溆茫?/p>

（4）試驗(yàn)菌液的制備。將大腸桿菌和葡萄球菌的純培養(yǎng)物接種于含5.0 ml的血清肉湯培養(yǎng)基的試管中，37℃培養(yǎng)24 h，用滅菌生理鹽水稀釋至其濁度0.5麥?zhǔn)蠁挝唬藭r(shí)肉湯中細(xì)菌數(shù)約1.5×l08CFU/ml。并且將兩種細(xì)菌接種于pH為1.7和4.5的普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中，培養(yǎng)24 h；

（5）MIC值的測(cè)定。取培養(yǎng)24 h的目標(biāo)菌，接種營(yíng)養(yǎng)肉湯液體培養(yǎng)基中，再培養(yǎng)24 h。借助比濁管將菌懸液濃度調(diào)整為0.5麥?zhǔn)媳葷針?biāo)準(zhǔn)。按照表1進(jìn)行MIC值的測(cè)定。

二、試驗(yàn)結(jié)果

1.中藥藥液pH值。見表2。

2.鮮中草藥MIC結(jié)果。酢漿草MIC值運(yùn)用常量肉湯二倍稀釋法得出試驗(yàn)結(jié)果：酢漿草對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度為2.5 g/ml；對(duì)葡萄球菌的最小抑菌濃度為1.25 g/ml。如圖 1 所示：

三、分析與討論

酢漿草，分為紅花、黃花和白花3個(gè)品種。其別名：酸味草、鳩酸和酸醋醬等，為多年生草本植物，叢生，春夏秋不間斷開花，以春秋涼爽時(shí)間開花最盛。主要功效：全草入藥，能解熱利尿，消腫散瘀；莖葉含草酸，用以磨鏡或擦銅器，使其具有光澤。但牛羊食其過多可中毒致死。酢漿草藥汁pH為1.7，本課題中大腸桿菌可在pH1.7的普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中生長(zhǎng)，這說明新鮮酢漿草藥汁對(duì)大腸桿菌的抑制作用并非酸度過高導(dǎo)致，而且陳卓逐等研究發(fā)現(xiàn)，具有耐強(qiáng)酸能力的大腸桿菌在酸性脅迫條件下更易生存；葡萄球菌不能在pH1.7的普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中生長(zhǎng)，但能夠在pH4.5的普通營(yíng)養(yǎng)肉湯中生長(zhǎng)。譚萍等對(duì)酢漿草的成分進(jìn)行了提取測(cè)定，發(fā)現(xiàn)黃酮的提取率是最高的，達(dá)到22.58 mg/g。而在眾多對(duì)黃酮類化合物的研究中發(fā)現(xiàn)，黃酮是一類具有消炎、抗菌作用和抗癌抗腫瘤的天然多酚類化合物，因此，酢漿草具有很強(qiáng)的生理活性，說明了酢漿草對(duì)葡萄球菌的抑制并非酸度過高導(dǎo)致而是由這類化合物引起的。

表1 鮮中草藥MIC值測(cè)定方法

表2 鮮品和干品中草藥藥液的pH值

圖1 鮮酢漿草對(duì)大腸桿菌(左)和葡萄球菌(右)的MIC測(cè)定結(jié)果

四、結(jié)論

新鮮酢漿草的MIC值：新鮮酢漿草藥物原液對(duì)葡萄球菌的最小抑菌濃度為1.25 g/ml，對(duì)大腸桿菌的最小抑菌濃度為 2.50 g/ml。